Aβ25-35体外诱导海马神经元及石菖蒲、远志有效成分合用对其SOD、MDA的影响

目的研究石菖蒲挥发油(α-细辛醚)与远志皂苷合用对海马神经元丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响。方法通过Aβ25-35诱导体外培养的海马神经元,建立AD模型,采用黄嘌呤氧化酶法测定检测各组用药前后海马神经元SOD的含量,采用硫代巴比妥酸法(TBA)测定检测各组用药前后海马神经元MDA的含量。结果模型组MDA含量显著高于空白组且SOD活力明显低于空白组,差异显著;脑复康组、α-细辛醚组、远志皂苷组、α-细辛醚联合远志皂苷组MDA含量均低于模型组且SOD活力明显高于模型组,差异显著;α-细辛醚联合远志皂苷组在降低MDA含量及提高SOD活性方面的效果显著强于二者单用。结论Aβ25-35诱导海马神经元存在自由基损伤,α-细辛醚、远志皂苷能抗自由基损伤,对神经元具有保护作用,且二者合用在抗自由基损伤上具有协同作用。     

远志皂苷对脂多糖诱导的帕金森病模型大鼠的作用及机制研究

目的 通过模拟中药口服、疗程用药的方式,探究远志皂苷(Tenuigenin,TEN)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的帕金森病(Parkinson's disease, PD)模型大鼠的作用及机制。方法 实验分5个组,通过动物行为学测试、大鼠黑质及血浆中炎性反应因子含量测定、黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元存活率检测和主要脏器组织形态学切片观察,研究TEN对炎症性PD模型大鼠的作用及机制。结果 TEN能够改善炎症性PD模型大鼠的行为学损伤,降低黑质DA能神经元的病死率,抑制黑质炎性反应因子含量,对主要脏器的组织形态学无影响。结论 TEN对PD模型大鼠具有神经保护作用,其机制与抗感染活性密切相关。     

远志总皂苷对AD模型大鼠学习记忆及海马nAChRα7亚基的影响

目的观察远志总皂苷(TEN)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆及烟碱型乙酰胆碱受体α7(nAChRα7)亚基的影响,探讨TEN对AD干预作用的机制。方法将雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、TEN低剂量组(12.5mg/mL)和TEN高剂量组(37.5mg/mL),每组8只。模型组予腹腔注射D-半乳糖(D-gal)致衰联合IBO损毁双侧基底前脑Meynert核建立AD模型。TEN低、高剂量组在建立AD模型的同时分别予12.5mg/mL、37.5mg/mL的TEN灌胃8周。对照组用等体积的生理盐水代替D-半乳糖(D-gal)和IBO注射。采用Morris水迷宫实验检测各组大鼠的逃避潜伏期(EL)、跨越原平台次数和原平台象限停留时间;用免疫组化法测各组大鼠海马区nAChRα7表达水平。结果与对照组比较,模型组EL延长、跨越原平台次数减少、原平台象限停留时间降低、海马区nAChRα7的表达水平减小(P<0.05);与模型组比较,TEN高、低剂量组EL缩短、跨越原平台次数增加、原平台象限停留时间延长、海马区nAChRα7的表达水平增高(P<0.05)。与TEN低剂量组比较,TEN高剂量组EL时间缩短(但实验第2天两组间比较无统计学差异)、跨越原平台次数增加、原平台象限停留时间延长、海马区nAChRα7表达水平均明显升高(P<0.05)。结论 TEN可显著提高AD模型大鼠海马区nAChRα7表达,这可能是TEN改善学习记忆和认知功能的机制之一。     

远志皂苷减轻Aβ1-40诱导的AD大鼠脑神经元tau蛋白Ser396位点的过度磷酸化

目的:探讨远志皂苷对β-淀粉样肽_1-40(Aβ_1-40)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠脑神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法:大鼠右侧海马CA1区注射Aβ_1-40建立AD模型,并用远志皂苷(18.5 mg/kg、37.0 mg/kg和74.0 mg/kg)对大鼠进行灌胃治疗;免疫组织化学染色法观察大脑神经元中总tau蛋白、p-tau(Ser³⁹⁶)、蛋白激酶A(PKA)和蛋白磷酸酶2A(PP2A)蛋白的表达;蛋白免疫印迹技术检测大脑神经元中总tau蛋白含量、tau蛋白Ser³⁹⁶位点磷酸化以及PKA、PP2A蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,Aβ_1-40组大脑神经元中总tau蛋白含量、tau蛋白Ser³⁹⁶位点磷酸化水平和PKA蛋白的表达水平显著升高,而PP2A蛋白的表达水平明显降低。与Aβ_1-40组相比,远志皂苷各治疗组大鼠大脑神经元中总tau蛋白含量、tau蛋白Ser³⁹⁶位点磷酸化水平和PKA蛋白表达水平下降明显,而PP2A蛋白表达水平显著升高。结论:远志皂苷可能是通过下调PKA蛋白表达量,上调PP2A蛋白表达量,减轻AD大鼠脑神经元中tau蛋白Ser³⁹⁶位点的过度磷酸化,使神经细胞免遭Aβ_1-40的毒害。     

细叶远志皂苷对阿尔茨海默病大鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白1水平的影响

目的探讨细叶远志皂苷(TEN)对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)水平的影响。方法 60只SD大鼠随机分组,采用脑立体定位技术将β-淀粉样蛋白(Aβ)1~40注入大鼠右侧海马CA1区制备AD模型并给予细叶远志皂苷治疗4周。术后分别采用Morris水迷宫、Real-time PCR和Western blotting检测大鼠学习记忆能力及海马内LRP1 mRNA及蛋白的表达变化,并行免疫荧光检测海马区LRP1阳性神经元的变化。结果 1.Morris水迷宫:模型组大鼠学习记忆能力较正常组相比明显降低(P0.01),经TEN灌胃治疗后,TEN各剂量组逃逸潜伏期均不同程度缩短、游泳路程缩小、穿越虚拟平台次数增加,中、高剂量组差异具有统计学意义(P0.05,P0.01);2.Real-time PCR和Western blotting:模型组LRP1mRNA和蛋白的相对表达量均明显低于正常对照组(P0.01),给予TEN治疗后,治疗组LRP1mRNA和蛋白相对表达量随着TEN给药剂量的增加逐步升高,低剂量组差异不明显(P0.05),中、高剂量组与模型组之间的差异有统计学意义(P0.01);3.免疫荧光检测结果显示,海马区模型组LRP1阳性细胞明显减少,与正常组差异有统计学意义(P0.01);高剂量组LRP1阳性细胞数量增加明显,与正常组差异没有统计学意义(P0.05)。结论细叶远志皂苷可能通过提高脑内LRP1的含量,从而改善Aβ1~40诱导的AD大鼠的学习记忆能力。     

远志总皂苷对Aβ致小鼠神经干细胞突起损伤的保护作用

目的 研究远志总皂苷(TEN)对Aβ致伤小鼠海马神经干细胞(NSCs)突起损伤的保护作用. 方法 取新生24h内昆明小鼠海马NSCs,传代3次后采用Aβ致伤及TEN干预.细胞共分5组:对照组、Aβ1-42组、TEN5mg/L组、TEN 20 mg/L组、TEN 100 mg/L组,对照组用含2％B27的DMEM液培养;其余4组加入Aβ1-42,使其终浓度为12.5 μmol/L;TEN 5 mg/L组、TEN 20mg/L组、TEN 100 mg/L组在此基础上再加入TEN,调定终浓度为5 mg/L、20 mg/L、100 mg/L.干预3d后扫描电镜观察各组细胞,同时应用光学显微镜测量细胞突起长度及细胞突起个数. 结果 与对照组相比,Aβ1-42组NSCs突起数量减少,长度缩短,差异有统计学意义(P＜0.05).与Aβ1-42组相比,20 mg/L、100 mg/L TEN组突起数量明显增多,突起长度明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 TEN能够抑制Aβ1-42所致NSCs突起结构损伤,对NSCs具有保护作用.     

远志总皂苷对AD模型大鼠海马Ng及pCaMKⅡα表达的影响

目的观察远志总皂苷(TEN)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马CA1区神经颗粒素(Ng)以及磷酸化的钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα亚基(pCaMKⅡα)表达的影响,探讨TEN防治AD的作用机制。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,模型组,TEN低剂量治疗组(12.5mg/ml)和TEN高剂量治疗组(37.5 mg/ml),每组15只,模型组予以腹腔注射D-半乳糖(D-gal)致衰并联合鹅膏覃氨酸(IBO)定向Meynert基底核损毁法建立AD大鼠模型,TEN低、高剂量治疗组则在造模的同时TEN灌胃治疗8w,对照组则用等体积的生理盐水代替D-gal和IBO。采用免疫组化方法来检测大鼠海马CA1区Ng及pCaMKⅡα的表达。结果模型组大鼠海马CA1区Ng及pCaMKⅡα平均吸光度值比对照组显著降低(P<0.01);TEN治疗组两组平均吸光度值均较模型组显著增高(P<0.01);且TEN高剂量治疗组(37.5 mg/ml)的平均吸光度值比TEN低剂量治疗组(12.5mg/ml)显著增高(P<0.01)。结论 TEN可显著升高AD模型大鼠海马CA1区Ng及pCaMKⅡα的表达,且具有剂量依赖性。     

Neuroprotective effects of tenuigenin in a SH-SY5Y cell model with 6-OHDA-induced injury

Tenuigenin, an active component of Polygala tenuifolia root extracts, has been shown to provide antioxidative and anti-aging effects in Alzheimer's disease, as well as to promote proliferation and differentiation of neural progenitor cells. However, the effects of tenuigenin on Parkinson's disease remain unclear. In the present study, SH-SY5Y cells were utilized to determine the effects of tenuigenin on 6-hydroxydopamine (6-OHDA)-induced injury. Results showed that 1.0 × 10⁻¹–10 μM tenuigenin significantly promoted cell viability and reduced cell death. In addition, tenuigenin protected mitochondrial membrane potential (MMP) against 6-OHDA damage and significantly increased glutathione and superoxide dismutase expression. At the mRNA level, tenuigenin resulted in down-regulation of caspase-3, but up-regulation of tyrosine hydroxylase expression in 6-OHDA damaged cells. These results suggested that tenuigenin provides neuroprotection to dopaminergic neurons from 6-OHDA-induced damage. The neuroprotective mechanisms might involve antioxidative effects, maintenance of mitochondrial function, and regulation of caspase-3 and tyrosine hydroxylase expression and activity. Tenuigenin could provide a novel antioxidative strategy for Parkinson's disease.