独活醇提物及其单体蛇床子素体外抗肿瘤活性的实验研究

目的：探讨独活醇提物及其单体蛇床子素在体外对人胃癌细胞株MKN-45、BGC-823、人肺腺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7及人结肠癌细胞株LOVO生长的影响.方法：将不同浓度中药独活醇提物及其单体蛇床子素作用于人胃癌细胞株MKN-45、BGC-823、人肺腺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7及人结肠癌细胞株LOVO,倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定独活醇提物及其单体蛇床子素对5株肿瘤细胞的增殖抑制率.结果：蛇床子素浓度在3.75μg/ml-120 μg/ml之间对MKN-45、BGC-823、A549、MCF-7及LOVO均有明显的抑制作用,且呈剂量-效应关系,IC50值分别为43.299μg/ml、56.790μg/ml、37.444 μg/ml、38.397μg/ml、36.231 μg/ml;相同条件下,独活醇提物对5株肿瘤细胞的抑制作用都较弱.结论：蛇床子素在体外能够抑制MKN-45、BGC-823、A549、MCF-7和LOVO的增殖,且LOVO细胞对蛇床子素最敏感,蛇床子素对5株肿瘤细胞的抑制作用均强于独活醇提物,说明蛇床子素有可能是独活醇提物中抗肿瘤作用的主要成分.     

阴洗液质量标准研究

目的:制定阴洗液的质量标准。方法:采用薄层色谱法鉴别阴洗液中苦参、蛇床子、黄柏,高效液相色谱法测定蛇床子素的含量,采用phenom enx C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(70:30),流速1.0 m l.m in-1,柱温:40℃,检测波长:322 mm。结果:薄层斑点清晰,含量测定重现好,蛇床子素在0.03804~0.192μg范围内线性关系良好,平均回收率为97.62%,RSD%=1.04%。结论:方法简便,准确,可供本品质量控制。     

HPLC同时测定独活中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量

目的建立同时测定中药独活中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量的HPLC方法。方法药材样品加乙醚用索氏提取6h,水浴挥干,甲醇定容;采用MerckC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1mol/L硫酸铵溶液(70:30),用硫酸溶液(1→5)调节pH为3.0,流速为1.0mL/min,检测波长为322nm。结果理论板数以蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯计算均不低于5000,两物质的色谱峰分离度>1.5,对称因子均在0.95～1.05。蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯的线性范围分别为20.2～161.9和5.1～41.2mol/L,平均回收率为99.2%和98.8%,RSD为1.56%和2.16%。结论本实验建立的色谱方法敏感、准确、重现性好,可用于中药材独活的质量控制。     

蛇床子素抑制血栓形成及其作用机制研究

目的研究蛇床子素抑制血栓形成及其可能的作用机制。方法利用大鼠静脉血栓形成模型和动-静脉旁路血栓形成模型测定给予蛇床子素10mg／kg、20mg／kg、40mg／kg后血栓湿重和干重，同时在动-静脉旁路血栓形成模型中测定大鼠血清NO含量，血浆TXB2和6-keto—PGF1α的含量。结果蛇床了素20mg／kg、40mg／kg组可以明显抑制大鼠静脉血栓形成，减轻血栓湿重和于重；蛇床子素10mg／kg、20mg／kg、40mg／kg组可以明显抑制大鼠动-静脉旁路血栓形成，减轻血栓湿重和干重，同时增加血清中NO的含量，降低血浆中TXB2的含量和增加血浆中6-keto—PGF1α的含量。结论蛇床子素可明显抑制大鼠血栓形成．其作用机制可能与增加血清中NO的含量，降低血浆中TXB2的含量和TXB2/6-keto—PGF1α的比值有关。     

蛇床子素对大鼠成骨细胞中0PG和RANKL基因mRNA表达的影响

目的 观察蛇床子素(OST)对体外培养的大鼠成骨细胞中OPG中RANKL基因表达的影响。方法 新生SD大鼠颅骨成骨细胞培养,设空白对照组和用不同浓度蛇床子素培养液(10-7,10-6,10-5mol／L)培养处理的大鼠成骨细胞为实验组,未经处理的细胞为空白对照组,分别提取48 h和7 d的细胞总mRNA,用RT-PCR技术分析OPG／RANKL的mRNA表达情况进行半定量比较。结果48h两基因都已有表达,相对空白对照组,OST上调OPG mRNA的表达(P<0.05),但对RANKL的表达无显著影响,OPG／RANKL比值变大;7 d时OPG和RANKL表达都有增加,OST上调OPG的表达(P<0.01),OST在10-5mol／L下调RANKL的表达(P<0.05),OPG／RANKL比值增大。结论OST可以增加大鼠成骨细胞OPG的表达,同时轻微抑制RANKL的表达,早期对RANKL的表达影响不大。     

基于BGP、TGF-β1的表达探究蛇床子素对去卵巢致骨质疏松大鼠的作用

目的观察蛇床子素对去卵巢致骨质疏松大鼠的影响。方法选取3月龄雌性SD大鼠30只,随机分为蛇床子素组(A组)、模型对照组(B组)、假手术组(C组),各10只。A、B 2组摘除卵巢构建去势大鼠骨质疏松模型,C组仅进行手术、不摘除卵巢。造模成功后,分别给予相应药物灌胃,连续给药12周,处死。然后测量骨密度,检测治疗后血清BGP、TGF-β1、钙指标。结果B组大鼠股骨骨密度较C组明显降低(P<0.05);经12周治疗,A组股骨骨密度较B组明显升高(P<0.05)。与C组比较,B组大鼠血清中BGP含量升高、TGF-β1降低(P<0.05);与B组比较,A组大鼠血清中BGP降低、TGF-β1含量升高(P<0.05)。与C组比较,B组大鼠血清Ca水平明显降低(P<0.05);与B组比较,A组大鼠血清Ca水平明显升高(P<0.05)。差异均有统计学意义。结论蛇床子素能够有效通过调节大鼠体内激素分泌改善去卵巢大鼠的骨代谢异常,提高骨密度,对骨质疏松症起到一定的防治作用。     

蛇床子素与金雀异黄酮对大鼠峰值骨量影响的比较研究

研究蛇床子素（Osthole,OST）与金雀异黄酮（Genistein,GEN）对大鼠峰值骨密度与骨质量的影响。方法：采用随机分组法将36只1月龄SD雌性大鼠（125±3）g分为3组：对照组（CON,等体积蒸馏水,n=12）,蛇床子素组（OST,9mg·kg^-1d^-1i．g．,n=12）,金雀异黄酮组（GEN,10mg·kg^-1d^-1i．g．;n=12）。每周监测体重,每月用双能x射线骨密度仪（DEXA）检测全身骨密度。3个月后处死所有动物,采用酶联免疫法测定血清骨钙素（Osteocalcin,0C）和抗酒石酸性磷酸酶5b（Tartaficacid phosphatase 5b,TRACP 5b）含量,用DEXA测定股骨骨密度,用μCT分析股骨组织微结构,树脂包埋不脱钙骨组织切片技术做胫骨骨形态分析,用万能材料试验机测定股骨生物力学,称量心、肝、胃、肾、肾上腺和子宫湿重,计算器官指数,并做常规病理学检测。结果：大鼠的体重、器官指数差异无统计学意义（P〉0．05）;病理学观察未见异常发生;第1、2个月全身骨密度无明显差异（P〉0．05）,第3个月后OST组全身骨密度显著高于CON组、GEN组,上述3组中股骨骨密度与全身骨密度的变化呈相同趋势（P〈0．05）。与对照组相比,OST组、GEN组血清OC水平升高,而与CON组、GEN组相比,0ST组的TRACP5b含量下降（P〈0．05）;OST组的骨体积百分率、骨小梁厚度和骨小梁数量均高于CON组,但骨小梁分离度和模型系数均显著低于CON组（P〈0．05）,OST组与GEN组的上述指标虽未出现统计学差异（P〉0．05）,但平均值OST组高于GEN组;OST组骨小梁厚度和骨小梁数量均高于CON组、GEN组,但骨小梁分离度低于CON组、GEN组;OST组股骨最大载荷、弹性模量和屈服强度均明显高于CON组（P〈0．05）,OST组与GEN组虽未出现统计学差异（P〉0．05）,但平均值OST组高于GEN组。结论：口服蛇床子素能有效提高大鼠峰值骨量,从而?     

不同剂量蛇床子素对OPG基因敲除小鼠和去卵巢骨质疏松大鼠作用疗效的比较研究

目的 观察不同剂量蛇床子素对OPG基因敲除小鼠和去卵巢骨质疏松大鼠的影响。方法 选择3种不同剂量的蛇床子素作用于OPG基因敲除小鼠和去卵巢骨质疏松大鼠,以双能X骨密度仪检测动物全身骨密度的变化;将动物腰椎做硬组织切片,并进行骨形态计量学分析其骨小梁的变化。结果 对于OPG基因敲除小鼠,蛇床子素能提高其全身BMD,以中剂量（10mg/（kg?d））组提高最为明显,低剂量（5mg/（kg?d））次之,而高剂量（15mg/（kg?d））组效果最差。蛇床子素能提高OPG基因敲除小鼠腰椎骨小梁体积分数,增加骨小梁数目,增加骨小梁厚度,降低骨小梁分离度,其中以5mg/(kg?d)组作用最明显,其次为10mg/(kg?d)组,而15mg/(kg?d)组则效果最差;对于去卵巢骨质疏松大鼠,不同剂量的蛇床子素均能显著提高大鼠全身BMD,其中以中剂量（100mg/（kg?d））组为最佳。蛇床子素能显著提高大鼠腰椎骨小梁体积分数,以100mg/（kg?d）组最明显。显著增加大鼠腰椎骨小梁数目,以75mg/（kg?d）组最明显。蛇床子素100mg/（kg?d）组能增加大鼠腰椎骨小梁厚度。不同剂量的蛇床子素均能显著降低大鼠腰椎骨小梁分离度,其中以75mg/（kg?d）组和100mg/（kg?d）组最明显。结论 蛇床子素能促进骨形成,抑制骨吸收,从而起到抗骨质疏松的作用,其疗效与给药剂量密切相关。     

气相色谱-质谱联用法测定蛇床子超临界二氧化碳流体提取物中蛇床子素含量

目的 建立气相色谱-质谱联用法测定蛇床子超临界二氧化碳(C02)流体提取物中蛇床子素的含量.方法 样品采用C02超临界流体萃取,萃取液用乙酸乙酯溶解,选择监测离子法测定蛇床子素的含量.色谱条件:DB-5 MS(30 m×0.32 mm,0.25 μm)石英毛细管色谱柱;柱流速2.0 mL·min-1,柱温60℃保持2 min,以10℃·min-1到280℃,保持6 min;进样口和接口温度为280 ℃.结果 蛇床子素在5～1 000μg·mL-1线性关系良好,r=0.999 1,平均回收率为98.97％,检测限1.0 ng·mL-1.结论 该方法稳定可靠,适用于蛇床子药材的质量控制.