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MexAB-OprM和MexXY-OprM在耐药铜绿假单胞菌中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨MexAB-OprM和MexXY-OprM主动外排系统与铜绿假单胞菌多重耐药的关系。方法挑选临床分离的铜绿假单胞菌敏感株和多重耐药株各30株,以及标准质控株,用RT-PCR扩增其mexB、mexY和核糖体参照基因rpsL片段,根据mexB、mexY与rpsL扩增产物的电泳扫描比值,分析mexB与mexY mRNA的表达水平。结果标准株、所有敏感株和多重耐药株均检测出mexB、mexY的mRNA基因,耐药株的mexB、mexY mRNA水平显著高于敏感株(P<0.05)。结论MexAB-OprM和MexXY-OprM主动外排系统与铜绿假单胞菌固有耐药有关,其表达水平异常增高与多重耐药形成密切相关。 相似文献
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铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM的研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
医院感染在感染性疾病中占有相当比例。院内感染的病原菌中,铜绿假单胞菌的感染高居榜首,且耐药状况十分严重。主动外排系统是细菌存在耐药性并发生获得性多重耐药的主要原因。M exAB-OprM型外排系统因具有广谱的外排活性成为铜绿假单胞菌最具临床意义的药物外排系统。本文对细菌主动外排系统的分类,PA M exAB-OprM外排系统的组成、结构、重要作用及表达调控予以综述,并对其治疗研究作出展望。 相似文献
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铜绿假单胞菌RND型药物外排泵研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
铜绿假单胞菌是重要的医院感染及免疫缺陷者感染的致病菌。近年来由于各种抗菌药物的广泛应用甚至滥用,导致铜绿假单胞菌耐药性日渐严重,其耐药性与多种机制相关,本文就主动外排这一耐药机制作一综述。详细介绍生物结构,底物,调节机制,与其他耐药机制间的相互关系,广谱外排泵抑制剂等。 相似文献
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生物膜铜绿假单胞菌多药外排泵的表达研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的研究铜绿假单胞菌在浮游态、生物膜态及经亚胺培南、环丙沙星诱导后,多药外排泵MexAB-OprM及其阻遏蛋白MexR基因表达情况。方法用铜绿假单胞菌PAO1在eppendorf管内建立生物膜;用1/2 MIC亚胺培南、环丙沙星对浮游菌诱导4 h;4 MIC亚胺培南2、MIC环丙沙星对生物膜菌诱导12 h,分别于生物膜形成的第35、天,用实时荧光定量PCR的方法,测定铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM及MexR的基因表达。结果铜绿假单胞菌由浮游菌变为生物膜菌后,其外排泵MexAB-OprM的表达水平明显降低,其相对表达量最高相差近10倍,其差异有统计学意义(P0.05);铜绿假单胞菌由浮游菌变为生物膜菌后,阻遏蛋白MexR表达差异无统计学意义;在亚胺培南及环丙沙星诱导后,浮游菌和生物膜菌其基因MexAB-OprM、MexR表达差异均无统计学意义。结论铜绿假单胞菌由浮游菌转变为生物膜菌后,外排泵MexAB-OprM表达明显减少,MexR基因表达无影响;亚胺培南、环丙沙星对浮游菌及生物膜菌的MexAB-OprM、MexR均无诱导作用。 相似文献
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目的:研究扶正解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵表达的影响。方法:针对筛选出的MexAB-OprM阳性的铜绿假单胞菌菌株,通过微量稀释法,测定哌拉西林-他唑巴坦的最小抑菌浓度和扶正解毒化瘀方水提物的最小杀菌浓度,从而确定荧光定量PCR细菌样本时培养剂中哌拉西林-他唑巴坦和扶正解毒化瘀方水提物的浓度。绘制细菌生长曲线,确定细菌样本的培养时间。利用实时荧光定量PCR技术检测药物干预前后mex B、oprM、mexR的表达量。结果:扶正解毒化瘀方水提物能降低MexAB-OprM外排泵阳性MDRPA菌株的mex B、oprM表达量(P 0. 05),同时能增加mexR的表达量(P 0. 05)。结论:扶正解毒化瘀方对MDRPA所致肺炎的作用机制之一可能是通过抑制MexAB-OprM外排泵的表达实现的。 相似文献
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目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM的表达及其与耐药表型的关系。方法选取2016年9月至2018年10月儋州市人民医院微生物培养室分离的Pa 54株,采用琼脂稀释法测定14种抗菌药物的MIC,加外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺(PAβN)进行干预实验,实时荧光定量PCR检测膜融合蛋白mexA、mexC、mexE、mexX的mRNA表达水平,以判断MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM的表达情况,PCR扩增调控基因mexR、nfxB、mexT、mexZ对扩增产物进行测序,使用Blast软件在GenBank上与已知序列进行比对。结果RT-PCR检测发现,耐药菌株中18株(33.33%)Pa高表达MexAB-OprM外排系统,9株(16.67%)高表达MexCD-OprJ外排系统,12株(22.22%)高表达MexEF-OprN外排系统,14株(25.93%)高表达MexXY-OprM外排系统。抑制剂作用下18株MexAB-OprM外排泵高表达Pa株对头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星的MIC为2~64μg/ml,9株MexCD-OprJ高表达株中6株对头孢噻肟的敏感性MIC为2~128 mg/ml,12株MexEF-OprN中对环丙沙星、亚胺培南的敏感性MIC为4~128 mg/ml,14株MexXY-OprM为庆大霉素、环丙沙星高度耐药菌株。分别随机选择mexA、mexC、mexE、mexX高表达菌株中的4个菌株,mexR高表达菌株中发生3个mexR基因突变;4个nfxB高表达菌株中均发生82位的突变;4个mexT高表达菌株中均发生26位的突变;2个mexZ高表达菌株发生138位的突变,1个发生50位的突变。结论主动外排系统MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM过度表达是Pa多重耐药机制之一,同时与其调控基因mexR、nfxB、mexT、mexZ发生突变相关。 相似文献
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铜绿假单胞菌主动外排泵介导的多重抗生素耐药性 总被引:8,自引:4,他引:8
铜绿假单胞菌作为一种机会致病菌,对多种临床常用抗生素呈现明显的固有与获得性耐药。这种多重耐药性的形成机制在于该菌具有的多种能量依赖性的药物主动外排泵和低通透性外膜屏障协同作用所致。近10年对铜绿假单胞菌药物外排泵的研究已经颇为深入,本文对有关进展予以讨论。在铜绿假单胞菌已报道了6种属于“耐药-生节-分裂(RND)”类的药物外排泵系统,它们可在天然野生株表达或者由于基因突变而诱导表达,从而介导了对β-内酰胺类(包括β-内酰胺酶抑制剂)、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、大环内酯类及四环素类等的耐药性。这些外排泵中尤其以MexAB—OprM系统的作用底物范围最广,在耐药性形成中起主要作用。RND类外排泵系统也普遍存在于其它革兰氏阴性细菌。各外排泵通常由内膜转运体蛋白、内膜融合蛋白及外膜通道蛋白一起形成功能性转运复合体将药物排至胞外。药物外排泵常影响对灭活酶较稳定的抗菌药物。一些新抗菌药物如Linezolid(Oxa—zolidinoes类)、Telithromyein(Ketolides类)及Tigecycline(Glycyclines类)也是MexAB-OprM等RND类外排泵的作用底物,故这些药物抗革兰氏阳性细菌的活性较强。铜绿假单胞菌外排泵表达的调控机制多是在转录水平上受局部阻遏物或激活物的作用。这些局部调节子的基因突变能导致外排泵活性增强。并常见于应用抗生素或其它抗菌消毒制剂后从临床分离的或实验室筛选的多重耐药铜绿假单胞菌。这些耐药菌的形成再次说明合理限制抗菌药物应用的必要性。外排泵系统还与其它耐药机制如细菌的药物作用靶位改变或产生药物灭活酶等一起发挥明显的协同作用,使细菌的耐药程度进一步地增高。现已研制了针对铜绿假单胞菌等细菌的外排泵抑制剂。应用外排泵抑制剂可阻断药物外排泵这一耐药机制,以维护或提高抗菌药物的抗菌活性。如外排泵抑制剂在体外和动物感染模型均被证实明显增强了氟喹诺酮类对铜绿假单胞菌敏感株和耐药株的抗菌活性,并降低了耐药菌的发生率。外排泵抑制剂尚处于临床前的基础实验研制阶段。 相似文献
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铜绿假单孢菌多药外排系统研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
铜绿假单孢菌是一种重要的院内感染条件致病菌,具有先天的和后天获得的多重高度耐药性,一旦感染,临床治疗十分困难。铜绿假单孢菌的耐药机理十分复杂,除常见耐药机制外,很重要的就是其拥有可以外排多种药物的主动外排系统,使抗菌药物很难发挥应有作用。本文将从近年铜绿假单孢菌中各类外排泵的研究情况,特别是其中最重要的外排系统“MexAB-OprM”的分子结构模型、膜定位、该基因的表达与调控等方面的研究进展做一综述。 相似文献
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铜绿假单胞菌MexAB-OprM主动外排表型筛选和外排基因检测 总被引:2,自引:1,他引:2
目的 研究解放军总医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌的主动外排系统,为指导临床合理选择抗生素提供依据。方法 采用外排泵抑制剂(苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺)与喹诺酮类抗生素,以微量肉汤稀释法测定加与不加外排泵抑制剂时环丙沙星与左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)值,并计算MIC值的变化,根据加与不加外排泵抑制剂MIC值降低3个稀释度及以上筛选主动外排表型阳性菌株;PCR扩增外排表型阳性菌的耐药基因oprM、mexB和mexR,并对3株菌进行mexR基因测序分析;RT-PCR检测oprM基因的mRNA水平,分析耐药基因的表达情况。结果 苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺能极大的降低左氧氟沙星和环丙沙星的MIC值,70株多重耐药铜绿假单胞菌中46株表型阳性(65.7%),其中PCR检测oprM、mexB和mexR基因同时阳性菌株42株(91.3%),仅oprM基因阳性2株(4.3%),oprM、mexB和mexR基因均阴性2株(4.3%)。RT-PCR产物测定A值(A260/A280)与PAO1对照阳性菌株13株,以PAO1的oprM/rpoD的A值为对照阳性菌株4株,同时满足A值(A260/A280)和oprM/rpoD比值均高于PA01的菌株3株。测序结果与GenBank中已知的mexR基因比对,其中2株同源性为100%,1株第434位核苷酸插入2bp(AT)。结论 中国人民解放军总医院多重耐药铜绿假单胞菌大多存在主动外排的耐药机制,其耐药与外排泵过度表达相关。 相似文献
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目的探讨MexAB—OprM主动外排系统(外排泵)在全耐药铜绿假单胞菌耐药机制中的作用及其过度表达的机制。方法联合L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺(MC-207,110)和环丙沙星(CIP),测定26株全耐药铜绿假单胞菌的MIC;用RT—PCR法扩增MexAB—OprM内膜转运蛋白MexB的结构基因mexB和内参照基因16SrDNA片段,根据mexB与16SrDNA扩增产物的电泳扫描比值,分析mexB mRNA的表达水平,判断MexAB—OprM的表达情况;用PCR法扩增MexAB—OprM调控基因mexR并对其产物测序,用Blast软件在GenBank中与已知序列比对。结果联合MC-207,110后有20株(76.9%)CIP的MIC值下降4倍及以上;26株全耐药铜绿假单胞菌中有22株MexAB-OprM高表达,其中有15株mexR基因发生变异,13株发生点突变,出现氪基酸替换.2株发生插入突变,导致氨基酸插入;点突变位点是336G—A、603G—A、660G—A、584C—G、653T—A,后两者导致氨基酸替换103Ala—Gly、126Val—Glu,插入突变是在470和474核苷酸间插入碱基GGC,导致66和68氨基酸间插入Ala。结论MexAB—OprM主动外排系统的高表达对铜绿假单胞菌的耐药性起重要作用,调控基因mexR的突变是其高表达的原因之一。 相似文献