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氯化镉诱发16HBE细胞系恶性转化过程中TIF3 p36的变化 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 探讨氯化镉诱发人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中不同阶段蛋白翻译起始因子(TIF3)p36 mRNA表达水平的变化,为进一步阐明氯化镉的分子致癌机制提供线索.方法 应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以及敏感先进的Taqman荧光定量PCR方法,检测并分析氯化镉诱发16HBE恶性转化不同阶段即转化期间细胞、转化细胞和成瘤细胞的TIF3 p36 mRNA表达量的变化.结果 相对于非转化对照细胞(16HBE),氯化镉诱发恶性转化不同阶段细胞(转化期间细胞、转化细胞和成瘤细胞)的TIF3 p36 mRNA基因表达水平均明显升高(P<0.01或P<0.05),其中低剂量组(5 μmol/L)所转化的各阶段细胞的eIF3 p36 mRNA平均表达量分别是对照细胞的3.1、5.9和9.9倍,中剂量组(10 μmol/L)的各阶段转化细胞的TIF3平均表达量分别是对照细胞的7.1、6.8和14.8倍,高剂量组(15 μmol/L)的各阶段转化细胞的TIF3 p36平均表达量分别是对照细胞的3.6、3.0和9.1倍.这些不同剂量组的研究结果提示,eIF3 p36的异常表达量与氯化镉诱发16HBE细胞恶变程度之间有正相关关系,但与镉的剂量无关.结论 氯化镉在诱发16HBE细胞恶变过程中,存在明显的蛋白翻译启动因子eIF3 p36异常表达现象,其表达水平与细胞的恶变程度密切相关,这可能是氯化镉诱发人细胞肿瘤的重要分子致癌机制之一. 相似文献
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目的建立鉴定登革病毒型别的双重实时Taqman PCR反应体系,以准确快速鉴定登革病毒型别。方法根据GenBank上已发表的登革病毒四个型别的全基因序列,进行对比分析,分别设计登革病毒的四个型别引物和探针,登革I、III型探针用FAM-TAMARA标记,登革II、IV型探针用JOE-TAMARA标记。经过条件优化后,建立检测登革病毒I/II型和III/IV型的两套双重实时荧光RT-PCR方法,扩增四型登革病毒RNA、登革病毒阴性样本和登革病毒RNA稀释样本,检测方法的特异性、重复性和检测限性。结果通过设计筛选序列和优化反应条件,建立登革病毒I、II型和登革病毒III、IV型的双重荧光PCR反应体系,通过试验证明,所建立的方法具有良好的特异性、重复性和检测限性,能准确快速地对登革病毒进行分型。结论建立了一种快速双重荧光PCR方法能同时对登革病毒进行分型和鉴定。 相似文献
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目的:建立实时荧光PCR快速检测艰难梭菌的方法。方法:以艰难梭菌磷酸丙糖异构酶(tpi)基因的保守序列为模板设计和合成特异性引物和荧光标记探针,建立实时荧光PCR检测体系,通过检测含有艰难梭菌标准菌株浓度为106-10 CFU/ml的细菌培养物及加标模拟样本进行敏感性分析,并对其特异性和干扰性进行评价。结果:该方法只对艰难梭菌进行特异性扩增,其他常见的病原菌均不能扩增;整个检测过程只需要2 h,对艰难梭菌菌悬液可检测至10 CFU/ml细菌,对加标粪便样本可检测至1000 CFU/ml细菌。结论:本研究建立的实时荧光PCR检测艰难梭菌方法具有快速、特异、敏感性高等优点,能实现对艰难梭菌的快速检测。 相似文献
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摘要:目的 在省级脊髓灰质炎(脊灰)实验室建立一种快速、灵敏、准确的脊灰病毒(Poliovirus,PV)型内鉴定(Intratypic Differentiation,ITD)及基因型鉴定的方法。方法 以PV衣壳蛋白(Capsid Protein)VP1编码区基因序列为目标,设计并合成引物和 Taqman 探针,建立实时荧光定量RT-PCR(Real-time RT-PCR,rRT-PCR)检测体系,并考察该方法的重复性、灵敏性和特异性。结果 该方法能快速、灵敏地鉴定出PV血清型及毒株类型,在1.0×108 copies/μl~1.0×103 copies/μl检测范围之间有良好的线性关系,相关系数为0.993,最低检测限为103.5CCID50/0.1 ml。结论 成功在省级实验室建立了PV的r RT-PCR检测技术,该技术特异性强,敏感性高,操作简便快速,适用于PV的型内鉴定和基因型鉴定,可应用于实验室诊断,为免疫策略快速提供依据。 相似文献
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目的 建立以毒素基因A/B为靶基因的产毒艰难梭菌的快速定量检测方法.方法 通过设计艰难梭菌毒素A/B基因的特异引物及探针,建立标准产毒菌株DNA(ng)含量与Ct值的标准曲线.结果 该方法仅对产毒艰难梭菌进行特异性扩增,11种其他常见的致病菌及非产毒艰难梭菌均不能扩增; tcdA和tcdB基因扩增标准曲线线性关系R值分别为0.9975、0.9984,检测低限均为2.5×10-3ng.结论 该研究建立的方法具有快速、灵敏、特异性高等优点,可用于艰难梭菌毒素基因的定量检测. 相似文献
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实时荧光定量PCR标准品的制备及应用 总被引:15,自引:3,他引:15
目的探讨并建立快速而准确用于实时荧光定量PCR标准品的方法.方法通过培养细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA后做PCR,电泳,胶回收,T-A克隆,测序后,大量提取质粒,送公司定量.结果获得了预期希望的质粒.结论该方法能大量制备质粒标准品,在实验中取得较满意的效果. 相似文献
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Q. T. Dinh A. Cryer M. Trevisani S. Dinh S. Wu L. B. Cifuentes W. K. Feleszko A. Williams P. Geppetti K. Fan Chung W. Heppt B. F. Klapp A. Fischer 《Clinical and experimental allergy》2006,36(8):1039-1048
BACKGROUND: Protease-activated receptor 2 (PAR 2) has been shown to be responsible for trypsin and mast cell tryptase-induced airway inflammation. Here, the present study aimed to explore the expression of PAR 2 in the nasal mucosa of seasonal allergic rhinitis (SAR). METHODS: Study subjects were recruited for the study by medical history, physical examination and laboratory screening tests. Using immunohistochemistry, laser-assisted cell picking and subsequently real-time PCR, nasal mucosa biopsies of SAR patients were investigated for PAR 2 gene and protein expression in complex tissues of the nasal mucosa. RESULTS: Gene and protein expression of PAR 2 was firstly detected in nasal mucosa of SAR patients. The relative gene expression level of PAR 2 was significantly increased in complex tissues of the nasal mucosa of SAR (6.21+/-4.02 vs. controls: 1.38+/-0.86, P=0.004). Moreover, PAR 2 mRNA expression in epithelial cells (SAR: 4.78+/-4.64 vs. controls: 0.84+/-0.61, P=0.003) but not in mucus (SAR: 1.51+/-1.15 vs. controls: 1.35+/-1.02, P=0.78) and endothelial cells (SAR: 1.20+/-0.57 vs. controls: 1.73+/-1.30, P=0.5) was found to be significantly changed in the nasal mucosa in SAR. Using double immunohistochemistry the present study demonstrated that the total numbers of mast cells (P=0.0003) and eosinophils (P=0.03) and the numbers of eosinophils expressing PAR 2 (P=0.006) were significantly elevated in the nasal mucosa of SAR compared with the controls. CONCLUSION: The abundant presence and distribution of gene and protein expression of PAR 2 in different cell types in the nasal mucosa under normal situation, the increased expression of PAR 2 in epithelial cells and the increased number of eosinophils with PAR 2 suggest that PAR 2 may contribute to the pathogenesis of allergic diseases such as SAR. 相似文献
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目的:应用两种不同方法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者CD4~+T细胞p16基因甲基化状态,比较两种检测方法的差异。方法:采用以Taqman探针为基础的MSP法(方法1)和以SYBR Green Ⅰ为基础的MSP法(方法2)分别检测40例SLE患者和20例正常人CD4~+T细胞中p16基因启动子区甲基化状态。结果:Taqman探针方法的结果为:SLE患者CD4~+T细胞p16基因甲基化阳性率(35.7%,10/28)高于对照组(10%,2/20),两者比较差异有统计学意义(x~2=4.11,P0.05)。SYBR Green Ⅰ方法的结果为:患者组和对照组的CD4~+T细胞的p16基因均呈高甲基化状态,应用t检验分析发现P0.05,二者无统计学差异。结论:Taqman探针法消除了引物二聚体和非特异性扩增对试验结果的影响,提高了结果的特异性和准确性,被证明是进行DNA甲基化状态检测的可靠方法。 相似文献