大肠杆菌表达耐热DNA聚合酶的纯化和鉴定

目的探讨工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶的纯化方法。②方法收集ＩＰＴＧ诱导带有耐热ＤＮＡ聚合酶（ＴＤ聚合酶）基因表达质粒的工程菌株ＤＨ－ＴＤ４，用溶菌酶裂解，６０℃处理后，上清液用硫酸铵沉淀，根据溶解度差异进行粗分级，然后进行离子交换层析细分级，并经聚合酶链式反应（ＰＣＲ扩增）鉴定其活性。③结果纯化的ＴＤ聚合酶具有良好的聚合活性。④结论溶解度差异与离子交换层析是工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶纯化的主要步骤。基因工程制备的ＤＮＡ聚合酶可用于ＰＣＲ检测     

五味子和头孢氨苄对大肠埃希氏菌及金黄色葡萄球菌抑制作用的实验研究

目的 :观察五味子和头孢氨苄对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用。方法 :试管稀释法。结果 :五味子水煎剂 (1g/ml,pH =2 .8)对二株受试菌的MBC分别是 6 2 .5g/L和 31.2 5g/L ,而五味子水煎剂调pH为 7 0后 ,其MBC均大于 5 0 0g/L。头孢氨苄对大肠埃希氏菌的MIC和MBC分别是 4 88mg/L和 15 6 2 5mg/L ;对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别是 2 44mg/L和 78 13mg/L。pH为 7 0的五味子联用头孢氨苄对大肠埃希氏菌的MBC分别为大于 2 5 0g/L和 15 6 2 5mg/L ,部分抑菌浓度指数为 1 5。结论 :pH为 2 8的五味子水煎剂有一定抑制致病菌作用 ;pH为 7 0的五味子水煎剂与头孢氨苄联用 ,两药呈现无关作用。     

TRAIL基因原核表达载体的构建、表达与抗体制备

目的:获取抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)抗体.方法:利用PCR技术和基因重组技术将TRAIL基因构建于原核表达载体pPreTMH-Tb中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导在大肠杆菌DH-5α中获得表达,并将TRAIL蛋白免疫家兔,通过Dot blot及Western blot检测抗TRAIL抗体的产生.结果:成功构建TRAIL基因原核表达载体,并在大肠杆菌DH-5α中获得表达,TRAIL蛋白表达量占菌体蛋白质总量的11.8%,Dot blot及Western blot检测证实获得了抗TRAIL抗体.结论:成功制备抗TRAIL抗体,这为TRAIL在真核细胞水平研究奠定了实验基础.     

突变型人白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达

目的：建立突变型人白细胞介素-2（rhIL-2）基因大肠杆菌表达系统，为rhlL-2的生产及临床应用奠定基础。方法：自人胎盘组织中提取总RNA，逆转录PCR（RT-PCR）扩增突变型人IL-2基因cDNA，通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸（c125）的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2，温度诱导表达．表达产物行SDS一聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）及WesternBlot鉴定。结果：DNA序列分析证实，重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示，诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16．5ku的外源蛋白产生。经Western印迹（WesternBlot）证明为rhlL-2。结论：成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统。表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。     

4年间我院儿科临床大肠埃希菌耐药性变迁分析

目的：监测我院4年间儿科临床分离的大肠埃希菌的耐药情况，了解其耐药性发生和发展的规律，以指导儿科临床合理选用抗大肠埃希菌药物。方法：2001年1月-2004年12月从儿科临床标本分离的84株大肠埃希菌按照分离时间分为2001-2002年组（2001年1月-2002年12月）48株和2003-2004年组（2003年1月-2004年12月）36株，分别比较两组产超广谱B内酰胺酶（ESBLs）和对22种抗菌药物敏感性试验结果。结果：ESBLs检测结果：2001-2002年组产ESBLs株检测率为37．5％（15／40），2003-2004年组产酶株捡出率为46．9％（15／32），经x^2检验，P〉0．05，无显著性差异。药物敏感性实验结果：2003-2004年组比2001-2002年组耐药率明显升高，22种抗生素中除外亚胺培南未发现耐药菌外，其他抗生素耐药率均有不同程度增高，增幅为（16．7％-88．9％），经x^2检验，均有极显著性差异（P〈0．01），其中耐药率上升最快的5种抗生索分别为头孢曲松、头孢唑啉、头孢嚷肟、头孢拉定、头孢呋辛。耐药率上升较慢的5种抗生素分别为阿米卡星、头孢西丁、头孢哌酮／舒巴坦、头孢他定和四环素。结论：儿科临床大肠埃希菌耐药性发展迅速，以对头孢类抗生素耐药性上升最为显著，且呈多重耐药趋势。治疗上不宜选用头孢类抗生索和复方磺胺甲嗯唑，应选用头孢西丁、加酶抑制剂复合抗生素以及亚胺培南。     

湖北地区三级医院2002～2005年大肠埃希菌耐药性分析

目的了解湖北地区大肠埃希菌（EC）的耐药性及流行趋势，为临床提供诊疗依据。方法采用WHONET4—5．0软件对2002-2005年湖北地区17所三级医院成人患者临床标本中分离的7435株EC的耐药性监测资料进行统计分析（药敏试验采用KB纸片扩散法）。结果湖北地区EC对常用抗菌药物的耐药率总体持平或略有上升，对氨苄西林耐药率高达90％～92％，对亚胺培南100％敏感；产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）菌株的检出率逐年上升。结论湖北地区EC的耐药情况仍十分严重，应对EC行耐药性动态监测并及时公布结果，以指导临床用药及控制耐药菌传播与流行。     

Difference between periportal and pericentral Kupffer cells in uptaking lipopolysaccharides in rats

ＤｉｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｐｅｒｉｐｏｒｔａｌａｎｄｐｅｒｉｃｅｎｔｒａｌＫｕｐｆｅｒｃｅｌｓｉｎｕｐｔａｋｉｎｇｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｒａｔｓＣＨＥＮＸｉａｎＭｉｎｇ１，ＬＩＵＪｉｎ＿Ｃｈｕｎ２，ＸＵＲｅｉＬｉｎｇ１，...     

大肠杆菌sRNA sdsR表达水平与其耐药性的相关性分析

目的 旨在探究临床分离的大肠埃希菌株中sRNA sdsR的表达水平与环丙沙星以及头孢噻肟耐药性之间的关系.方法 采用实时荧光定量PCR方法 测定医院2018年1月—2018年12月从临床标本非重复分离得到的50株大肠埃希菌的sRNA sdsR的表达水平,并通过pearson相关分析确定环丙沙星及头孢噻肟耐药性与sRNA...     

血流感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的药敏结果及感染危险因素分析

目的 分析血流感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的药敏特点和危险因素,为临床诊疗和预防提供依据.方法 回顾性分析商洛市中心医院111例大肠埃希菌血流感染的药敏结果 和临床特点,根据大肠埃希菌是否产ESBLs分为ESBLs组和非ESBLs组,分析两组药敏结果 差异,并探讨产ESBLs大肠埃希菌血流感染的危险...     

一起感染性腹泻暴发疫情调查与控制分析

目的探讨感染性腹泻暴发的原因,分析感染性腹泻暴发的控制措施。方法调查某镇和附近8个村2003年6月30至7月30日发生的腹泻病例593例和部分对照人群,同时采取水、环境和患者生物学样本进行细菌学和游离余氯测定。结果本次腹泻的罹患率为4055.5/10万,腹泻暴发的原因是暴雨导致饮用水源持续受粪便污染和当地自来水厂水缺乏净化消毒措施,同时伴随食物污染。病原体可能是气单胞菌和/或产毒大肠杆菌。采取污染源控制、饮水消毒、规范自来水厂净化消毒以及宣传教育等综合防治措施,疫情得到控制。结论夏季农村地区以自然沟塘水作为生活饮用水源,应注意保护,防止粪便污染。农村简易水厂应加强水质监测。