基于微流控核酸等温扩增的 登革病毒现场快速检测技术研究

[摘要]?目的?结合环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）和微流控芯片技术，建立一种适合现场快速检测登革病毒的方法。方法?利用RT-LAMP，针对登革病毒基因组中3’非编码区中特异性序列进行扩增，建立基于微流控芯片技术的LAMP检测方法，优化检测体系，并对该方法的灵敏性和特异性进行评估。结果?基于LAMP 和微流控芯片技术的登革病毒检测方法，通过对病毒模板进行扩增，发现与其他病毒无交叉反应，特异性良好；同时，结果显示该方法对登革病毒检测灵敏性可达61.2 pg/μl，与实时荧光定量PCR仪所达到的检测灵敏性一致。结论?基于LAMP和微流控芯片技术的登革病毒检测方法具有操作简单、快速、对设备要求低等优势,并且灵敏性、特异性均较好，是一种便于开展现场快速检测的方法。     

Application of recombinase polymerase amplification method for rapid detection of infectious laryngotracheitis virus

Infectious laryngotracheitis is a significant respiratory disease of chickens that causes huge economic losses due to high morbidity and mortality and reduced egg production. A real-time recombinase polymerase amplification (RPA) assay was developed to accurately detect ILTV. The specific probe and primer sets were carefully designed and screened. The real-time RPA assay was carried out at 39 °C for 30 min, and results were obtained within 15 min. The results of the specificity assay showed no fluorescence signals with other avian-related viruses. The sensitivity of the assay was 1 × 10² copies/μL. The low CV value showed that the assay was reproducible. A total of 115 clinical samples were tested using the real-time RPA assay and the real-time PCR assay in parallel; the coincidence rates of the two detection methods were 100%. The results indicated that the real-time RPA assay is a specific, sensitive, rapid, and useful tool for epidemiological studies and clinical diagnosis, especially in the field and in resource-poor areas.     

一腓骨肌萎缩症家系临床及基因分析

目的分析一腓骨肌萎缩症家系的临床表现及不同基因检测方法的特点。方法收集一CMT家系8名成员临床资料,并应用等位基因特异性PCR-双酶切方法及多重连接依赖的探针扩增技术(MLPA)检测PMP22基因突变情况,同时选择60名性别、年龄无明显差异的健康人做为对照组。结果该家系中患病者以行走不稳、跨阈步态,伴有弓形足为主要临床表现。该家系中5名成员经等位基因特异性PCR-双酶切及MLPA方法均检测出PMP22基因重复序列,其中出现临床症状的有4名(Ⅱ3、Ⅱ9、Ⅱ11、Ⅲ7),未出现临床症状但基因检测结果示PMP22基因重复序列的为携带者有1名(Ⅲ5),家系中余3名成员及对照组60名均未见重复序列。结论基因检测在明确CMT诊断中起重要作用,且MLPA法筛查基因时操作更简便、灵敏度更高、特异性更好。     

人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA，(human telomeraseRNA，hTR)的cDNA探针，分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法(TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。18例活检胃癌组织及45例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为l00％，相应TRAP分析的阳性率分别为88．89％、86．67％，低于RNA斑点杂交(P＜0．05)。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA，具有高度的敏感性和特异性，弥补了TRAP分析敏感性不足的缺点。     

无国界医生在救援中备灾的重要性

无国界医生致力于应对天灾和战祸所引起的人道医疗危机。灾后实时爆发的人道医疗危机包括急性的外科创伤问题和基础医疗系统的破坏导致疫症发生。本文介绍了无国界医生的救援经验以及专业的备灾体系。     

左旋布比卡因复合舒芬太尼或芬太尼在分娩硬膜外自控镇痛的应用

目的探讨左旋布比卡因复合舒芬太尼硬膜外自控镇痛（PCEA）用于分娩镇痛的临床效果及安全性。方法随机选择120例美国标准协会（ASA）I-Ⅱ级初产妇，随机分为舒芬太尼组（A组）、芬太尼组（B组）、无镇痛组（C组），每组40例。A组和B组采用PCEA，C组不给予镇痛药物。观察各组不同时段视觉模拟评分（VAS）和不良反应的发生，同时记录3组产程时间、分娩方式、缩宫使用情况、产后出血量、新生儿Apgar评分。结果A、B2组和C组在PCEA20、60min及宫口开全时VAS差异有统计学意义（P〈0.05）；PCEA5min，A、B2组VAS差异有统计学意义（P〈0.05），2组Bromage评分、不良反应差异无统计学意义（P〉0.05）。3组产程时间、分娩方式、产后出血量、新生儿Apgar评分比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论左旋布比卡因复合舒芬太尼或芬太尼用于分娩镇痛安全有效，对母婴无明显不良影响。     

脐血LAK细胞生物学特性影响因素的研究

采集２３名产妇的脐带血和８名正常成人的外周血制备ＬＡＫ细胞，随机分为４组，在培养第３，５，７，１４天，分别利用ＭＴＴ法和＾１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对４组ＬＡＫ细胞的增殖力和杀伤活性进行了测定，同时用细胞毒方法测定培养７天的ＬＡＫ细胞的免疫表型。结果发现，在不同培养时间，脐血来源的ＬＡＫ细胞增殖力显著高于成人血ＬＡＫ细胞（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１），成人血清组，脐血血清组，红细胞组ＬＡＫ细胞增殖力有