基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的]基于中医"通肾络、益脾肾"治法,探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法]成熟无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠40只,随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度:高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/m L,灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组,正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集,Hoechst33342荧光染色,观察各组足细胞凋亡状况及形态变化;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果]流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率(P0.01或P0.05),高剂量组不能改善凋亡情况(P0.05);Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率;蛋白印迹结果显示,与高糖组相比,通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高,自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降(P0.05或P0.01),高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变(P0.05)。[结论]中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡,降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

滋阴清热方治疗对甲状腺功能亢进症阴虚火旺证患者疗效、血浆内皮素-1、炎症因子和免疫功能的影响

目的:研究滋阴清热方治疗对甲状腺功能亢进症阴虚火旺证患者疗效、血浆内皮素-1、炎症因子和免疫功能的影响。方法:将广州市花都区妇幼保健院收治的100例甲状腺功能亢进症阴虚火旺证患者分成观察组和对照组。对照组:给患者使用常规药物治疗;观察组:在对照组的基础上,给予滋阴清热方治疗。干预后,比较两组患者的临床疗效、血浆内皮素-1(Endothelin,ET)、炎症因子[白介素-2(Interleukin-2,IL-2)、白介素-8(Interleukin-8,IL-8)]及肿瘤坏死因子(Tumour Necrosis Factor-α,TNF-α)和免疫功能(CD3^+、CD4^+、CD8^+及CD4^+/CD8^+)。结果:干预前,两组患者IL-2、IL-8及TNF-α无变化,差异无统计学意义(P>0.05);干预后,观察组患者的IL-2比对照组高,且对照组的IL-8及TNF-α比观察组的高,P<0.05,差异有统计学意义;干预前,两组患者的CD3^+、CD4^+、CD8^+及CD4^+/CD8^+与ET无变化;干预后,观察组的CD3^+、CD4^+、CD8+及CD4^+/CD8^+比对照组高,P <0.05,差异有统计学意义,且观察组的ET低于对照组且观察组总有效率明显高于对照组。结论:滋阴清热方治疗降低了血浆内皮素-1,减少炎症的出现,提高免疫功能。     

自拟温润方治疗风寒袭肺型急性咳嗽病的临床观察

目的 观察自拟温润方治疗风寒袭肺型急性咳嗽病的临床疗效。方法 64例风寒袭肺型急性咳嗽病患者,随机分为对照组(31例)和治疗组(33例)。对照组患者给予复方甘草口服溶液治疗,治疗组患者给予温润方治疗。比较两组患者治疗前和治疗3、6 d后的中医症状评分以及临床疗效。结果 治疗3、6 d后,两组患者咳嗽、咯痰、恶风、咽痒、鼻塞、流涕、鼻干、口干咽燥症状评分均低于治疗前,差异均具有统计学意义(P<0.05)。治疗组患者治疗3 d后咳嗽、咽痒、鼻干、口干咽燥症状评分分别为(2.18±0.98)、(1.15±0.81)、(0.60±0.61)、(0.81±0.71)分,均低于对照组的(3.04±1.62)、(1.68±0.96)、(0.96±0.67)、(1.37±0.86)分,差异均具有统计学意义(P<0.05);治疗组患者治疗6 d后咳嗽、咽痒、鼻干、口干咽燥症状评分分别为(0.54±0.51)、(0.42±0.48)、(0.40±0.46)、(0.47±0.51)分,均低于对照组的(1.12±0.76)、(1.11±0.98)、(0.88±0.98)、(1.01±0.92)分,差异均具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗3、6 d后咯痰、恶风、鼻塞、流涕症状评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗3 d后,治疗组治疗总有效率90.9%高于对照组的71.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗6 d后,治疗组患者治疗总有效率93.9%与对照组的90.3%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 在风寒袭肺型急性咳嗽病治疗中,温润方在缓解咳嗽以及部分次症方面明显优于复方甘草口服溶液,起效更快。     

续筋接骨方治疗骨折临床观察

目的研究续筋接骨方治疗骨折的临床疗效。方法选取2018年1月—2018年6月在辽宁中医药大学附属第三医院就诊的骨折患者60例,所有患者按照随机数字表法分为对照组与观察组,每组30例。观察组口服续筋接骨方联合正骨后小夹板固定治疗,对照组患者采用正骨后小夹板固定治疗。分析2组患者干预3个月后的血清骨代谢指标、骨密度、生活质量改善情况以及疗效判定。结果干预前,2组的血清Ⅰ型前胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTX)、血清Ⅰ型前胶原氨端肽原(PINP)、骨特异性碱性磷酸酶(ALP)水平、钙、磷及骨密度比较,差异无统计学意义(P>0.05);干预后,2组的β-CTX、PINP、骨特异性ALP水平、钙、磷及骨密度较干预前改善,观察组的改善效果优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。干预前,2组的物质生活、社会功能、躯体健康以及心理健康评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);干预后,2组的物质生活、社会功能、躯体健康以及心理健康评分较干预前升高,观察组的各项生活质量评分高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组的治疗恢复率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论续筋接骨方可以改善骨折患者骨代谢功能及生活质量。     

补肾活血方药对慢性再生障碍性贫血患者骨髓细胞体外影响的实验研究

目的　研究补肾活血方药对慢性再生障碍性贫血 (CAA)患者骨髓细胞体外增殖的影响 ,探讨其治疗CAA的机制。方法　采用细胞培养 ,光镜下观察补肾活血中药作用于CAA患者骨髓细胞后的形态学 ;3 H TdR掺入和液体闪烁技术方法 ,检测补肾活血中药对CAA患者骨髓细胞的增殖变化。结果　加入补肾活血中药组 ,CAA患者骨髓细胞培养第 4 8小时见细胞丛明显增多 ,72h见大量集落形成 ;3 H TdR掺入法显示 ,补肾活血中药组骨髓细胞的增殖 ,以每孔 75g L最有效。在 5 0～ 10 0g L范围内 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ;2 5g L和 12 5g L组与对照组比较差异无显著性 (P <0 .0 5 )。结论　补肾活血方药在体外有促进CAA患者骨髓细胞增殖的作用 ,为补肾活血中药治疗CAA提供了实验与理论依据     

Effects of Nephritis No.3 Recipe on Nitric Oxide,Nitric Oxide Synthase Secreted by Cultured Mesangial Cells in Rats and the Gene Expression of Inducible Nitric Oxide Synthase

Objective:To explore the effect of the Nephritis No.3(N-3)recipe on nitric oxide(NO),nitric oxide synthase(NOS)secreted by cultured mesangial cells(MC)and its gene expression of the in-ducible nitric oxide synthase(iNOS).Methods:The drug(nephritis No.3)-containing serum was preparedwith serum pharmacological technique,and then was applied to react on mesangial cells cultured In fetalcalf serum(FCS)and cells cultured in FCS plus lipopolysaccharide.To observe the secretion of NO andNOS and the gene expression of iNOS by means of RT-PCR.Results:Under the two kinds of culture con-ditions,the content of NO and NOS in the groups with drug-containing serum were higher than thosewithout drug-containing serum(P<0.05,P<0.01),and the expression of iNOS mRNA was up-regula-ted too.Conclusion:The N-3 could significantly promote the secretion of NO and NOS and the mRNA ex-pression of iNOS in rats.     

补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌A549/DDP细胞的耐药逆转及MRP表达的影响

目的：探讨补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌细胞耐药逆转作用及机制。方法:采用MTT及流式细胞术，分别观察补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌A549/DDP耐药细胞的细胞毒作用和多药耐药相关蛋白（MRP）表达的影响。结果:补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌耐药细胞有一定的杀伤作用，能增强顺铂（DDP）对肺癌敏感细胞和耐药细胞的杀伤作用，显著降低MRP的表达（P＜0.01），但对维拉帕米（VRP）的协同逆转作用不明显。结论:补肾化瘀解毒方药物血清具有增效和耐药逆转作用，其机制可能与其抑制肺癌耐药细胞MRP的表达有关。     

血瘀证与血管内皮细胞内游离钙浓度关系的实验研究

目的：研究血瘀证与血管内皮细胞内游离钙浓度的关系,观察不同复方（活血化瘀复方、益气活血复方、理气活血复方）对血内皮细胞内游离钙浓度的影响。方法：以大鼠为研究对象,给予高胆固醇和高脂饲料喂养建立血瘀证动物模型,分为6组,观察组分别给予硝苯地平、活血化瘀复方、益气活血复方、理气活血复方。下腔静脉取血,测血清钙、血清总胆固醇和三酰甘油,Fura-2/Am标记,荧光测定血管内皮细胞内游离钙浓度。结果：①造模组与对照比较,血清钙明显升高（P＜0．05）。②所有复方均具有钙通道阻断剂样作用,能增加细胞外钙浓度,与造模组比较差异显著（P＜0．05）。③造模组与对照组比较,胞内游离钙浓度明显升高（P＜0．05）,益气活血复方能使造模运动血管内皮细胞内游离钙浓度降低,与造模组比较差异显著（P＜0．05）。结论：①血瘀证血管内皮细胞内游离钙浓度升高,血瘀证的形成可能与血管内皮细胞的屏障功能下降有关。②益气活血复方能降低胞内游离钙浓度,具有血管内皮保护作用。     

通络胶囊治疗偏头痛的临床与实验研究

认为正气不足、病理体质为偏头痛的发病基础 ,以气血失调为主 ,寒热虚实错杂是本病的基本病机。据此确立扶正固本、祛风活络、化瘀止痛的治疗原则 ,拟通络胶囊治疗偏头痛 30例 ,与太极通天液治疗 30例对照 ,结果表明 ,治疗组愈显率 83.33% ,总有效率 93.33% ,与对照组相比有显著性差别 (P<0 .0 1) ,在改善兼症方面亦优于对照组 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,并能改善患者颅内血管功能状态。动物实验表明 ,通络胶囊能提高实验动物痛阈 ,同时提高大鼠下丘脑 5 - HT及 β-内啡呔水平 ,并能改善大鼠软脑膜微循环。     

基于UPLC对龙血通络胶囊特征图谱及5个成分含量的测定

目的 建立龙血通络胶囊超高效液相色谱法（UPLC）特征图谱,并测定7,4′-二羟基黄酮、4,4′-二羟基-2,6-二甲氧基二氢查耳酮、龙血素A、龙血素B、紫檀芪5个成分的含量。方法 采用Agilent Infinity Lab Poroshell 120 EC-C₁₈色谱柱（150 mm×3.0 mm,2.7 μm）,以乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）为流动相梯度洗脱,柱温为35 ℃,流速为0.5 mL·min^–1,进样体积为2 μL,检测波长为280 nm。结果 建立了龙血通络胶囊UPLC特征图谱,标定了13批样品中的11个共有特征峰,相似度均大于0.95。5个成分在相应质量浓度范围内呈良好的线性关系（r>0.999 5）,加样回收率为97.93%~107.33%,RSD均小于3.0%。结论 建立的UPLC操作简便、高效准确,可为龙血通络胶囊的质量控制提供参考。