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目的采用双重限制性荧光标记技术(doub le restriction fluorescent labeling,DRFL)标记微量核酸样品,提高基因芯片用于病原体检测的灵敏度。方法以限制性显示技术处理SARS-CoV核酸样品,分别采用传统限制性荧光标记技术(直接采用荧光标记的通用引物标记)和双重限制性荧光标记技术(荧光标记的通用引物和荧光标记的dNTP的双重荧光标记)标记,进一步在同等条件下与基因芯片进行杂交、清洗和芯片扫描检测。通过对杂交结果的分析,比较2种标记方法的标记效果。结果以DRFL方法标记SARS基因片段,其荧光强度均值比传统荧光标记方法提高了3.5835倍。结论DRFL技术有效地提高单位分子标记片段的荧光强度值,提高了检测的灵敏度,可用于微量病原体核酸样品的基因芯片检测。 相似文献
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Imen Bouzouita Henda Draoui Samia Mahdhi Leila Essalah Leila Slim Saidi 《African health sciences》2021,21(3):985
BackgroundA rapid accurate identification of Mycobacterium bovis is essential for surveillance purposes.ObjectivesA PCR pncA-Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) and a multiplex PCR based on the detection of 3 regions of difference (RD-PCR): RD9, RD4 and RD1 were evaluated for the identification of M. bovis in lymph nodes cultures, in Tunisia, during 2013–2015.MethodsEighty-two M. tuberculosis complex strains were identified using the biochemical tests, GenoType MTBC assay, PCR pncA-RFLP and RD-PCR.ResultsThe PCR pncA-RFLP showed that 54 M. bovis strains, identified by GenoType MTBC, had a mutation at position 169 of pncA gene. Twenty-eight strains did not show any mutation at this position 27 M. tuberculosis isolates and one M. caprae. The PCR pncA-RFLP had a sensitivity of 100.0% (95%CI: 93.3 -100.0) and a specificity of 100.0% (95%CI: 87.9–100.0) for identifying M. bovis. The RD-PCR showed that all M. bovis strains had the RD9 and RD4 deleted but presented RD1. RD-PCR also presented high sensitivity and specificity in detecting M. bovis strains (100.0%).ConclusionsPCR pncA-RFLP and RD-PCR represent very accurate and rapid tools to identify M. bovis. They can be easily implemented in each laboratory due to their low cost and easy use. 相似文献
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用RD-PCR技术获取IL-1β作用前后NIT-1细胞的差异表达基因 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:获取IL-1β作用前后NIT-1细胞的差异表达基因,为进行差异基因的克隆和鉴定奠定基础。方法:利用转基因小鼠胰岛β细胞系(NIT-1),通过应用一种改良的筛选差异基因的技术(Restriction diSplay PCR,RD-PCR技术)筛选cDNA的差异表达条带。结果:通过对比对照组与实验组凝胶电泳结果,找出79条表达有差异的奈带,包括实验组出现的新条带和实验组缺失的条带。结论:应用RD-PCR技术成功分离了IL-1β作用前后NIT-1细胞的差异表达条带,为大量筛选、克隆与鉴定与B细胞破坏机制相关的新基因奠定基础.有助于了解胰岛素依粕型耱尿病(IDDM)发病的分子机制。 相似文献
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目的 采用双重限制性荧光标记技术(double restriction fluorescent labeling,DRFL),标记微量核酸样品,探索提高基因芯片用于病原体检测的灵敏度.方法 以限制性显示技术处理SARS-CoV核酸样品,分别采用传统限制性荧光标记技术(直接采用荧光标记的通用引物标记)和双重限制性荧光标记技术(荧光标记的通用引物和荧光标记的dNTP的双重荧光标记)进行处理,并进一步与基因芯片进行杂交,在同等条件下进行杂交、清洗和进行基因芯片的扫描检测.通过对杂交结果的分析,比较两种标记方法的标记效果.结果 以DRFL方法标记SARS基因片段,其荧光强度均值提高了3.5835倍,但互相对应的每个探针之间的荧光信号提高程度存在差异.结论 DRFL技术能有效地提高单位分子标记片段的荧光强度值,并进一步提高了检测的灵敏度,可用于微量病原体核酸样品的基因芯片检测. 相似文献
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目的设计并应用60 mer寡核苷酸基因芯片实现对SARS冠状病毒的检测.方法根据寡核苷酸基因芯片的设计原则设计出30条60 mer的寡核苷酸片段,覆盖SARS冠状病毒(以TOR2株为参考序列,GENEBANK索取号:AY274119)全基因组,点样制备成12×12的寡核苷酸基因芯片,将临床诊断SARS患者痰液标本抽提病毒RNA,采用限制性显示技术进行标记,将标记好的样品与芯片杂交,洗脱,扫描.初步探索寡核苷酸芯片诊断SARS冠状病毒的敏感性及特异性,并对芯片做进一步的优化.结果来自SARS患者样品与芯片上的多个SARS探针杂交,出现了明显的荧光信号;阴性和空白对照探针上没有杂交信号,而对照样品仅与一个SARS探针有杂交.结论采用60 mer寡核苷酸基因芯片可以从基因水平实现对SARS冠状病毒多段序列的平行检测,对于提高检出率有一定意义,此外,尚可用于监测在发病过程的各个阶段中病毒基因的活动状况. 相似文献
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