Nucleostemin特异性RNA干扰对HeLa细胞体内外增殖能力的影响

目的：检测肿瘤细胞Nucleostemin（NS）的表达，研究NS特异性RNA干扰对HeLa细胞体内外增殖的影响。方法：提取6种肿瘤细胞总RNA，用 RT-PCR和Northern blot方法检测NS的表达。用NS特异性siRNA表达载体转染HeLa细胞，观察转染的HeLa细胞（简称NS-siRNA-HeLa细胞）体内外增殖的变化。结果：6种肿瘤细胞中NS明显高表达。体外培养的NS-siRNA-HeLa细胞中NS表达显著低于对照组，G0/G1期细胞百分率显著升高。体内致瘤实验显示，NS-siRNA-HeLa细胞在裸鼠体内增殖显著低于对照组。结论： NS在肿瘤细胞中高表达具有普遍性。NS特异性RNA干扰使HeLa细胞进入S期受阻，并可明显降低HeLa细胞体内外的增殖能力。     

RNAi对结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因表达的影响

目的:探求RNA技术干扰人结肠癌SW480细胞Nucleostemin(NS)基因后,结肠癌SW480细胞NucleosteminmRNA和蛋白水平的表达,及细胞增殖情况变化.方法:构建Nucleostemin特异性真核表达载体,和脂质体共同转染SW480细胞后,采用Real-timePCR和Westernblot方法检测NS基因mRNA和蛋白变化,MTT法检测细胞的增殖情况.结果:与对照组相比较,RNAi干扰细胞后NSmRNA表达明显下降;NS蛋白表达亦明显下降(1.069±0.368,1.003±0.313,1.901±0.817,P<0.05;1.069±0.368,1.003±0.313,2.035±0.665,P<0.05),空白对照组(仅加入脂质体)和阴性对照组(RNAi错义序列)间无显著差异(2.035±0.665,1.9001±0.817,P>0.05).MTT显示RNA干扰后细胞增殖明显受到抑制.结论:通过特异性RNA干扰NS基因后,结肠癌SW480细胞增殖受到抑制.     

Nucleostemin在结直肠癌和正常结直肠组织中的表达及其意义

背景：Nucleosterain（NS）是一个与细胞增殖相关的核蛋白,部分研究显示其仅高表达于干细胞和肿瘤细胞,成体组织分化细胞中未见NS表达。目的：探讨NS在结直肠癌和正常结直肠组织中的表达及其意义。方法：收集38例结直肠癌患者的癌组织及其相应癌旁正常组织标本．以实时RT—PCR和蛋白质印迹法检测NSmRNA和蛋白表达。结果：实时PCR扩增曲线显示结直肠癌组织和正常结直肠组织均有NS基因指数式扩增,癌组织NSmRNA表达量显著高于正常组织（1．8939±0．9529对1．P=0．011）。蛋白质印迹法证实NS蛋白在正常组织中表达较微弱或几乎无表达,癌组织中其表达显著增高（1．5397±0．3625对0．6336±0．3443,P=0．001）。结论：结直肠癌组织和正常结直肠组织中均存在NS基因．推测其微量表达可调节细胞正常增殖．而异常高表达则可通过某些机制促进细胞恶性增殖。     

核干细胞因子RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建核干细胞因子基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒表达载体并对其在白血病细胞株中的干扰效果进行鉴定,为后期研究奠定基础.方法 针对核干细胞因子基因的序列设计RNAi有效靶点,合成含RNA干扰序列、Loop环、Age I和EcoR I酶切位点,以及终止信号的单链DNA oligo,经退火形成双链DNA,与双酶切线性化的带有GFP荧光标记和嘌呤霉素抗性标记的GV248慢病毒空载体进行连接产生重组慢病毒载体,转化感受态细菌,挑取重组阳性转化子进行菌落PCR反应,并对PCR阳性克隆进行测序.将重组慢病毒载体及其两种辅助包装原件载体质粒pHelper1.0和pHelper2.0共转染293T细胞进行病毒的包装,收集、浓缩病毒液后测定其滴度,并转染HL-60、NB4以及K562等三种人白血病细胞株,倒置荧光显微镜下观察其转染效率,real-time PCR检测核干细胞因子基因的敲减效率.结果 经测序证实正确构建出了核干细胞因子基因的RNAi重组慢病毒载体,包装、浓缩后其滴度为4×108 TU/ml,荧光显微镜下显示其能有效转染进入HL-60、NB4及K562等白血病细胞株中,转染效率均在80％以上;real-time PCR显示转染后核干细胞因子基因mRNA表达水平较阴性对照组显著下降（P＜0.05）,在HL-60、NB4和K562细胞中核干细胞因子基因的抑制效率分别为52.3％、80.5％、62.3％.结论 成功构建出了核干细胞因子基因的RNAi慢病毒载体,其能有效干扰人白血病细胞株HL-60、NB4及K562中的核干细胞因子基因表达.     

食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子基因mRNA的表达

目的 探讨食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子(NS)基因mRNA的表达水平.方法 应用实时定量PCR检测62例食管鳞状细胞癌组织及其配对正常食管黏膜组织(62例)中NS基因mRNA表达水平,分析核干细胞因子mRNA表达水平与食管鳞状细胞癌患者临床病理参数间的关系.结果 62例食管鳞状细胞癌组织中NS基因mRNA表达水平(4.5 ±2.1)高于其配对正常食管黏膜组织(2.1±1.3)表达水平(t=-5.045,P=0.000).NS基因mRNA表达水平与病理分级、浸润深度和淋巴结转移等临床参数有关(均P＜0.05),与性别、年龄、病理类型等参数无关(均P＞0.05).多元线型回归分析显示,临床病理参数在NS基因mRNA表达中起重要作用(P=0.000),NS基因mRNA的表达主要受浸润深度和淋巴结转移的影响(P＜0.05).结论 食管鳞状细胞癌的发生发展和增殖过程中NS基因mRNA起重要作用.     

食管腺癌组织中核干细胞因子表达的研究

目的研究核干细胞因子在食管腺癌中的表达情况,探讨其与食管腺癌临床病理的关系。方法应用RT—PCR和Western blotting方法检测40例食管腺癌中核干细胞因子的表达情况。结果核干细胞因子阳性表达率在食管腺癌中为95％（38／40）,而癌旁组织无核干细胞因子表达,差异有显著性（P〈0．05）;核干细胞因子阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期及有无淋巴结转移无关,与肿瘤分化程度有关（P〈0．05）。结论核干细胞因子在食管腺癌中异常表达,有望为食管腺癌的早期诊断和治疗提供新的手段。     

姜黄素对胃癌SGC-7901细胞Nucleostemin基因表达的影响及意义

目的：研究姜黄素对胃癌SGC-7901细胞株NS基因表达的影响及凋亡诱导作用,探讨姜黄素抗肿瘤机制。方法：不同浓度姜黄素（0,10,20,40μmol·L^-1）和不同时间（12,24,48h）点处理细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,RT—PCR法检测姜黄素作用前后NS基因表达量的变化,TUNEL试剂盒法、流式细胞仪法检测细胞凋亡情况。结果：20μmol·L^-1以上浓度的姜黄素对体外培养的胃癌SGC-7901细胞株生长具有抑制作用并呈量效和时效关系;与对照组相比,姜黄素处理组NS基因表达量明显下降,细胞凋亡明显增加（凋亡指数〉26．61％,P〈0．05）。结论：姜黄素使胃癌SGC-7901细胞增殖减慢,凋亡增加,NS基因表达下降,可能是姜黄素抗肿瘤机制之一。     

NS mRNA表达检测对恶性葡萄胎的诊断意义

目的：探讨Nucleostemin基因（NS mRNA）表达检测对恶性葡萄胎的诊断意义。方法研究对象分为四组，A组为正常足月产孕妇，100例，采集羊水脱落细胞；B组为药物流产孕妇，100例，排除其他疾病，采集流产的胚胎绒毛组织； C组为良性葡萄胎患者，20例，采集葡萄胎组织和羊水脱落细胞；D组为恶性葡萄胎患者，19例，采集葡萄胎组织和羊水脱落细胞。采用Real-time PCR方法检测四组标本中Nucleostemin mRNA的表达水平。结果羊水脱落细胞和胚胎组织中Nucleostemin mRNA表达水平和阳性率以D组最高，C组次之。在羊水脱落细胞和胚胎组织中检测Nucleostemin mRNA，对于诊断恶性葡萄胎，敏感性、特异性和准确度均较好。结论 Nucleostemin基因高表达可能在葡萄胎的发生发展中起重要用，羊水脱落细胞和胚胎组织中Nucleostemin mRNA的检测有望成为恶性葡萄胎诊断的辅助指标。     

沉默核干细胞因子基因对HL-60白血病细胞形态学和细胞化学影响的检测

目的探讨体外沉默白血病细胞核干细胞因子(NS)基因转染后细胞形态学和细胞化学特征改变与细胞生物学行为的关系。方法体外合成NS特异性短发夹状RNA(shRNA)转染HL-60白血病细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法评价NS基因沉默和NS蛋白合成抑制效果,倒置显微镜观察活体细胞形态,Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,血液分析仪测定细胞大小、粒度和均一性变化,髓过氧化物酶(MPO)、α-乙酸萘酯酶(α-NAE)和过碘酸-雪夫反应(PAS)测定反映细胞化学特征变化。结果沉默NS基因导致HL-60白血病细胞发生了形态学变化,细胞核和细胞质出现了进一步分化和成熟特征,Wright-Giemsa染色观察到细胞核碎裂现象,血液分析仪发现细胞变得大小不均并有较多核碎裂和无核的细胞碎片存在,细胞内定MPO、α-NAE酶活性和PAS反应增强。结论沉默NS基因表达能促使HL-60细胞进一步分化、成熟,细胞形态学和细胞化学特征发生相应改变,这些形态学变化可以作为研究细胞生物学行为改变的依据之一。     

多种肿瘤组织中Nucleostemin基因表达的检测及意义

目的:检测 Nucleostemin (NS)基因在多种肿瘤组织中的表达情况.方法:收集包括乳腺癌、卵巢癌、食管癌、胃癌等十几种肿瘤标本,试剂盒法提取组织总RNA,以GAPDH作为内参基因,用半定量RT-PCR方法检测NS基因在肿瘤组织中的表达情况.结果:所有肿瘤组织中皆有NS基因表达.结论:NS基因表达在肿瘤组织中普遍表达,NS基因可能参与了肿瘤细胞的增殖调控.