五倍子水提取物对人牙周膜细胞保护作用的实验研究

目的:观察五倍子水提取物对内毒素(LPS)所致人牙周膜细胞(PDLC)活性降低、超微结构损伤、在牙骨质片表面附着减少、以及碱性磷酸酶(ALP)活性降低的影响,探讨五倍子水提取物对PDLC的保护作用.方法:采用细胞培养技术、3H-TdR掺入法、细胞计数法、透射与扫描电子显微镜技术、酶联免疫技术观察五倍子水提取物对PDLC的保护作用.结果:培养液中加入100μg/mL LPS时,PDLC活性和ALP活性受到明显抑制,超微结构损伤,细胞在牙骨质片表面附着减少.加入五倍子水提取物溶液后,对LPS抑制PDLC活性和ALP活性,以及超微结构损伤、牙骨质片表面附着减少有拮抗作用,该作用随五倍子水提取物浓度增加而增加,到10μg/mL时,达到峰值.结论:五倍子水提取物对PDLC具有保护作用,有望成为防治牙周病的药物.     

五倍子水提取物抑制LPS对牙周膜细胞附着牙骨质片表面的影响

目的观察五倍子水提取物对LPS抑制PDLC在牙骨质片表面附着的影响。方法采用细胞培养技术,细胞计数法及扫描电镜进行观察。结果加入五倍子水提取物溶液后,对LPS抑制PDLC在牙骨质片表面的附着有明显拮抗作用,该作用随五倍子水提取物浓度增加而增加,到10μg/mL时,达到峰值。另外,培养液中先加入不同浓度的五倍子水提取物溶液,培养24h后再加入LPS时(A组),与LPS和五倍子水提取物溶液同时加入组(B组)相比,除对LPS抑制PDLC在牙骨质片表面附着有同样拮抗趋势外,当五倍子水提取物浓度为10μg/mL、20μg/mL时,A组的细胞附着数明显高于B组。扫描电镜显示,A组与B组牙骨质片表面细胞数量较多,细胞形态丰满,细胞胞突伸展明显,并相互交织成栅栏状、网状结构,部分细胞呈叠层生长,其中A组效果更明显。结论五倍子水提取物对LPS抑制PDLC在牙骨质片表面附着有拮抗和保护作用。     

五倍子水提取物对LPS抑制PDLC的ALP活性的影响

目的：观察五倍子水提取物对LPS抑制牙周膜细胞(Periodontal ligament cell，PDLC)的ALP活性的影响。方法：本实验采用细胞培养技术和酶联免疫技术，对LPS抑制PDLC的ALP活性的影响进行观察。结果：100μg／mL LPS可显著抑制ALP活性。加入五倍子水提取物后，对LPS抑制ALP活性有拮抗作用，该作用随五倍子水提取物浓度增加而增加，到10μg／mL时，达到峰值。另外，培养液中先加入不同浓度的五倍子水提取物溶液，培养24h后再加入LPS时(A组)，与LPS和五倍子水提取物溶液同时加入组(B组)相比，除对LPS抑制ALP活性有同样拮抗趋势外，A、B两组间比较，B组效果更佳。结论：五倍子水提取物对LPS抑制ALP活性具有保护作用。     

淫羊藿苷对内毒素抑制牙周膜细胞ALP表达的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells,PDLC）增殖及对内毒素（Lipopolysaccha-ride,LPS）干扰下碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的影响。方法：原代培养PDLC,MTT法检测不同浓度（0、10^-5～10^-9mol／L）淫羊藿苷对PDLC增殖的影响;RT—PCR、对硝基苯酚法测定淫羊藿苷对LPS抑制PDLC的ALPmRNA表达和分泌的影响。结果：淫羊藿苷在一定浓度下（10^-6～10^-7mol／L）可促进PDLC增殖;10υg／mLLPS可抑制PDLC的ALP活性;加入10^-6mol／L淫羊藿苷干扰后,对LPS抑制PDLC的ALP有拮抗作用,可提高其mRNA表达和活性。结论：淫羊藿苷在一定浓度时可促进PDLC增殖;可能通过拮抗LPS抑制其ALP的活性。     

流式细胞技术分析骨形成蛋白对人牙周膜细胞增殖和分化的影响

目的 :检测牛骨形成蛋白 (b BMP)对离体培养的人牙周膜细胞 (PDL C)的 DNA合成和细胞周期的影响情况。方法 :培养的第 7代 PDL C分成对照组和 BMP作用实验组 ,以含 1% FBS的 DMEM培养 72 h;消化下细胞 ,固定 ,调整细胞数在 1× 10 6/m l,加入复合 DNA荧光检测试剂后 4℃染色 3 0 m in,用流式细胞仪 (FCM)测试 ,联机专用软件分析处理。结果 :实验组 PDL C的 DNA合成量 (S% )显著高于对照组 ;G1 %较对照组降低 ,反映细胞增殖活力的增殖指数 Pr I值 (S G2 M) %增高。结论 :提示 BMP具有促进人 PDL C增殖的作用 ,可能主要是通过促使处于G1 期的细胞进入 S期来实现的。     

人基因重组骨形成蛋白-2对牙周韧带细胞群成纤维表型的影响

目的：探讨人基因重组骨形成蛋白-2（rhBMP-2）对牙周韧带细胞群（PDLC）成纤维表型的影响。方法：PDLC在含不同浓度的rhBMP-2的培养液中培养,采用免疫细胞化学技术做表皮生长因子受体（EGFR）的检测,并用图像分析软件分析EGFR表达的强弱。结果：rhBMP-2作用下,PDLC的EGFR的表达有变化（P〈0．05）,25～100μg／L组EGFR的表达减弱,100μg／L组最弱,随rhBMP-2浓度上升,EGFR的表达又有增强的趋势。结论：rhBMP-2对PDLC的成纤维表型产生了影响,合理剂量的rhBMP-2应用可以保证PDLC成纤维表型的较高表达,使种植体周牙周韧带的构建成为可能。     

人牙周膜成纤维细胞与牙龈成纤维细胞差异表达基因扣除文库的构建

目的建立人牙周膜成纤维细胞(periodontalligamentfibroblast,PDLF) 与牙龈成纤维细胞(gin-givalfibroblast,GF)差异表达基因的扣除文库。方法体外培养人PDLC和GF,分别提取mRNA,采用基于PCR和消减杂交的基因克隆技术构建人PDLC与GF差异表达基因的扣除文库。结果成功构建了人PDLF与GF细胞差异表达基因的扣除文库,文库容量为4×l02。结论基于PCR和消减杂交的基因克隆技术是构建细胞间差异表达基因扣除文库的较为简洁而有效的方法。     

人牙周膜细胞及炎症龈组织中mCD14表达的免疫组化研究

目的研究人PDLC及炎症龈组织中mCD14表达情况。方法采用免疫组化SABC方法。结果正常人牙周膜细胞mCD14染色为阳性反应，但细胞经脂多糖刺激2天后，胞浆染色要比未刺激的细胞染色深。健康牙龈组织中mCD14表达阴性；边缘性龈炎和牙周炎龈组织上皮棘层细胞mCD14呈强阳性表达，增生性龈炎也呈阳性表达。结论mCD14可在非髓样细胞中表达；mCD14可能在局部作为脂多糖受体参与牙周组织的破坏。     

人牙周韧带细胞在聚羟基乙酸支架上体外三维培养的实验研究

目的：应用聚羟基乙酸(polyrglycolic acid，PGA)作为人牙周韧带细胞(periodontal ligament cell，PDLC)的三维体外培养支架，观察细胞的形态学特征和生物学性状。方法：将人牙周韧带细胞与PGA三维支架进行体外复合培养，用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞形态结构及其与支架的粘附性和组织相容性，并用Ⅰ型胶原抗体检测细胞的Ⅰ型胶原分泌情况。结果：光镜和扫描电镜显示，人PDLC在PGA三维支架上粘附良好，分泌基质旺盛。免疫组化染色显示细胞支架复合物中Ⅰ型胶原表达阳性。结论：人PDLC在PGA三维支架上能够维持其形态学特征及生物学性状。聚羟基乙酸具有良好的粘附性和生物相容性，适宜进一步作为构建组织工程化牙周韧带的支架材料。     

人牙周韧带细胞与壳聚糖-胶原支架体外培养的实验研究

目的:探讨壳聚糖-胶原支架在人牙周韧带细胞(PDLC)体外培养中的作用.方法:将体外培养PDLC接种于壳聚糖-胶原支架上,通过MTT法测定细胞增殖情况,通过半定量PCR检测细胞mRNA合成变化.结果:与传统的平板培养相比,PDLC在壳聚糖-胶原支架上的增殖及mRNA合成情况有显著性差异(P<0.05).结论:该复合支架可以作为PDLC的载体;对PDLC的增殖及细胞外基质的合成均有较好地促进作用.