miR-155在结肠癌组织中表达的临床病理意义

目的:探讨结肠癌组织及细胞株中microRNA-155(miR-155)表达的临床病理意义.方法:采用RT-qPCR检测40例结肠癌组织及癌旁组织、结肠癌细胞株中miR-155的mRNA的表达,并对其临床病理指标进行分析,分析抑制miR-155表达对结肠癌细胞增殖、克隆形成及凋亡影响.结果:RT-qPCR检测结果表明40例结肠癌组织中miR-155相对表达量明显高于癌旁组织(P<0.01).不同分化结肠癌细胞miR-155相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),其中低分化结肠癌细胞中表达均高于中、高分化结肠癌细胞(P<0.05~P<0.01).miR-155的异常高表达与病人肿瘤较大、分化程度差、淋巴结发生转移情况及远处有转移均有关(P<0.05~P<0.01),而与年龄和性别无关(P>0.05).抑制miR-155可明显抑制结肠癌细胞增殖、克隆形成.结论:结肠癌组织中高表达miR-155可以作为预测恶性程度、淋巴转移的有效指标,miR-155在结肠癌病人的临床靶向治疗中具有一定的价值.     

金纳米颗粒表面催化发夹组装无酶信号放大快速荧光法检测miRNA-721

目的 构建一种自催化发夹组装（CHA）无酶信号放大的靶标快速荧光法,用于检测靶标miRNA。方法 首先在金纳米颗粒（AuNPs）表面修饰5-羧基荧光素（FAM）标记的DNA发夹探针H1,H1的荧光被金纳米粒子猝灭。加入靶标miRNA会导致AuNPs上的H1标记荧光素远离AuNPs而发射荧光,随后H1和H2之间发生循环自组装,靶标循环被利用,导致荧光信号放大。将20 μL探针AuNPs-H1,50 μL 3 μmol/L探针 H2（退火缓冲液为20 mmol/L Tris-HCl,100 mmol/L NaCl,5 mmol/L MgCl2,pH 7.4）,与50 μL不同浓度的miRNA-721（0.1 ~ 5 μmol/L）在30℃下共反应20 min,最后在480 nm激发波长下测定体系的荧光强度。结果 以急性心肌炎生物标志物miRNA-721为模型靶标,在优化的实验条件下得到520 nm处的相对荧光强度变化值（?F = F – F0）与miRNA-721浓度呈良好的线性关系,拟合线性方程?F = 29232lgC – 52435（R2 = 0.9910）。该荧光法检测限为1.23 nmol/ L。在正常人血清中的加标回收率为92.71% ~ 104.02%。一次完整的miRNA分析可以在20 min内完成。结论 该方法可用于生物样品中miRNA-721的检测,为急性心肌炎的早期诊断提供了一种快速检测手段。     

乳腺肿瘤患者血清miRNA-222、miRNA-21检测的临床意义

目的 探讨血清miRNA-222、miRNA-21水平对于乳腺肿瘤患者的临床意义.方法 选择经病理确诊并分类的35例乳腺癌患者和32例乳腺良性肿瘤患者;同时选35例女性健康体检者作为对照.采用RT-PCR的方法测定所有受试者的血清miRNA-222、miRNA-21的相对表达水平,分析血清miRNA-222、miRNA...     

长链非编码 RNALOC100288637在原发性肝癌中差异性表达的生物学意义及相关机制研究

目的：研究长链非编码 RNA （LncRNA ） LOC100288637在肝癌中的表达差异,对肝癌细胞增殖的影响及相关机制。方法分析GEO数据集GSE58043和GSE10694,得出LOC100288637及hsa‐miR‐101‐3p在肝癌组织中差异表达,RNA‐hy‐brid分析LOC100288637与hsa‐miR‐101‐3p的结合具有可能性。逆转录‐聚合酶链式反应在组织和细胞水平检测LOC100288637表达量。荧光原位杂交观察LOC100288637在细胞中的定位。敲低LOC100288637后CCK‐8检测细胞增殖情况。过表达hsa‐miR‐101‐3p后,检测 LOC100288637的变化。结果 LOC100288637在肝癌组织中的表达量高于癌旁组织（ P＜0．05）;LOC100288637在肝癌细胞系中的表达量高于肝细胞系（P＜0．05）。LOC100288637在 HepG2细胞核质均有表达,以细胞质居多。敲低LOC100288637后 HepG2细胞增殖活性降低（P＜0．01）。过表达hsa‐miR‐101‐3p后,LOC100288637表达量下降（P＜0．05）。结论 LncRNA LOC100288637可能在肝癌发生,发展过程中起重要作用并接受hsa‐miR‐101‐3p靶向调控影响肝癌细胞的增殖。     

微小RNA-182与BRCA1 mRNA在非小细胞肺癌中表达的相关性研究

目的:探讨微小RNA(miRNA)-182及BRCA1 mRNA在非小细胞肺癌及癌旁组织中的表达水平差异及二者相关性.方法:采用实时定量PCR方法检测50例非小细胞肺癌及其癌旁组织标本中miRNA-182及BRCA1 mRNA的表达水平,并探讨其相关性.结果:50例癌组织中miRNA-182和BRCA1 mRNA相对表达量均明显低于癌旁组织(P<0.01);二者相对表达量无相关关系(P>0.05).结论:miRNA-182和BRCA1 mRNA与非小细胞肺癌的发生可能相关,但二者之间未见相互调控关系.     

高尿酸通过miR-663下调转化生长因子β1抑制内皮细胞迁移

目的探讨高尿酸通过miR-663影响内皮细胞迁移功能的机制。方法培养人脐静脉内皮细胞系（EA．hy926）,用600μmol／L尿酸孵育48h,实时定量PCR检测miR-663的水平,并检测高尿酸患者血清中miR-663水平;利用双荧光素酶试验预测并验证miR-663的靶基因;检测高尿酸条件下内皮细胞中转化生长因子β1（transforming growth fator beta1,TGF—β1）的表达水平,利用miR-663抑制物、TGFB1siRNA转染及划痕实验观察高尿酸如何通过miR-663及其靶基因影响内皮细胞的迁移功能。结果高尿酸培养条件下内皮细胞中miR-663表达水平明显升高,高尿酸血症患者血清中miR-663的水平也高于正常人;双荧光素酶试验结果表明TGFB1的翻译水平受miR-663直接调控;高尿酸能明显抑制细胞的迁移能力,而高尿酸条件下TGF-β1的表达水平也明显下降,转染miR-663抑制物后,TGF-β1表达水平升高,内皮细胞迁移能力也明显改善,但是利用siRNA抑制TGF—β1的表达后,miR-663抑制物不能再促进内皮细胞的迁移。结论高尿酸通过miRNA-663下调TGF—β1而抑制细胞迁移。     

miRNA-196a与宫颈癌的关系研究

目的：探讨miRNA-196a与宫颈癌的相关性.方法：采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测35例宫颈癌组织、35例宫颈上皮内瘤样病变组织（CIN）和40例非癌疾病切除的正常宫颈组织中miRNA-196a的表达,分析miRNA-196a与宫颈癌的发生发展的相关性;并通过转染的方法将miRNA-196a转入宫颈癌细胞株Siha中,观察其对Siha细胞迁移和侵袭的影响.结果：相对于CIN组织和非癌疾病切除的正常宫颈组织,宫颈癌组织中miRNA-196a的表达水平明显上调,差异有统计学意义（P ＜0.01）;miRNA-196a的表达水平与患者有无淋巴结转移、临床病理分级、临床分期和间质浸润深度密切相关（P＜ 0.01）,但与患者年龄、肿瘤直径大小和绝经与否均无明显关系（P＞0.05）;转染miRNA-196a可促进Siha细胞的迁移和侵袭.结论：miRNA-196a与宫颈癌的发生发展、迁移、侵袭密切相关.     

miR-335启动子活性鉴定及药物干预

目的:探讨miR-335上游片段是否具有转录活性以及罗格列酮和胰岛素对miR-335启动子区域转录活性的影响。方法:利用PCR技术克隆位于MEST内含子中miR-335上游区域的不同片段,采用双荧光素酶报告基因系统鉴定其转录活性。使用1μmol/L的罗格列酮及不同浓度的胰岛素进行干预并观察转录活性有无变化。结果:不同的miR-335启动子区域转录活性不同,在miR-335上游约600个碱基区域活性最高。未使用药物干预组细胞中,miR-335启动子区域活性的表达与基础值相比差异无统计学意义(P>0.05);使用1μmol/L罗格列酮干预后,miR-335启动子区域活性显著升高(P<0.01),使用10~12 mol/L的胰岛素干预时,启动子活性升高,但当胰岛素浓度上升后,启动子活性变化并没有统计学差异。结论:miR-335上游约600个碱基为启动子关键区域,同时,miR-335有可能通过自身的转录调控机制参与肥胖与胰岛素抵抗的发生发展。     

Antimicrobial susceptibility of common pathogens isolated from postoperative intra-abdominal infections in Japan

The principle of empirical therapy for patients with intra-abdominal infections (IAI) should include antibiotics with activity against Enterobacteriaceae and Bacteroides fragilis group species. Coverage of Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, and Enterococcus faecalis is also recommended for hospital-associated IAI. A nationwide survey was conducted to investigate the antimicrobial susceptibility of pathogens isolated from postoperative IAI. All 504 isolates were collected at 26 institutions and referred to a central laboratory for susceptibility testing. Lower susceptibility rates to ciprofloxacin and cefepime were demonstrated in Escherichia coli. Among E. coli, 24.1% of strains produced extended-spectrum β-lactamase (ESBL). Carbapenems, piperacillin/tazobactam, cephamycins/oxacephem, aminoglycosides, and tigecycline had high activity against E. coli, including ESBL-producing isolates. Among E. cloacae, low susceptibility rates to ceftazidime were demonstrated, whereas cefepime retained its activity. P. aeruginosa revealed high susceptibility rates to all antimicrobials tested except for imipenem. Among B. fragilis group species, low levels of susceptibility were observed for cefoxitin, moxifloxacin, and clindamycin, and high susceptibility rates were observed for piperacillin/tazobactam, meropenem, and metronidazole. Ampicillin, piperacillin, and glycopeptides had good activity against E. faecalis. Imipenem had the highest activity against E. faecalis among carbapenems. In conclusion, we suggested the empirical use of antimicrobials with the specific intent of covering the main organisms isolated from postoperative IAI. Piperacillin/tazobactam, meropenem, or doripenem, are appropriate in critically ill patients. Combination therapy of cefepime (aztreonam in patients with β-lactam allergy) plus metronidazole plus glycopeptides, imipenem/cilastatin or cephamycins/oxacephem plus ciprofloxacin plus metronidazole are potential therapeutic options.     

miRNA-126-3p 与先天性心脏病肺动脉高压发病机制相关性的临床研究

目的：探讨 miRNA-126-3p 与肺动脉高压（以下简称肺高压）发病机制的相关性。方法选取25例先天性心脏病患者,其中,肺高压患者11例,对照组14例,采用 qRT-PCR 法检测其肺组织 miRNA-126-3p 的表达,并采用 starBase 进行靶基因预测,并从 mRNA 水平和蛋白水平进行验证。结果肺高压患者与对照组在年龄、性别、生化指标检查等方面比较差异无统计学意义（P＞0．05）;肺高压患者 miRNA-126-3p 表达水平与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01）;生物信息学预测发现 miRNA-126-3p 的生物学功能主要与结合蛋白、信号转导、细胞分化、调控细胞形态、调控 MAPK 和胰岛素受体信号通路等有关,其靶基因主要有 VEGFA 、SPRED1、PIK3R2等;肺高压组的 VEGFA 表达在 mRNA 水平和蛋白水平与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01）;miRNA-126-3p 与 VEGFA 呈现正相关（P＜0．01）。结论 miRNA-126-3p 可能通过调控 VEGFA 参与先天性心脏病相关性肺动脉高压发病。