蕨麻小型猪心梗模型的建立及梗死边缘区的基因表达谱分析

目的 建立应用蕨麻小型猪建立心肌梗死（心梗）的造模方法和具有临床意义的模型指标,探讨心梗边缘区的基因表达与代谢失偿的相关性。方法 选取13只雄性蕨麻小型猪,随机分组,其中假手术对照组和心梗手术组各5只,不经任何手术处理的正常对照组3只。麻醉后在左前冠状动脉行靠近心尖的三分一降支主干支进行永久性结扎形成心肌缺血、梗死。术后4周进行心功能超声检测、采血并进行血清生化分析;安乐死后取梗死边缘区进行病理和基因芯片分析。结果 超声图可见明显的心梗区域,数据显示心梗手术组的收缩末期左心室腔射血分数及短轴缩短率较假手术组分别降低32%和40%;血清中有谷草转氨酶、血清胆红素、乳酸脱氢酶等升高;病理切片显示梗死边缘区域的心肌纤维断裂、溶解,结缔组织增生,中性粒细胞和淋巴细胞增多;基因表达谱分析显示在梗死边缘区有2个调控心梗后重构和组织病理通路,3个炎症和免疫调节通路,8个脂肪、蛋白、糖能量代谢途径的基因表达有显著性改变。结论 成功建立了蕨麻小型猪的心梗模型,其冠状动脉分支少,便于手术且成模稳定性,模型表征可与临床指标相吻合;模型梗死边缘区的基因表达谱特征与临床上代谢失偿表现有相同变化趋势,为心梗机理的研究提供了实验动物模型及心梗边缘区的具有参考价值的特征性改变。     

蕨麻猪与巴马小型猪脏器指数及低氧相关基因的比较

目的研究蕨麻猪与巴马小型猪脏器指数及低氧相关基因表达量的差异。方法采用Taq Man探针实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术,检测蕨麻猪与巴马小型猪心、肝、脾、肺、肾低氧反应基因表达量的变化。结果蕨麻猪的肾脏、脾脏指数低于巴马小型猪,蕨麻猪的心脏、肺脏指数高于巴马小型猪。蕨麻猪血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)与低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1,HIF-1α)在肺、肾中的表达量明显比普通猪高(P0.05或P0.01);促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)只在肺中比巴马小型猪高(P0.05)。结论不同物种脏器指数可能是物种对物质环境、能量环境、外界病原体、能量代谢需求等综合因素进化适应的结果。蕨麻猪低氧相关基因明显比巴马小型猪高,揭示在基因方面蕨麻猪具有较强的高原适应性。     

高原多脏器功能障碍综合征蕨麻小型猪模型的建立及促肾上腺皮质激素与皮质酮的变化

目的 研究高原多脏器功能障碍综合征(H-MODS)蕨麻小型猪模型的建立及促肾上腺皮质激素(ACTH)与皮质酮(CORT)的变化特点.方法 选用3个剂量(低、中、高)内毒素(LPS)诱导高原土生蕨麻小型猪成功建立H-MODS模型(B、C、D组),生理盐水为对照组(A组).检测不同时点血清生理生化指标及ACTH与CORT表达水平.结果 各组蕨麻小型猪泵入LPS后肌酸激酶(CK)在3 ～24 h升高,48 h之后明显降低;天门冬氨酸转氨酶(AST)在6～24 h升高;丙氨酸氨基转移酶(ALT)在12 ～24 h的水平显著高于0h和A组;总胆红素(TBIL)在24～48 h的水平显著升高;肌酐(CRE)在6h水平明显高于0h.白细胞数量在0～6 h升高,6～24 h降低.ACTH表达量在泵入LPS后开始上升,在12h后降低,在72 h基本恢复到与对照组相同水平;CORT在泵入LPS后3h上升至最高,后又开始下降,24 h后开始上升,在72 h时基本恢复到正常.低、中、高剂量组的变化趋势基本相同.结论 高原MODS形成时机体处于严重感染应激状态下,ACTH与CORT表达水平出现剧烈变化,下丘脑-垂体-肾上腺轴对机体调节的动态平衡被打破而出现紊乱.     

蕨麻小型猪与巴马小型猪高原多脏器功能障碍综合征模型的比较研究

目的比较不同海拔地区两种小型猪高原多脏器功能障碍综合征(H-MODS)模型存在的差异,探讨建立H-MODS模型的理想动物。方法利用高原土生蕨麻小型猪与平原巴马小型猪,以内毒素(LPS)建立HMODS模型。检测不同时点血液生理生化指标的变化,并观察肺脏组织病理学变化。结果巴马小型猪模型的死亡率明显高于蕨麻小型猪;生理生化各指标的变化基本相同,但蕨麻小型猪的变化较平缓。在24 h与48 h肺脏均出现严重病理改变,但巴马小型猪较蕨麻小型猪更严重。结论不同海拔地区的两种小型猪均可成功建立HMODS模型,同时蕨麻小型猪由于自身高原生物特性对H-MODS模型的复制更加准确安全,避免高原环境的外在因素的影响。     

微卫星标记对高原蕨麻猪的遗传多样性研究

目的探讨蕨麻猪的亲缘关系,遗传多样性,是否受外来血缘的影响。方法用9个微卫星DNA标记对5群猪进行等位基因频率、遗传距离、系统发生树构建和主成分等分析。结果微卫星标记在125个个体中,共检测出148个等位基因,蕨麻猪最少(55个)。蕨麻猪与兰州猪的遗传距离DA和标准遗传距离DS最大,分别为0.6781和1.3312,DA、DS分别用UPGMA和NJ构建了四种系统发生树,都是蕨麻猪聚为一类,其余4种猪聚为一类。主成分1(PC1)为62.174%,看作是蕨麻猪的代表,与其他4群猪差异较大。结论蕨麻猪与兰州、武威、临洮和青海四群猪相比,遗传距离大,主成分差异大,亲缘关系较远,蕨麻猪比较纯,没有受到这4群猪血缘的影响。     

蕨麻小型猪主要脏器重量与体重的相关性分析

目的测定蕨麻小型猪体重和主要脏器重量,计算脏器系数,并对脏器重量与体重进行相关分析和回归分析。方法选取7~15月龄普通级蕨麻小型猪21头(其中雌性12头,雄性9头),分别测定体重和心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、膀胱和胃等8个主要脏器重量,计算脏器系数,再用Student's t test分析性别间差异,用SAS软件进行各脏器重和体重间的相关、线性回归、多元线性回归和多重回归分析。结果性别间比较,蕨麻小型猪体重、脏器重量和脏器系数差异无显著性。相关分析显示主要脏器的重量与体重相关性显示出了一致的变化规律,均与体重呈正相关,其中心脏、肝脏、脾脏、肾脏的重量与体重显著正相关(P0.05),线性回归分析表明线性方程具有实际意义。多元线性回归分析显示心脏和胃重量与体重有显著直接相关性,其中心脏重与体重相关性最强。进一步多重回归分析说明,肝脏、肺脏、肾脏、膀胱分别与心脏和胃表现显著回归,而脾脏与肝脏表现显著回归。结论蕨麻小型猪的主要脏器系数性别间差异无显著性,主要脏器与体重存在一定的线性关系。