TSHRV656F Activating Variant of the Thyroid Stimulating Hormone Receptor Gene in Neonatal Onset Hyperthyroidism: A Case Review

An activating variant of the thyroid stimulating hormone receptor (TSHR) gene is one of the rare causes of neonatal hyperthyroidism. This disorder may occur as a result of an autosomal dominant inheritance or sporadically through de novo variation. Here we present a case of neonatal onset congenital non-autoimmune hyperthyroidism (NAH) with a sporadic germline activating TSHRV656F variant. A female infant with tachycardia, who was transferred due to hyperthyroidism in the first week of life, displayed no other symptoms or signs. The patient’s mother did not have Graves’ disease, and TSHR stimulating antibodies were not present in the mother or baby. Imaging showed thyroid gland hyperplasia and left ventricular hypertrophy, the patient was subsequently put on methimazole treatment. After six months undergoing treatment, a heterozygous p.Val656Phe (V656F) (c.1966G>T) variant was detected on exon 10 of the TSHR gene. The variant was not identified in the mother and father, so the case was assumed to be sporadic. In conclusion, although the literature describes V656F variant as a somatic variant in children and adults with toxic thyroid nodule(s) that results in the structural activation of the TSH receptor, no previous cases of neonatal hyperthyroidism due to TSHRV656F variant have been reported. This study is the first case review that highlights the relationship between TSHRV656F variant and neonatal onset NAH.     

实时定量RT-PCR方法检测豚鼠TSHR免疫BALB/c小鼠甲状腺TSHR的表达

目的：建立外标准法SYBR GREENI实时定量（real—time）RT—PCR方法，以检测豚鼠TSHR分子免疫对BALB／c小鼠甲状腺TSHRmRNA的表达的影响。方珐：取正常BALB／c小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA．逆转录后进行PCR，得到333bp扩增产物。经回收纯化后作为real—time PCR的标准品。稀释为10^6、10^5、10^4、10^3、10^2、10^1拷贝，制作标准曲线；并同时进行普通PCR，比较其灵敏度。优化反应条件使溶解曲线有特异扩增。检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB／c小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达。结果：建立的外标准法SYBR GREENI实时定量RT—PCR方法可以灵敏的检测到10copy的核酸，灵敏度为普通PCR的10^4倍；溶解曲线只有特异峰，溶解温度为82．9℃。没有明显的引物二聚体和非特异峰出现。不同标准点批间变异系数范围为5．8％．14．3％（n=6）。与对照组比较，TSHR大分子免疫的BALB／c小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平显著升高（P〈0．05）。结论：外标准法SYBR GREENI实时定量lit—PCR具有灵敏度高，特异性强，重复性好的特点，比普通PCR更精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHR mRNA的水平。     

正丁醇法制备大鼠脂肪组织细胞膜TSHR

目的:利用正丁醇对大鼠脂肪组织细胞膜上的促甲状腺素受体(TSHR)进行提纯,以获得膜受体的均一水溶性溶液。方法:使用差速离心法获得大鼠含TSHR脂肪组织细胞膜碎片后,用正丁醇进一步提纯;采用SDS-PAGE和ELISA法鉴定所得蛋白完整性、生物学活性,并用BCA法测定相关蛋白含量。结果:正丁醇提纯的大鼠TSHR结构完整;经正丁醇提纯后的TSHR包被酶标孔孔间测定值变异系数较未经正丁醇提取组以及阳性对照组低。结论:经正丁醇提纯后的大鼠TSHR可以满足临床ELISA法检测Graves病患者血清TRAb的要求,同时可以降低酶标孔间测定值的误差。     

一个先天性甲状腺功能亢进症家系的排除性定位分析

目的 对一个常染色体显性遗传的先天性甲状腺功能亢进症家系,进行与已知致病基因TSHR和THRB的连锁分析以确定此家系致病基因是否为这2个已知基因.方法 选择3个与TSHR和THRB紧密连锁的微卫星标记物D14S74、D3S2338和D3S1266,进行微卫星标记的基因连锁分析,采用Genemapper 3.5软件分析数据. 结果 3个微卫星标记物的LOD值均小于1,显示该家系致病基因与这3个位点均不连锁,提示该家系可能存在新致病基因. 结论 常染色体显性遗传类型的先天性甲状腺功能亢进症可能有新致病基因.     

分化型甲状腺癌细胞株131Ⅰ照射后摄碘能力及特异基因表达变化的实验研究

目的:分化型甲状腺癌131Ⅰ治疗后可出现失分化的现象,本文通过体外培养的甲状腺癌FTC-133细胞株在低剂量131Ⅰ照射后摄碘能力的变化及甲状腺细胞特异蛋白(NIS、RSHR、TPO、Tg)及其mRNA水平变化,初步研究131Ⅰ照射与甲状腺癌失分化的关系.方法:培养的FTC-133细胞株,用诊断剂量的131Ⅰ内照射(不同时间,不同剂量),测量细胞摄125Ⅰ能力的变化,并利用蛋白印迹法、放射免疫分析和免疫荧光检测NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白含量和定位,利用实时荧光聚合酶链反应检测上述蛋白mRNA水平的变化.结果:131Ⅰ照射使FTC-133细胞摄125Ⅰ能力(cpm/min值)下降,各试验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),利用15μCi照射48h吸碘率下降最明显,下降率为34.6%(t=12.72,P<0.01),NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白以及mRNA均下降,在48h下降最明显,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),蛋白定位照射前后无明显变化.结论:131Ⅰ照射可使FTC-133细胞摄碘能力下降,NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白及mRNA水平下降,131Ⅰ照射可以使分化型甲状腺癌细胞出现分化程度降低.     

分化型甲状腺癌细胞株131^I照射后摄碘能力及特异基因表达变化的实验研究

目的：分化型甲状腺癌131^I治疗后可出现失分化的现象,本文通过体外培养的甲状腺癌FTC-133细胞株在低剂量131^I照射后摄碘能力的变化及甲状腺细胞特异蛋白（NIS、RSHR、TPO、Tg）及其mRNA水平变化,初步研究131^I照射与甲状腺癌失分化的关系。方法：培养的FTC-133细胞株,用诊断剂量的131^I内照射（不同时间,不同剂量）,测量细胞摄125^I能力的变化,并利用蛋白印迹法、放射免疫分析和免疫荧光检测NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白含量和定位,利用实时荧光聚合酶链反应检测上述蛋白mRNA水平的变化。结果：131^I照射使FTC-133细胞摄125^I能力（cpm/min值）下降,各试验组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）,利用15μCi照射48h吸碘率下降最明显,下降率为34.6%（t=12.72,P〈0.01）,NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白以及mRNA均下降,在48h下降最明显,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）,蛋白定位照射前后无明显变化。结论：131^I照射可使FTC-133细胞摄碘能力下降,NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白及mRNA水平下降,131^I照射可以使分化型甲状腺癌细胞出现分化程度降低。     

人促甲状腺激素受体全长表达载体在真核细胞内的稳定表达

目的构建pcDNA3.1/人TSH受体（human thyroid-stimulating hormone receptor,hTSHR）基因真核表达载体（已完成）,将该真核表达载体在CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）中表达,并筛选获得稳定表达细胞株。方法通过脂质体介导,用重组质粒pcDNA3.1-hTSHR转染CHO细胞,以G 418筛选稳定表达细胞株,挑取单克隆,扩大培养并传代;取P5代细胞,抽提基因组DNA及蛋白分别用PCR及Western blot方法鉴定被转染CHO细胞hTSHR的表达情况。结果得到阳性单克隆5个,传代培养。P5代细胞PCR扩增产物为约530 bp特异性条带,大小与预期相符,未见非特异性条带。Western印记法结果表明被转染CHO传代细胞有hTSHR蛋白表达。结论pcDNA3.1-hTSHR真核表达载体可以在CHO细胞中稳定表达,成功构建稳定表达细胞株。为测定自身免疫性甲状腺疾病患者血清TSHR奠定了基础。