槐耳的研制及临床应用

槐耳是一种人药1500余年但已湮没300余年的重要药用真菌。它和其原料药材槐耳菌质近年来已被批准为中药国家一类新药，就有关槐耳的研制及其在肿瘤疾病方面的应用作一综述。     

Laccase from the white-rot fungus Trametes versicolor: cDNA cloning of lcc1 and expression in Pichia pastoris

A cDNA coding for laccase was isolated from the ligninolytic fungus Trametes versicolor by RNA-PCR. The cDNA corresponds to the gene lcc1, which encodes a laccase isoenzyme of 498 amino-acid residues preceded by a 22-residue signal peptide. The lcc1 cDNA was cloned into the vector pHIL-D2 for expression in Pichia pastoris under the control of the AOX1 promoter. Transformants were found to secrete active recombinant enzyme after induction with methanol. The use of growth medium buffered to pH 6.0 and control of pH during cultivation were found to be important, or even necessary, for obtaining activity in liquid cultures. The effect of exchanging the native secretion signal for the Saccharomyces cerevisiae α-factor pre-pro secretion signal was studied by cloning the portion encoding the mature enzyme into the vector pPIC9. The activity obtained for the construct encoding the native laccase signal sequence was found to be seven-fold higher than for the construct encoding the α-factor secretion signal. Utilisation of the P. pastoris pep4 mutant strain SMD1168 was found to provide a two-fold higher level of activity compared with P. pastoris GS115. Received: 16 May / 8 August 1997     

槐耳颗粒对胸部恶性肿瘤病人术后免疫功能的影响

目的：观察槐耳颗粒（金克）对胸部恶性肿瘤病人术后细胞免疫功能的影响，探讨胸部恶性肿瘤病人后辅以槐耳颗粒治疗的临床意义。方法：选取33例胸部恶性肿瘤病人，术后用槐耳颗粒治疗1个疗程（12周），监测其T细胞亚群CD3、CD4、CD8及CD4／CD8比值的变化，并对照20例胸部良性疾病的T细胞亚群监测结果进行比较。结果：胸部良，恶性疾病手术后细胞免疫功能与正常水平相比均显著下降，经槐耳颗粒治疗后恶性肿瘤病人的细胞免疫功能恢复到相对正常水平，结论：槐耳颗粒可改善胸部恶性肿瘤病人术后的细胞免疫功能。     

槐耳液体发酵菌丝球形成影响条件的研究

主要研究采用液体发酵方法培养药用真茼槐耳时，各种条件对槐耳茼丝球形成的影响，实验结果表明，在利用液体发酵法培养槐耳茼时，培养的最适温度为27℃，最适的培养基初始PH值为6，培养基中麸皮3g／500ml、葡萄糖2g／500ml、酵母粉0．2g／500ml、摇瓶装量为200ml／500ml、摇床转速140r／min。麸皮加量是对槐耳茼丝球形成的最重要的影响因素。     

黑果枸杞水提取物抑制UVB辐射后HaCaT细胞的凋亡及p16、p53蛋白表达

目的：明确黑果枸杞水提取物对中波紫外线(UVB)辐射引起的HaCaT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达的影响。方法： 体外培养HaCaT细胞,分为对照组、UVB组、UVB+黑果枸杞水提取物组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2 UVB,黑果枸杞水提取物浓度为2 mg/mL。流式细胞仪检测各组UVB照射后24 h细胞凋亡率,Western blot检测各组HaCaT细胞p16、p53蛋白的表达水平。结果：与对照组（6.12±1.19）%比较,UVB组HaCaT细胞凋亡率为(74.89±3.90)%、UVB+黑枸杞水提取物组为（57.52±2.93）%,差异有统计学意义（P<0.05）。对照组p16和p53蛋白水平为0.1±0.03和0.21±0.07,UVB组为0.28±0.06和0.5±0.04、UVB+黑枸杞水提取物组为0.15±0.025和0.25±0.01,差异均有统计学意义（Ps<0.05）。结论：黑果枸杞水提物可抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡以及p16、p53蛋白表达。     

斑蝥在生物转化前后斑蝥素含量比较

目的:利用斑蝥与红栓菌进行生物发酵转化的新方法,探索提高中药斑蝥中可利用的斑蝥素含量,增加斑蝥素的溶出率,从而扩大斑蝥资源的更有效利用。方法:以斑蝥素为标准品,用气相色谱法测定斑蝥中生物转化前后斑蝥素含量。采用HP-5气相色谱柱,香兰素为内标,柱温为175℃保持5 min,4℃/min升到240℃,保持5min,建立了斑蝥素含量测定方法。结果:建立的测定方法具有良好的重现性,转化前斑蝥中可溶出斑蝥素的含量为0.70%,转化后可溶出斑蝥素的含量为1.29%,转化前后测得斑蝥素的含量有明显提高。结论:利用红栓菌发酵对斑蝥素含量的提高具有重要的意义,为斑蝥资源的有效利用提供实验依据。     

马钱子发酵品中生物碱化学成分研究

目的研究马钱子经朱红栓菌固体发酵产物(发酵品)的生物碱成分。方法采用溶剂提取、硅胶柱色谱等方法对马钱子发酵品的生物碱成分进行分离纯化,根据化合物的理化常数和波谱数据鉴定其结构。结果从马钱子发酵品中共分离得到10个生物碱成分,分别鉴定为士的宁(1)、马钱子碱(2)、伪士的宁(3)、16-甲氧基士的宁(4)、番木鳖次碱(5)、士的宁氮氧化物(6)、马钱子碱氮氧化物(7)、士的宁氯甲氯化物(8)、马钱子碱氯甲氯化物(9)和喜树次碱(10)。结论马钱子发酵品的大部分化学成分仍然是吲哚类生物碱,其中仅有10是单萜吡啶生物碱,为首次从该种植物中分离得到;化合物4是首次从该植物的种子中分离得到;化合物8和9可能为氯仿提取过程中产生的人工加合物。迄今未见朱红栓菌中含有上述生物碱的报道。与生品相比,马钱子发酵品中生物碱成分发生了一定的变化,其中化合物4、6、7和10可能为发酵品新增成分,这些生物碱成分的鉴定为马钱子发酵"去毒存效"原理提供了理论依据。     

有氧运动和黑果枸杞多糖对慢性脑缺血小鼠的干预及Notch通路相关因子的组织差异表达

目的观察有氧运动(SW)与黑果枸杞多糖(LRM)对慢性脑缺血小鼠的干预作用以及Notch通路相关因子在脑和血液组织差异表达的比较分析。方法 50只雄性KM小鼠,构建慢性脑缺血损伤模型,随机分为模型组(M组)、干预组[包括SW组、LRM组、LRM+SW组、阳性对照组(BLDJ组)],干预组分别进行中等强度有氧运动和/或黑果枸杞多糖(200 mg/kg)灌胃。设假手术组(SO组,10只)。各组进行神经行为学评估;Nissl染色进行脑组织显微结构形态学观察;免疫组化检测相关因子的蛋白表达水平;实时荧光定量技术检测脑组织和血液中Notch通路相关因子的表达。结果脑组织损伤得分MSWLRMBLDJLRM+SWSO(P0.05)。M组脑组织神经元结构出现大面积损伤,LRM+SW组干预效果最佳(P0.01)。SO组小鼠脑Notch1、Jagged1、NCX1、SYP阳性表达最高,干预组阳性表达均高于M组(P0.01,P0.05);LRM+SW组阳性表达较LRM组合BLDJ组高(P0.01)。干预组调节神经细胞修复相关因子在组织和血液中的表达明显高于M组(P0.01),其中LRM+SW组表达水平最高。Notch1、Jagged1、NCX1在组织和血液中的表达呈正相关,且在组织中的表达含量高于血液中的表达(P0.05)。结论有氧运动与黑果枸杞多糖对小鼠慢性脑缺血引发的脑损伤有明显缓解作用,能不同程度促进神经元修复,且两者联合效果更为显著,其作用可能是通过调节Nocth通路中相关神经修复因子的表达,从而抑制脑损伤。     

槐耳清膏抑制人胃癌MKN-45细胞生长和转移的体内研究

目的 研究槐耳清膏对人胃癌MKN-45细胞在裸鼠体内生长和转移的抑制作用,并探讨其作用机制。方法 采用BALB/c裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞淋巴结转移模型,随机分为槐耳清膏组、空白对照组,每组各20只。建模后,每5天测量裸鼠荷瘤并计算肿瘤相对体积(RTV)；用药5周后处死裸鼠,Real-time qPCR检测肿瘤组织中Wnt、β-catenin、E-cadherin、N-cadherin和VEGF表达水平。结果 (1)槐耳清膏组末次测得的足垫瘤RTV为(662.75±450.66),明显小于空白对照组的RTV(1611.85±611.83)(P<0.01)。(2)槐耳清膏组淋巴结转移率15/20(75%)与对照组8/20(40%)相比,其差异有统计学意义(P<0.05)。(3)槐耳清膏组肿瘤组织中Wnt、β-catenin、N-cadherin和VEGF表达低于空白对照组,而E-cadherin的表达高于对照组(P<0.05)。结论 槐耳清膏可抑制人胃癌MKN-45细胞在裸鼠上的生长及转移,其机制可能与抗血管生成和阻碍上皮间质转化(EMT)过程有关。