2型糖尿病患者外周血白细胞iNOSmRNA表达的变化及意义

目的研究2型糖尿病DM患者外周血白细胞中iNOSmRNA表达的变化及其与糖尿病肾病DN发生、发展的关系。方法101例2型DM患者,根据尿微量白蛋白排泄率和血肌酐水平分为单纯DM组和不同的DN组,用原位杂交法检测外周血白细胞iNOSmRNA表达的阳性细胞的百分率,并与21例健康体检者进行比较。结果早期DN组白细胞iNOSmRNA表达的百分率明显高于对照组、DM组及晚期DN组(P<0.001)。结论外周血白细胞iNOSmRNA表达的变化参与了DN的发生、发展。     

线粒体一氧化氮合酶的研究进展

Nitric oxide (NO) is an intra - and intercellular messenger with a broad spectrum of activities in the central nervous system, cardiovascular and immune systems. Mitochondrial nitric oxide synthase(mtNOS), which might be a new form of NOS in mitochondria, has been discovered to be active in the regulation of mitochondrial respiration, energy metabolism and manypathophysiological processes. In this review, the location, properties, physiological and pathophysiological significance of mtNOS were summarized.     

卡维地洛对氧自由基诱导的内皮细胞内源性一氧化氮合酶抑制物代谢的影响

目的： 观察卡维地洛对氧自由基（OFR）培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶 (DDAH)活性及表达的影响，以探讨卡维地洛对不对称二甲精氨酸（ADMA）代谢机制的影响。 方法： 采用改良的Jaffe法培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs），取生长良好的3-6代HUVECs用于实验，分为①空白对照组：加DMEM培养液；②OFR组:加入OFR（0.01 mmol/L,0.1 mmol/L）；③OFR+卡维地洛组: 同时加入0.1 mmol/L OFR及卡维地洛（10 μmol/L）共孵24 h后, 检测上清液中一氧化氮（NO）、内皮素（ET）、ADMA含量、L-胍氨酸(L-cit)浓度及一氧化氮合酶（NOS）活性。用Western blotting法测定细胞裂解液中二甲基精氨酸-二甲基赖氨酸水解酶 (DDAH)的蛋白表达。 结果： OFR条件培养下,内皮细胞的代谢产物ADMA、ET的量均高于空白对照组,而NO的量及NOS的活性少于空白对照组;反映DDAH酶活性的L-cit浓度显著降低,且有浓度依赖性，而DDAH的表达无明显变化。卡维地洛干预组的ADMA、ET的量均低于OFR组，NOS活性及NO、L-cit浓度明显高于OFR组。 结论： OFR培养下，内皮损伤ADMA的增加与DDAH的活性减弱有关，而与DDAH的表达无关。卡维地洛通过增加DDAH活性促进ADMA代谢，使NOS活性增加，抑制OFR对内皮功能的损伤。     

吸烟大鼠一氧化氮合酶和一氧化氮的变化

目的:观察吸烟对大鼠肺组织iNOS、eNOSmRNA和蛋白表达以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中NO的影响, 探讨不同类型的NOS在吸烟所致慢性气道炎症中的作用。方法:选用Wistar大鼠80只随机分为对照组, 被动吸烟组, iNOS抑制剂L-NIL干预组及NOS抑制剂L-NAME干预组。用免疫组化法检测iNOS及eNOS的蛋白表达, 用RT-PCR检测iNOS及eNOSmRNA的表达, 用Griess法测定BALF中的NO^-₂/NO^-₃含量。结果:吸烟大鼠肺组织中iNOSmRNA及其蛋白表达增加, eNOSmRNA及蛋白表达下降, BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃显著增加(P＜0.05)。在体实验发现, L-NIL使BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃下降(P＜0.05);L-NAME对BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃无显著影响(P＞0.05)。结论:吸烟大鼠肺组织iNOSmRNA和蛋白表达增加, eNOSmRNA和蛋白表达减少。活化的iNOS产生大量NO促进炎症发展。     

颈交感神经干离断对妊高征大鼠胎盘NO含量及NOS基因表达的影响

目的：观察颈交感神经干离断（TCST）对妊高征（PIH）大鼠胎盘一氧化氮（NO）含量及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的影响。方法:妊娠大鼠随机分5组,每组15只。对照组（C）：自妊娠14 d开始皮下注射生理盐水至孕20 d;妊高征1组、2组（H1、H2）：自妊娠14 d开始皮下注射L-NAME分别为125 mg·kg-1·d-1和62.5 mg·kg-1·d-1，至孕20 d；手术组（O）：妊娠第14 d行右TCST，余同B1;假手术组（S）：妊娠第14 d行右颈交感神经干分离，但不离断，余同 H1。孕21 d剖宫取仔。观察孕鼠血压、尿蛋白，胎鼠的大小、体重、畸形率、死亡率，胎盘NO含量、eNOS mRNA、iNOS mRNA表达。结果:（1） 血压、尿蛋白除基础值外H1、H2组各时点值明显高于C组(P<0.01)；H2组明显低于H1组(P<0.01)；O组与C组相比差异无显著(P>0.05)。（2）胎鼠体重、大小 H1、H2组明显低于C组（P<0.01）；H1组明显低于H2组（P<0.05，P<0.01）;O组与C组相比差异无显著(P>0.05)。死亡率、畸形率变化与上述指标相反。（3）胎盘NO含量及eNOS mRNA、iNOS mRNA表达 H1、H2组明显低于C组（P<0.01）；H1组明显低于H2组（P<0.01，P<0.05）;O组明显高于H1组 （P<0.01），且与C组比无显著差异（P>0.05）。结论：TCST可保护孕鼠免受妊高征的影响，可能与其具有改善孕鼠胎盘组织eNOS mRNA、iNOS mRNA表达和NO含量有关。     

一氧化氮合酶2抑制剂对大鼠心肌梗死后左心室形态及心功能的影响

目的：观察选择性一氧化氮合酶2（NOS2）抑制剂S-甲基硫脲（SMT）对心肌梗死（MI）后左心室形态学和血流动力学指标的影响，探讨NOS2在MI后心功能障碍形成过程中的作用。方法： 于大鼠冠状动脉结扎前30 min给予SMT灌胃，6周后测定左心室形态学和血流动力学指标、心肌NOS2表达量、血浆NO2-/NO3-水平、心肌纤维化程度。结果： MI后6周，心脏非梗死区NOS2表达量、血浆NO2-/NO3-水平、中心静脉压和左室舒张末压高于对照组。使用SMT可降低血浆NO2-/NO3-水平［(26.6±6.1） μmol/L vs （50.1±10.4） μmol/L, P＜0.01］，减少心肌梗死范围（36.0%±7.2% vs 42.6%±8.6%, P＜0.05），减轻心室扩张［LVD，（6.6±0.3） mm vs （7.2±0.3） mm, P＜0.01］，减小心肌细胞直径［(15.1±1.6） μm vs （16.9±2.3） μm, P＜0.05］，减轻心肌纤维化［CVF，4.1%±1.1% vs 5.7%±1.2%, P＜0.01］，降低中心静脉压［（0.9±0.3） mmHg vs （1.5±0.5） mmHg, P＜0.01］和左室舒张末压［（8.1±2.4） mmHg vs（13.4±3.1） mmHg, P＜0.01］，提高存活率（72.4% vs 39.3%, P＜0.05）。结论： 大鼠MI后，NOS2可能起促进心功能障碍形成的作用。抑制NOS2可以减轻心室重构，改善心功能。     

败血症休克大鼠血管L-精氨酸/一氧化氮途径的变化

目的:观察败血症休克大鼠主动脉内膜、中膜和外膜一氧化氮合成途径的改变。方法:雄性Wistar大鼠盲肠结扎并穿孔复制败血症休克模型,分别测定假手术组、早期休克组和晚期休克组大鼠主动脉内膜、中膜和外膜的亚硝酸盐(NO^-₂)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及L-精氨酸(L-Arg)转运;免疫组化染色检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在主动脉各层的分布。结果:早期及晚期败血症休克大鼠主动脉内膜产生的NO^-₂含量、NOS活性及L-Arg转运速率均低于假手术组,而中膜和外膜的NO^-₂、NOS活性及L-Arg转运速率则显著高于假手术组,外膜增加的程度尤为显著。免疫组织化学染色显示,败血症休克时血管中膜和外膜尤其是外膜iNOS阳性染色明显较强。结论:败血症休克时血管内膜NO合成受到抑制,而中膜和外膜NO合成显著增强,这一改变与休克状态下血管中L-Arg转运、iNOS表达及其活性的变化有关。     

微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA

目的：建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术，对人iNOS-mRNA进行定量检测。方法：设计两条特异探针，其中一条为捕获探针，5'端连接氨基，能与微孔板表面的NOS基团共价结合，“竖直”地包被在微孔中，另一个为检测探针，3'端带有生物素标记。用脂多糖（LPS）刺激人外周血单个核细胞24 h后，提取巨噬细胞总RNA，进行RT-PCR扩增，PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内，并加入检测探针进行夹心杂交，最后加入亲和素-辣根过氧化物酶（AV-HRP）及底物，在450 nm波长检测杂交信号。结果：该方法检测iNOS-mRNA的灵敏度明显高于RT-PCR-琼脂糖凝胶电泳；特异性高，RT-PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现；精密度良好。结论：本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化，适合于iNOS-mRNA的定量检测。     

非诺贝特上调血管内皮细胞一氧化氮合酶的表达

目的:观察PPARα激动剂非诺贝特对牛主动脉(BAECs)内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)活性和表达的影响。方法:制备5-9代BAECs,加入不同浓度的非诺贝特(0, 5, 10, 50, 100 μmol/L)后,用NOS Assay Kit测定eNOS活性,RT-PCR法检测eNOS mRNA表达,Western blot分析检测eNOS蛋白质表达。结果: 非诺贝特以浓度和时间依赖的方式增加eNOS活性,非诺贝特浓度10 μmol/L以上时,明显增加eNOS活性。50μmol/L非诺贝特处理48 h时eNOS活性最大(为对照组的2.32±0.47倍,P<0.01)。非诺贝特处理1 h和12 h不增加eNOS活性。RT-PCR分析表明,非诺贝特浓度大于5 μmol/L以上时,明显增加eNOS mRNA水平,在非诺贝特浓度为50 μmol/L时作用最大,为对照组的2.08±0.33倍(P<0.01)。此作用在6 h时出现,持续到48 h。Western blot显示,非诺贝特处理48 h,eNOS蛋白表达明显增加,在浓度为10,50 和100 μmol/L时,eNOS蛋白表达分别为对照组的1.80±0.45, 2.70±0.42 和 2.20±0.32 倍,均P<0.01。在非诺贝特处理12 h后出现,持续到48 h。结论:PPARα激动剂非诺贝特增加BAECs eNOS基因表达,提高eNOS活性及增加蛋白表达。     

高糖对腹膜巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的作用

目的：探讨在体外葡萄糖对SD大鼠腹膜巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达及蛋白的合成。方法:取雄性SD大鼠腹腔巨噬细胞培养，培养的巨噬细胞分为5组：(1)正常对照组；(2)30 mmol/L甘露醇组；(3)90 mmol/L甘露醇组；(4)30 mmol/L葡萄糖组；(5)90 mmol/L葡萄糖组。每组6个培养孔，24 h后提取细胞RNA及蛋白，分别做RT-PCR及Western blotting以检测腹膜巨噬细胞iNOS mRNA的表达及蛋白的合成。结果:30 mmol/L及90 mmol/L甘露醇刺激腹膜巨噬细胞iNOS mRNA的表达及蛋白的合成均不明显， 30 mmol/L及90 mmol/L葡萄糖能明显刺激腹膜巨噬细胞iNOS mRNA的表达及蛋白的合成，90 mmol/L葡萄糖与30 mmol/L的葡萄糖相比更能刺激巨噬细胞iNOS mRNA的表达及蛋白的合成。结果:葡萄糖能明显刺激SD大鼠腹膜巨噬细胞iNOS mRNA的表达及蛋白的合成。