尿胰蛋白酶原—2测定对急性胰腺炎的早期诊断价值

目的 探讨尿胰蛋白酶原－2测定在急腹症中筛选急性胰腺炎的价值。方法 对346例连续就诊的急腹症病人同时测定尿胰蛋白酶原－2及血、尿淀粉酶。结果 41例急性胰腺炎中有38例尿胰蛋白酶原－2阳性,敏感性为92．7％,305例非胰腺炎的急腹症病人有15例假阳性,特异性为95．1％。5例重症急性胰腺炎中尿胰蛋白酶原－2全部阳性。结论 尿胰蛋白酶原－2是急腹症病人筛选急性胰腺炎快而简便的方法,具有较高的特异性和敏感性。     

尿胰蛋白酶原激活肽间接竞争ELISA检测法的建立及方法学评价

目的建立酶联免疫吸附法(ELISA)以检测人尿液中胰蛋白酶原激活肽(TAP)的含量。方法以TAP-BSA交联抗原为包被抗原,TAP为竞争抗原,两者与定量的TAPmAb反应,建立检测TAP的间接竞争ELISA测定法。结果最佳抗原包被浓度为250ng/ml,最佳单抗工作浓度为25μg/ml,HRP-抗小鼠IgG工作浓度为1∶4000。可测量最适范围为0.69~1000ng/ml,灵敏度为0.69ng/ml,批内和批间变异系数分别为9.10%和10.33%,平均回收率为97.70%。结论建立了定量测定尿TAP含量的酶联免疫吸附试验。     

抗胰蛋白酶原激活肽单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗胰蛋白酶原激活肽（TAP）单克隆抗体（TAP McAb），并进行初步鉴定。方法 将人工合成的TAP与血蓝蛋白（KLH）交联作为免疫原，免疫Balb／c小鼠，经细胞融合，有限稀释法筛选出能稳定分泌TAP McAb的杂交瘤细胞株，并对单克隆抗体进行鉴定。结果 细胞融合率85．03％，经4次克隆化后获得10株能稳定分泌TAP McAb的杂交瘤细胞株，经免疫球蛋白亚类鉴定，除1株为IgG1外，其余9株均为IgM类；染色体数目为92～101条；酶联免疫吸附测定（ELISA）检测杂交瘤细胞培养上清效价为1：20～1：160，腹水效价为1：3200～1：25600；特异性试验表明，抗TAP单克隆抗体与牛血清白蛋白（BSA）、人白蛋白、胰蛋白酶、淀粉酶均无交叉反应；中和抑制试验表明，培养上清及腹水中的抗体能明显被合成多肽TAP及为急性胰腺炎患者尿液所中和；对其中5株细胞株进行相对亲和力分析结果表明，2C3〉8C6〉6H7〉6F7〉8810。结论 成功制备了抗TAP单克隆抗体，为建立敏感、特异的TAP免疫检测方法奠定了基础。     

Differential effects of endothelins on histological and ultrastructural changes and trypsinogen activation in the secretagogue-induced acute pancreatitis in rats

The role of endothelins in acute pancreatitis remains obscure. To assess the effects of endothelins (ETs) in early (4 h) caerulein-induced acute pancreatitis (AP) in rats, ET-1, ET-2 and ET-3 (0.5 or 1.0 nmol/kg) were applied twice with i.p. caerulein (2×40 μg/kg) at 1 h interval. Histological and ultrastructural examinations of pancreases and the assay of trypsinogen activation in whole homogenate were performed. All ETs, especially ET-1 at the higher dose, decreased inflammatory cell infiltration despite an increase in the edema score. The vacuolization and necrosis of acinar cells were slightly increased after the lower dose of ET-1 and ET-2. Ultrastructural changes were generally improved after the higher dose of ETs. Trypsinogen activation increased from 4.8±1.3% in control to 18.4±3.8% in AP (p<0.01). It was attenuated to 6.4±1.3% (p<0.01) by the higher dose of ET-1 and to 8.8±1.5% (p<0.05) by the lower dose of ET-3. In summary, ETs, especially ET-1 at the higher dose, were found to have some beneficial effects on morphological changes and trypsinogen activation in the pancreas in early caerulein-induced AP.     

血浆胰蛋白酶原激活肽水平与重症急性胰腺炎胰腺坏死的相关性研究

目的 探讨血浆胰蛋白酶原激活肽（trypsinogen activation peptide,TAP）水平与重症急性胰腺炎（severeacute pancreatitis,SAP）胰腺坏死的关系。方法 2008年6月1日—2008年12月31日,采用ELISA法测定本院的35例SAP患者血浆TAP水平,并与胰腺增强CT扫描结果作对比,分析血浆TAP水平与胰腺坏死的关系,以及SAP无胰腺坏死组与SAP胰腺坏死组血浆TAP水平的差异。结果 入院时血浆TAP水平预测胰腺坏死的最佳截值点是10.43 nmol/mL,其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为75%、73.9%、60%、15%,阳性比为2.87,阴性比为0.338。入院第1天血浆TAP水平预测胰腺坏死的最佳截值点是6.91 μmol/L,其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为90.9%、65.2%、55.6%、6.3%,阳性似然比为2.61,阴性似然比为0.001。SAP胰腺坏死组入院时、入院第一天血浆TAP水平高于SAP无胰腺坏死组（P〈0.05）。结论 血浆TAP水平变化与SAP病情变化密切相关,病程早期检测血浆TAP水平有助于SAP患者胰腺坏死的预测     

尿胰蛋白酶原—2快速检测筛选急性胰腺炎的临床价值

目的：评价试纸法尿胰蛋白酶原－2快速检测诊断急性胰腺炎的临床价值。方法：对109例急性腹痛病例进行尿胰蛋白酶原－2及血、尿淀粉酶检测,并比较其敏感性和特异性。结果：54例急性胰腺炎患者中,52例尿胰蛋白酶原－2阳性,敏感性为96％;55例其他原因所的急性腹痛患者中,4例尿胰蛋白酶原－2阳性,特异性为93％。而血清淀粉酶检测（断点值为300U／L）的敏感性为87％（47／54）,特异性为85％（47／55）;尿淀粉酶检测（断点值为2000U/L)的敏感性和特异性分别为81％（44／54）和78％（43／55）。尿胰蛋白酶原－2快速检测的敏感性和特异性均显著高于血、尿淀粉酶检测（P＜0．05）。结论：试纸法尿胰蛋白酶原－2快速检测诊断急性胰腺炎具有较高的精确性,是筛选急性胰腺炎简便而快速的方法。     

尿中胰蛋白酶原激活肽对重症急性胰腺炎的早期预测价值

目的　评估尿中胰蛋白酶原激活肽（TAP）对重症急性胰腺炎（SAP）患者的早期预测价值。方法　出现首发症状后48h内入院的急性胰腺炎（AP）患者41例（轻型29例、重症12例）及对照组11例,在入院时、24h、48h及72h取尿样测定TAP浓度,同时对每个患者在入院后48h进行APACHEⅡ评分。结果　入院时重症组尿TAP值（95nmol/L)高于轻型组（20nmol/L,P＜0.005)及对照组(15nmol/L,P＜0.005)。入院时尿中TAP值≥35nmol/L预测SAP的特异性和敏感性分别为89.7%和91.7%,而APACHEⅡ≥9诊断SAP的特异性和敏感性仅为72.7%和75.0%。90%的患者可通过TAP预测AP的严重程度,而APACHEⅡ评分仅能对73%的患者进行正确评价。结论　首发症状出现后48h内入院的AP患者尿中TAP浓度可早期预测SAP。     

TAP诱导大鼠胰腺腺泡细胞释放HMGB1的研究

目的 探讨人胰蛋白酶原激活肽(TAP)诱导大鼠胰腺腺泡细胞高迁移率族蛋白1(HMGB1)的分泌规律和丙酮酸乙酯(EP)对其释放的影响.方法 将12只SD大鼠处死后,取出胰腺分离胰腺腺泡细胞,将所得细胞悬液按抽签法随机分为3组,对照组、TAP组及EP组.TAP组及EP组加入相同剂量的TAP(终浓度3 nmol/L),EP组同时加入EP(终浓度28 mmol/L),在3、6、12及24 h分别取细胞样本.采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HMGB1 mRNA的表达,蛋白印迹法(Western blot)检测HMGB1蛋白的表达;并进行HMGB1 mRNA及蛋白的表达与TAP作用时间的Spearman秩相关分析.结果 与对照组比较,TAP组及EP组的HMGB1 mRNA及蛋白的表达均随TAP作用时间的延长而上调(P＜0.05);与TAP组比较,EP组的HMGB1mRNA及蛋白表达则下调(P＜0.05).TAP组组内比较显示,HMGB1 mRNA及蛋白的表达随TAP作用时间延长而逐渐升高(P＜0.05),且以12h及24 h时升高明显(P＜0.01),HMGB1 mRNA及蛋白的表达与TAP作用时间呈正相关(rs=0.971,P＜0.01;rs=0.966,P＜0.01).结论 TAP可诱导大鼠胰腺腺泡细胞内HMGB1的释放.急性胰腺炎早期的TAP与晚期的HMGB1之间存在着时间的正向联系.EP可抑制HMGB1的释放.     

遗传性胰腺炎发病机制及治疗研究进展

遗传性胰腺炎是急性或慢性胰腺炎的一种罕见类型,临床表现与其他原因所致胰腺炎类似。1996年Whitcomb首次报道PRSS1基因突变为遗传性胰腺炎的病因。随后SPINK1基因、CFTR基因、CTRC基因被报道与遗传性胰腺炎相关,但它们是否为遗传性胰腺炎的致病基因仍存在争议。PRSS1编码阳离子胰蛋白酶原,该基因的突变可能导致胰蛋白原激活增加或失活减少,引起临床胰腺炎。目前已经报道了超过20种PRSS1的致病性突变,其中最常见的突变位点为R122H、N29I、和A16V。遗传性胰腺炎发病年龄较早,通常在20岁前起病,平均发病年龄为10岁,进展为慢性胰腺炎的平均年龄为20岁,50岁以后胰腺癌发病风险明显增加。遗传性胰腺炎患者的监管包括:避免环境触发,胰腺内分泌和外分泌功能不全的治疗,疼痛的管理,内镜或手术治疗以及胰腺癌的监测。笔者重点就PRSS1相关性遗传性胰腺炎的发病机制、治疗研究进展及疾病管理等方面进行综述。     

急性胰腺炎的实验诊断研究进展

急性胰腺炎是临床上常见的急腹症之一，适时治疗的成功依赖于早期快速的确诊，实验室检查对早期诊断急性胰腺炎有重要作用。本文对实验室常规检测的淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶原、羧肽酶等，从方法学发展到临床应用作一综述。