肺炎克雷伯氏菌SHV-28编码基因的克隆、测序及基因定位

以临床分离的一株肺炎克雷伯氏菌99-799株为研究对象，对其所产生的一种β-内酰胺酶编码基因的序列、亚型及基因定位进行研究。采用聚合酶链反应(PCR)，用β-内酰胺酶通用引物、blasHv引物扩增获得β-内酰胺酶及SHV型酶编码基因的片段，将SHV型酶PCR扩增产物克隆入pUCm—T载体，以双脱氧链终止法测定核苷酸序列，再通过GeneBank进行同源性检测确定其亚型和基因所在位置。肺炎克雷伯氏菌99—799株所含的一种β-内酰胺酶基因型为SHV型，与SHV-28编码基因序列完全相同，且位于细菌150bp的大质粒上，说明重庆地区有SHV-28亚型的存在。     

重症监护病房肺炎克雷伯菌临床特点及耐药分析

目的 分析重症监护病房（ICU）肺炎克雷伯菌感染的临床特点及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法 回顾性分析重庆医科大学附属第一医院2014年1月～2016年12月ICU肺炎克雷伯菌感染病例483例,药敏试验采用纸片扩散法,双纸片协同试验进行超广谱β内酰胺酶检测,WHONET5.6及SPSS 21.0软件统计分析数据。结果 ICU肺炎克雷伯菌感染常见于伴多种易患因素的老年患者,下呼吸道为主要感染部位;CREKp感染死亡率高,多合并感染性休克或多器官功能障碍。3年来ICU检出肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物耐药率不同程度上升,特别是CREKp菌株分离逐渐增加且呈泛耐药特点,仅对替加环素、米诺环素敏感。结论 ICU肺炎克雷伯菌感染发病率高且病情重,CREKp感染死亡风险高,应充分认识其严重性。治疗上依据药敏试验结果指导临床选择适当抗菌药物尤为重要。     

肺炎克雷伯菌TEM-1编码基因的克隆测序及基因定位

目的 以我院临床分离的一株肺炎克雷伯菌99—799株为研究对象，对其所产β-内酰胺酶编码基因的序列、亚型及基因定位进行研究。方法 采用聚合酶链反应(PCR)，用β-内酰胺酶通用引物、blaTEM扩增获得β-内酰胺酶编码基因的片段，克隆入pUCm—T载体，以双脱氧链终止法测定核苷酸序列，再通过GenBank进行同源性检测确定其亚型和基因所在位置。结果 肺炎克雷伯菌99—799株所含β-内酰胺酶基因型为TEM型，与TEM-1编码基因序列完全相同，且同时位于细菌150 bp和80bp的大、小质粒上。结论 重庆地区临床分离肺炎克雷伯菌有TEM—1-β内酰胺酶基因亚型的存在.     

2006-2008年广东省中医医院泌尿系感染病原菌菌群分布及耐药性分析

目的探讨泌尿系感染的病原菌分布及耐药性的变化,为I临床及时、正确、合理应用抗菌药物提供依据。方法对我院2006年1月-2008年12月尿液标本培养出的1681株病原菌进行菌种分类及耐药性分析,并与既往文献报道的泌尿系感染菌群及耐药性情况进行比较。结果 前4位的病原菌依次为大肠埃希菌（39．08％）、肺炎克雷伯菌（8．98％）、粪肠球菌（6．6％）、白色假丝酵母菌（5．53％）;大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对氨苄西林、复方新诺明、环丙沙星、左旋氧氟沙星耐药率较高,且超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）阳性率分别为59．1％、59．6％;粪肠球菌对四环素、链霉素、左旋氧氟沙星、环丙沙星等药物耐药性较高;真菌的总体耐药率不高。辟论大肠埃希菌仍然为泌尿系感染的主要病原菌;产ESBLs的细菌率上升;泌尿系真菌感染率增高;临床应及早行尿培养及药敏试验,早期可使用含有p内酰胺酶抑制剂的抗生素,不推荐首选喹诺酮类抗生素。     

Detection of New Delhi Metallo‐beta‐Lactamase and Extended‐Spectrum beta‐Lactamase Genes in Escherichia coli Isolated from Mastitic Milk Samples

In this study, eight Escherichia coli isolates were obtained from milk samples of dairy cattle suffering from clinical/subclinical mastitis. Isolates were characterized for antimicrobial resistance traits and virulence genes. Results revealed that one isolate was harbouring New Delhi metallo‐beta‐lactamase gene (bla_NDM). Cloning and sequencing of the PCR amplicon confirmed the identity of the gene (GenBank accession no. KC769583 ) having 100% homology with bla_NDM‐5 (GenBank accession no. JN104597.1 ), and this isolate was susceptible to colistin, chloramphenicol and tetracycline only. Moreover, another isolate carried extended‐spectrum beta‐lactamase (ESBL) gene – bla_CTX‐M, and all isolates possessed bla_TEM gene. Of the eight isolates, only one isolate was positive for shiga toxin gene (stx2), and none were harbouring stx1 gene. Occurrence of New Delhi metallo‐beta‐lactamase (bla_NDM) in one E. coli isolate and ESBL genes in other isolates poses a potential threat to human health following possible entry and spread through food chain.     

临床分离沙门菌的耐药性及超广谱β-内酰胺酶类耐药基因

目的研究北京地区2012—2015年沙门菌临床分离株的血清型分布、耐药状况及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因特征。方法采用最小抑菌浓度法测定北京市肠道门诊分离的677株沙门菌株对16种抗菌药物的耐药情况,采用聚合酶链反应(PCR)方法对244株β-内酰胺酶类耐药菌株进行耐药基因检测。结果677株沙门菌分为68种血清型,其中肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌和山夫登堡沙门菌位居前3位。沙门菌对氨苄西林和阿莫西林/克拉维酸的耐药率分别为42.54%、40.77%,至少耐3种以上抗菌药物的菌株占57.16%。244株对氨苄西林和阿莫西林/克拉维酸耐药的沙门菌,携带至少一种ESBLs基因的菌株174株(71.31%),146株bla_(TEM-1)型,30株bla_(OXA-1)型,18株bla_(CTX-M)型(其中7株bla_(CTX-M-15),6株bla_(CTX-M-55)和5株bla_(CTX-M-14));20株同时携带2种耐药基因。结论该地区沙门菌携带ESBLs耐药基因水平较高,以bla_(TEM-1)为主,同时伴有bla_(OXA-1)和3种bla_(CTX-M)基因亚型,呈现基因多样性。     

pH对β-内酰胺酶抑制剂抑酶作用的影响

造择舒巴坦（ｓｕｌｂａｃｔａｍ）和克拉维酸（ｃｌａｖｕｌａｎｉｃ ａｃｉｄ）为研究对象,考察在不同ｐＨ条件下（６．０、７．０、８．０）两者对三种β－丙酰胺酶（ＴＥＭ－２、ＳＨＶ－１、ＯＸＡ－３）抑酶作用的变化。结果表明,克拉维酸对三种酶的抑制效力均较好,舒马坦对ＯＸＡ－３酶的抑制效力远较其它两种酶差,且舒巴坦对ｐＨ的敏感性强于克拉维酸,其在不同ｐＨ条件下的抑制效力差异较大,说明克拉维酸的抑酶效力在     

12种β—内酰胺类抗生素对β—内酰胺酶的稳定性研究

实验采用紫外分光光度法测定了(1)11株国际标准产酶菌的β—内酰胺酶活性;(2)11种β—内酰胺酶对12种β—内酰胺类抗生素的相对水解率;(3)CP—45899对11种酶的抑酶率。结果表明:酶K—1和TEM—2活性分别为699和319单位外,其余酶活性在22—72单位之间。12种抗生素中,第三代头孢菌素(除CPZ外)的酶稳定性最好;第二代头孢菌素中CXM的酶稳定性明显优于CMD和CPZ(P<0.01)。第一代头孢菌素和青霉素类易被酶水解。CP—458991ug/ml对多种β—内酰胺酶显示抑制作用,对CRD、CMD具有保护作用。