肝癌相关抗原kinectin基因片断的重组表达

目的:研究肝癌相关抗原kinectin基因片断的体外重组表达方法,为该抗原的生产奠定基础.方法:用PCR法扩增肝癌相关抗原kinectin的基因片断,将目的基因插入表达载体pMAL-C2上麦芽糖结合蛋白(MBP)基因下游的多克隆位点,转化DH5α菌.通过蓝白斑筛选、PCR鉴定、内切酶鉴定及DNA测序筛出正确的重组子,并用其转化TB1菌.用IPTG对重组的TB1工程菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定.结果:kinectin基因片断正确插入pMAL-C2载体的多克隆位点,用IPTG对工程菌进行诱导,可见目的蛋白条带出现.结论:pMAL-C2载体可用于对肝癌相关抗原kinectin的体外基因重组表达.     

重组Kinectin蛋白的表达、纯化及应用研究

目的优化重组kinectin蛋白的诱导表达及纯化条件;探讨用其致敏的树突状细胞(DC)对自体T淋巴细胞增殖能力的影响。方法以pMAL-C2为载体构建重组质粒,并转入TB1宿主菌。从IPTG加入时机、诱导温度、诱导时间及IPTG浓度方面对工程菌的诱导条件进行优化;过Amylose-resin亲和层析柱对诱导产物进行分离纯化。用获取的MBP-kinectin融合蛋白致敏从人外周血中分离培养的DC,并用ELISA检测细胞上清液中的IL-12、IFN-γ含量;再用MTT法检测致敏DC刺激自体T淋巴细胞增殖的能力。结果 工程菌在37℃振荡培养2个小时后加入终浓度为0.5mmol/L的IPTG,降低温度到34℃继续诱导3个小时,可明显提高诱导效率;所得MBP-kinectin与DC共培养上清液中IL-12、IFN-γ含量分别为(615.32±7.93)pg/ml,(544.28±7.17)pg/ml,用其刺激的T淋巴细胞增殖指数为53.14±0.62,均高于麦芽糖结合蛋白(MBP)组和空白对照组,且差异有统计学意义。结论pMAL-C2载体可用于构建kinectin重组质粒;通过对诱导条件的优化,可获得较高的诱导效率;所得MBP-kinectin融合蛋白能致敏DC并具有很强的刺激自体T淋巴细胞增殖的能力。     

肝癌相关抗原kineetin基因重组蛋白致敏的树突状细胞对T细胞增殖活化的影响

目的观察肝癌相关抗原kineetin基因重组蛋白（kinectln—MBP）致敏的树突状细胞（DC）对T细胞增殖活化能力的影响。方法从正常人外周血中分离单个核细胞,用rhGM—CSF、rhIL-4联合诱导扩增DC;用kinectin-MBP（kinectin—MBP组）、麦芽糖结合蛋白（MBP组）分别致敏DC,对照组不处理。采用ELISA法检测细胞上清液中的IL-12、IFN-γ,MTT法检测各组DC刺激自体T淋巴细胞增殖的能力。结果kinectin—MBP组上清液中IL-12、IFN-γ含量分别为（615．32±7．93）、（544．28±7．17）pg／ml,MBP组分别为（382．13±5．21）、（308．46±6．44）pg／ml对照组组分别为（299．40±10．22）、（228．03±6．70）pg/ml,三组相比,P均〈0．05。kinectin—MBP组T淋巴细胞增殖指数为53．14±0．62,MBP组为22．14±0．31,对照组为10．86±0．65,三组相比,P均〈0．001。结论体外诱导扩增的DC经kinectin-MBP致敏后具有很强的刺激自体T细胞增殖的能力。     

KINECTIN与神经系统肿瘤的相关性研究

目的与方法:用分子生物学工程方法,表达和纯化kinectin蛋白作为抗原,用ELISA检测神经系统肿瘤、正常人和肝癌病人血清中kinectin抗体的阳性率。结果:正常人血清中kinectin检出率为5%,胶质瘤、脑膜瘤及垂体瘤患者血清中抗体检出率分别是43%、5%、3%,较肝癌病人血清中kinectin抗体检出率低(48%)。且检出率与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分类和肿瘤分级无关。结论:kinectin与神经系统肿瘤有很强的相关性,可作为判定神经系统肿瘤的标志之一。     

Presence of anti-kinectin and anti-PMS1 antibodies in Japanese aplastic anaemia patients

While anti-kinectin antibodies are frequently found in aplastic anaemia (AA) patients from the US (39%), we detected antibodies in only three of 30 (10%) of Japanese AA cases. Additionally, population differences in anti-postmeiotic segregation increased 1 (PMS1) responses were seen, with detectable antibody in 10% Japanese and 0% US AA patients. In one of the Japanese AA patients with detectible anti-kinectin antibodies, the autoantibody disappeared coincidentally with the partial resolution of pancytopenia. These results support the hypothesis that the epidemiology of AA is heterogeneous and suggest that anti-kinectin autoantibody titre may serve as a surrogate maker for the disease activity of AA.