急性淋巴细胞白血病患者脑脊液中白血病淋巴细胞的立体形态特征观察

目的：观察脑脊液中白血病淋巴细胞及鞘注治疗后细胞的立体形态特征。方法：采用激光扫描共聚焦显微术对15例争性淋细胞性白血病患者脑脊液中550个白血病淋巴细胞和鞘注治疗后脑脊液中380个白血病淋巴细胞进行断层扫描和三维立体成像观察,并与正常脑脊液中淋巴细胞进行对比。结果：脑脊液中白血病淋巴细胞的胞体明显增大,核完整,呈桔黄色荧光,胞质呈火红荧光。鞘内注射治疗后脑脊液中白血病淋巴细胞胞体缩小,不规则,胞核不完整,有断裂、缺损。而正常淋巴细胞胞体较小,呈圆形,核比例大,胞浆量少,核呈绿色荧光,胞质呈弱绿色荧光。结论：LSCM可为CNLL诊断、鉴别诊断以及化疗药物的筛选、疗效评价、预后判断提供可靠的实验室依据。     

急性淋巴细胞白血病患者脑脊液中白血病淋巴细胞内DNA、RNA的定量分析

目的：观察脑脊液白血病淋巴细胞脑鞘注治疗前后细胞内DNA、RNA相对含量的变化。方法：采用激光扫描共聚焦显微术（LSCM）对15例急性淋巴细胞性白血病患者脑脊液中550个白血病淋巴细胞和鞘注治疗后脑脊液中380个白血病淋巴细胞内DNA、RNA相对含量进行定量检测,同时用荧光强度地形分布图像表示,并与正常脑脊液中小淋巴细胞内DNA、RNA相对含量进行对比。结果：脑脊液白血病巴细胞内DNA、RNA相对含量显著高于正常对照（P＜0．01）;鞘注治疗后细胞内DNA、RNA相对含量明显低于治疗前（P＜0．01）。且三者DNA、RNA荧光强度地形分布立体图像也存在着显著的判别;治疗前似圆柱菜,其顶部显强白色荧光,连成一片,完整无损,治疗后呈锯齿状,顶部显白色荧光,较治疗前弱,山峰较多,分散,连连;对照组似圆锥形,顶部显白荧光。结论：利用LSCM对脑脊液白血病淋巴细胞内DNARNA相对含量的定量分析可为CNLL诊断,鉴别诊断以及化疗药物的筛选、疗效评价,预后判断提供可靠的实验室依据。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌细胞(H22)DNA、RNA及自由基含量的影响

目的:探讨扶正抑瘤颗粒(FYK)对小鼠肝癌细胞(H22)DNA、RNA及自由基含量的影响。方法:荧光探针吖啶橙(A0)、乙酰乙酸盐-2,7-二氯氢化荧光素(2,7-dichlorofluorescin diacetate,D-399)染色,激光共聚焦显微镜(LSCM)检测经FYK治疗的小鼠肝癌(H22)腹水瘤细胞内DNA、RNA及自由基含量的变化,并和NS组对照。结果:FYK大剂量组DNA、RNA含量较NS对照组明显减少,自由基含量较NS对照组明显增加,两组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:FYK可以破坏H22细胞的DNA、RNA,使H22细胞内自由基含量增多,具有抗肿瘤作用。     

比较布比卡因和罗哌卡因对大鼠心室肌细胞Ca2+移动的影响

目的:应用激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度的布比卡因和罗哌卡因对大鼠心室肌细胞Ca2 移动的影响,比较它们的心肌毒性。方法:原代培养新生SD大鼠的心室肌细胞,应用激光扫描共聚焦显微镜观察心室肌细胞内钙荧光强度的变化,比较不同浓度的布比卡因和罗哌卡因对KCl诱导的荧光强度峰值的影响。结果:10μmol/L时两种局麻药对KCl诱导的大鼠心室肌细胞内钙荧光强度的变化无显著影响;50μmol/L和100μmol/L时两种局麻药明显抑制细胞内钙荧光强度的变化;相同浓度的布比卡因抑制作用大于罗哌卡因。结论:同浓度布比卡因对心室肌细胞Ca2 移动的抑制作用大于罗哌卡因,表明布比卡因心肌毒性大于罗哌卡因。     

益肝康药物血清对大鼠肝星状细胞胞浆游离钙效应的抑制作用

目的研究益肝康药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2 ]i)增高的作用。方法将32只健康雄性SD大鼠按随机数字表分为4组:肝纤维化模型益肝康组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40?L4溶液9周,然后灌服益肝康6d;肝纤维化模型对照组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40?L4溶液9周,然后灌服0·9%氯化钠溶液6d;正常大鼠益肝康组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服益肝康6d;正常对照组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服0·9%氯化钠溶液6d。结束后经下腔静脉取血并分离血清。用盲法,采用上述10%血清培养HSCs24h并负载好Fluo-3/AM后,使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs[Ca2 ]i。结果(1)经正常大鼠益肝康组及肝纤维化模型益肝康组大鼠血清预处理的HSCs,其[Ca2 ]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P<0·05);且两者与正常对照组间差别均有显著性意义(P<0·05)。结论益肝康能抑制肝星状细胞[Ca2 ]i的升高,这可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一。     

热休克蛋白27在耳蜗基底膜上的表达及其意义

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)在耳蜗基底膜上的分布及意义。方法应用免疫荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜技术(laserscanningconfocalmicroscopy,LSCM)检测HSP27在正常成年大鼠耳蜗基底膜上的表达。结果HSP27主要表达于耳蜗基底膜Corti器中外毛细胞的表皮板及其侧壁、内外柱细胞表面、外柱细胞的头、体及其足板,而内毛细胞及其它支持细胞上未见其表达。结论在发育成熟的正常耳蜗中,HSP27主要是通过稳定肌动蛋白微丝的正常结构,维持细胞骨架的稳定,维持耳蜗内活性氧在正常水平及执行分子伴侣的功能,保护细胞,从而达到维持耳蜗正常生理功能的作用。     

荧光活性染料DiO在观察成骨诱导脂肪干细胞在脱钙骨材料上的生长与分布中的应用

目的探讨荧光活性染料DiO对人脂肪干细胞（hADSCs）染色标记的效果及标记后的hADSCs在部分脱钙骨（PDBM）上的生长粘附情况。方法利用扫描电镜观察了细胞材料复合后细胞的生长情况;检测了DiO标记的hADSCs和DiO未标记的hADSCs在PDBM上粘附率,采用激光共聚焦显微镜观察观察了DiO标记的hADSCs在平面培养及在PDBM上的生长、粘附情况。结果DiO标记的hADSCs平面培养时可以良好地生长,DiO标记的hADSCs粘附率为（94．5±2．2）％,未标记的hADSCs粘附率为（95．1±1．3）％,统计学分析两者无显著差异（P〉0．05）。DiO标记的hADSCs在PDBM支架材料上可以良好的粘附生长。结论DiO对被标记细胞的存活、生长无影响、不影响细胞粘附,能反映细胞在支架材料上的正常生长状况。DiO标记是一种简洁、准确的观察hADSCs细胞在支架材料上粘附及生长状况的方法。     

芹菜素对急性局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠半暗区内小胶质细胞的影响

目的探讨芹菜素对急性局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠半暗区内小胶质细胞的影响及意义。方法采用改良线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。动物随机分为假手术组、模型组、芹菜素组。模型组和芹菜素组按再灌注时间不同又分为再灌注6、24、48、72 h及7 d各5个小组,共11组。各组观察至规定的时间进行神经行为学评分,其中随机取6只大鼠,进行异硫氰酸荧光素标记的同工凝集素B4(FITC-ILB4)染色,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察浸润的单核细胞及半暗区小胶质细胞形态及数量的变化,余下6只大鼠取脑组织,测定脑含水量。结果脑缺血再灌注6 h,模型组大鼠脑缺血半暗区周围出现同工凝集素B4阳性(ILB4+)表达细胞即分枝状小胶质细胞(罗丹明6G标记阴性即Rhod 6G?)和浸润的单核细胞(罗丹明6G标记阳性即Rhod 6G+);48 h小胶质细胞明显增多,形态向阿米巴样转变;72 h达到高峰,主要为脑源性小胶质细胞增生,形态以阿米巴样为主;7 d小胶质细胞减少;芹菜素组相应时间点小胶质细胞较模型组明显减少(P<0.05、0.01),形态亦呈现相似改变。脑缺血48、72 h,芹菜素组大鼠脑组织含水量明显低于模型组(P<0.01)。模型组神经行为学评分与半暗区ILB4+细胞数呈负性相关(r=?0.415,P<0.05),且芹菜素能有效降低模型组神经功能缺损程度(P<0.05),明显减轻脑损伤程度。结论缺血后的大脑脑实质内一部分小胶质细胞来源于循环中的单核细胞;半暗区小胶质细胞形态及数量的变化与脑损伤程度具有相关性;芹菜素对急性局灶性大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,且可能与下调小胶质细胞数量,抑制小胶质细胞过度活化密切相关。     

神经生长因子对脑出血血肿灶周神经元和神经胶质细胞的影响

目的 探讨神经生长因子（NGF）对脑出血血肿灶周神经元和神经胶质细胞的影响。方法 健康家犬28只．随机分为两组：NGF组（n=20）：注血后0．5h，将NGF 2000 AU立体定向导入血肿灶周区；脑出血（ICH）组（n=8）：只注血，不注药。在ICH后1、3、10、28d四个时间点进行以下检测：①采用Purdy评分观察临床神经功能恢复情况。②采用免疫组化SP法，检测外源性NGF在血肿灶周脑组织中的有效表达。③激光共聚焦显微镜检测血肿灶周神经元烯醇化酶（NSE）、神经纤维酸性蛋白（GFAP）荧光单标阳性细胞的数目。结果 ①1～3d Purdy评分两组比较无显著性差异（P〉0．05），但10～28d评分NGF组显著好于ICH组（P〈0．05）。②NGF组血肿灶周免疫阳性细胞3d时大量出现，染色较深。持续10d，而ICH组表达量少且持续时间短（P〈0．05）。③NGF组激光共聚焦显微镜下NSE、GFAP单标阳性细胞数均明显多于ICH组（P〈0，05）。结论 外源性NGF立体定向导入血肿灶周区，早期能够通过保护神经元提高存活率；晚期能够通过促进胶质细胞适度增生、神经纤维生长来促进血肿灶周神经功能的修复。     

光照角度对牙体与充填材料间微渗漏影响的研究

目的：通过改变发光二极管（light emitting diode,LED）固化光源与充填材料表面所成角度,研究光照角度对牙体与充填材料间微渗漏的影响。方法：选取21颗完整的离体前磨牙,随机分成3组,以颊面牙颈部釉牙骨质界为中心制备直径2mm,洞深1.5mm的圆形V类洞,酸蚀粘结后,复合树脂充填,以3种不同的角度光照,3组光源均朝向根方,A组：固化光源与充填体表面成30°角光照;B组：成60°角光照;C组：成90°角光照。将3组实验牙置于（37±1）℃恒温箱,0.1%罗丹明B荧光染色剂浸泡24h后,经充填体中央,沿牙体长轴颊舌向纵剖成两半,激光扫描共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscopy,LSCM）下观测龈壁及壁处的微渗漏。结果：改变固化光源与充填材料表面所成角度,对龈壁处微渗漏的影响具有统计学意义（P〈0.01）,龈壁处光照角度为90°时微渗漏最小;壁处3组之间微渗漏无明显差异。结论：固化光源光照角度的改变对牙体与充填材料间的微渗漏有影响。本实验光照角度为90°时牙体与充填材料间微渗漏最小。