CA125阴性卵巢癌血清标志物差异蛋白质组学的研究

目的:通过二维差异凝胶电泳(2-DEDIGE)和基质辅助激光解吸离子化-飞行时间(MALDI-TOF/TOF)串联质谱差异蛋白质组学方法寻找CA125阴性卵巢上皮癌血清标志物,以提高卵巢上皮癌诊断的灵敏度和特异度。方法:收集103例卵巢上皮癌,60例正常对照,63例卵巢良性肿瘤、63例盆腔良性病变的血清。按年龄匹配,选取6例CA125阴性卵巢癌和6例正常对照组的血清等容积混合。祛除血清高丰度白蛋白和IgG后进行2-DEDIGE。实验重复3次。通过DeCyder软件分析得出有显著差异的蛋白质点,MALDI-TOF/TOF鉴定差异蛋白质。分别用WesternBlot和ELISA方法验证获选的血清标志物。结果:(1)经2-DEDIGE实验得出有显著差异的蛋白质点41个,MALDI-TOF/TOF成功鉴定了其中的28个蛋白质点。上调最显著的蛋白质点为结合珠蛋白(haptoglo-bin,Hp),下调最显著的蛋白质为转铁蛋白(transferrin,Tf);(2)WesternBlot和ELISA验证结果显示,CA125阴性卵巢上皮癌血清Hp和Tf与正常对照有显著差异(P<0.001);(3)CA125+Hp+Tf联合检测(两者或两者以上阳性判断为阳性)诊断卵巢上皮癌的灵敏度和特异度高于CA125、Hp和Tf单独检测。结论:Hp和Tf是卵巢上皮癌血清中差异表达的蛋白质,可作为卵巢上皮癌的血清标志物。CA125+Hp+Tf联合检测有助于提高卵巢上皮癌诊断的灵敏度和特异度,有助于提高CA125阴性卵巢上皮癌的检出率。     

血清触珠蛋白在烧伤后B淋巴细胞功能紊乱中的作用

旨在进一步观察烧伤后血清触珠蛋白对Ｂ淋巴细胞功能的影响，以期弄清血清ＨＰ在烧伤后免疫功能紊乱发生机制中的作用。首先采用亲和层析法从烧伤血清纯化ＨＰ，然后在培养的正常小鼠脾细胞中分别按正常血清ＨＰ含量（火箭电泳法：１．２３３ｍｇ／ｍｌ）和烧伤血清ＨＰ含量（火箭电泳法：９．４０７ｍｇ／ｍｌ）加入纯化ＨＰ，观察ＨＰ对美洲商陆和脂多糖诱导的脾细胞ＩｇＧ产生能力的影响，用ＥＬＩＳＡ检测培养细胞上清ＩｇＧ含量     

缺铁性贫血大鼠铁效应元件结合蛋白mRNA表达及顺乌头酸酶活性测定

目的：探索铁代谢平衡中铁效应元件结合蛋白（ＩＲＥ－ＢＰ）的调节机制。方法：用低铁饮食建立大鼠营养性缺铁性贫血模型，分析缺铁性贫血发生过程中ＩＲＥ－ＢＰｍＲＮＡ的表达水平及顺乌头酸酶活性的变化。结果：ＩＲＥ－ＢＰｍＲＮＡ表达水平在缺铁性贫血发生、发展过程中无明显变化，而顺乌头酸酶活性明显降低，再经硫酸亚铁处理后活性明显升高。结论：ＩＲＥ－ＢＰ可能通过其内部［Ｆｅ－Ｓ］基团变构的翻译后调节与转录后调节共同参与铁代谢平衡的调控。     

超级白细胞介素-6重组慢病毒的构建及其对肝细胞的促增殖作用

目的 观察超级白细胞介素-6重组慢病毒对人正常肝细胞L-02的促增殖作用.方法 利用慢病毒表达质粒及其包装系统构建超级白细胞介素-6重组慢病毒(FIV-Hyper-IL-6)、IL-6重组慢病毒(FIV-IL-6)和空慢病毒载体(FIV),用嘌呤霉素筛选的方法测定其病毒滴度.将人肝细胞L-02分为4组:FIV-Hyper-IL-6组、FIV-IL-6组、FIV组及未感染组,各组分别感染其相应的重组慢病毒,采用四甲基偶氮唑盐法检测其对L-02细胞生长状态的影响;并用RT-PCR法检测重组慢病毒感染L-02细胞后产生的急性时相蛋白一结合珠蛋白mRNA表达量的变化.应用方差分析进行统计学分析.结果 构建出的各重组慢病毒能成功感染靶细胞,嘌呤霉素筛选法测得的各重组慢病毒的病毒滴度均为107pfu/ml.病毒颗粒感染L-02细胞后48h,细胞的促增殖作用(A值)FIV-Hyper-IL-6组为0.6267±0.0256,FIV-IL-6组、FIV组及未感染组分别为0.5563±0.0112、0.5040±0.0078、0.4790±0.0201,F=41.09,P值均<0.01,且随着时间的延长,对细胞的促增殖作用有所增加,并于感染后72h达到最高,为0.8000±0.0166.FIV-Hyper-IL-6组细胞结合珠蛋白mRNA吸光度值为0.7030±0.0106,FIV-IL-6组、FIV组及未感染组分别为0.3355±0.0093、0.1143±0.0153、0.1145±0.0076,q=57.5007,P值均<0.01.结论 构建的Hyper-IL-6重组慢病毒能够显著刺激L-02细胞表达结合珠蛋白,对L-02细胞有较强的促增殖作用.     

电免疫扩散法测定正常人血触珠蛋白

本文应用电免疫扩散法对220例健康人进行血触珠蛋白测定。正常值为0.86±0.28μmol/L(256.51±82.88mg/dl),血清和血浆中触珠蛋白含量一致,与性别无关,但与年龄有关。采用3mm孔径,5mm孔距,结果与2mm孔径,7mm孔距者一致,前者操作简便,测样数量多,可代表后者。     

结合珠蛋白表型与五种皮肤病的关系

目的 研究结合珠蛋白表型在5种皮肤病中的分布及其意义。方法 通过变性的不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(12% SDS-PAGE),硝酸银染色确定结合珠蛋白表型。结果 正常汉族人结合珠蛋白表型Hp1-1、Hp2-1 Hp2-2型分别为9.9%、46.9%和43.2%,与正常人对照相比,结合珠蛋白Hp2-2型的频率在系统性红斑狼疮患者中明显增高(59.3%),且有容易伴发肾脏损害的倾向;2-1型在银屑病患者中降低(30.9%);1-1型在湿疹患者中增高(27.4%),且有不容易伴发渗出的倾向,而结合珠蛋白表型在二期梅毒和尖锐湿疣患者中的分布无统计学意义。结论 结合珠蛋白表型可能与这些皮肤病的发病和临床表现有关系。     

结合珠蛋白在银屑病皮损及皮损周边外观正常皮肤中的表达

目的 从mRNA及蛋白质水平研究结合珠蛋白在银屑病皮损及皮损周边外观正常皮肤中的表达,探讨其与朗格汉斯细胞的关系及在银屑病发病中的作用.方法采用免疫组化、免疫荧光双标记和原位杂交技术检测银屑病皮损及皮损周边外观正常皮肤中结合珠蛋白的表达.结果与正常人皮肤相比,银屑病皮损处角质形成细胞中结合珠蛋白mRNA的表达均明显增强(P＜0.001);皮损周边外观正常皮肤中的表达与正常人皮肤差异无显著性(P＞0.05).免疫组化显示:皮损处部分角质形成细胞胞浆中有结合珠蛋白表达;皮损及皮损周边外观正常皮肤中均可见结合珠蛋白在部分朗格汉斯细胞中呈阳性表达,且两者中结合珠蛋白阳性朗格汉斯细胞与朗格汉斯细胞总计数的比值较正常皮肤显著增高(P＜0.001).结论银屑病皮损处角质形成细胞中结合珠蛋白mRNA的表达增强,并能合成结合珠蛋白.合成结合珠蛋白的角质形成细胞可能在银屑病发病机理中起负反馈调节作用。     

原发性血小板减少性紫癜患者血清触珠蛋白的研究

用火箭电泳法测定53例原发性血小板减少性紫癜患者血清触珠蛋白均值为0.47±0.22g/L,明显高于正常人(P<0.01)。当病情改善时,触珠蛋白水平恢复正常,且先于(至少是同时)血小板的改变。本测定可以作为诊断原发性血小板减少性紫癜的一个指标,据其可估计病人的预后。并初步探讨了其免疫学机制。     

流行性出血热血浆触珠蛋白的临床变化

应用火箭电泳法对103例流行性出血热病人进行了血触珠蛋白的检测,结果表明:病人血浆触珠蛋白水平明显升高,疾病的不同时期、不同类型,其水平各异,提示血浆触珠蛋白测定可作为监测本病的指标。并对其发生机理进行了探讨。     

侵袭性念珠菌病与触珠蛋白基因多态性的相关性研究

目的：检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis, IC)患者血清中触珠蛋白(haptogliobin,Hp)的含量和表型分布情况,分析 Hp 基因多态性与 IC 的相关性。方法用免疫比浊法分析41例 IC 患者和60例对照者血清中 Hp 的含量,同时用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳法分析两组受试者血清中 Hp 的表型分布情况。结果 IC 组的血清 Hp 含量显著高于对照组(t =5.564,P <0.05)；IC 组的 Hp1-1和 Hp2-1表型分布与对照组间差异无统计学意义(χ2=0.092、0.059,P >0.05),而在 Hp2-2表型分布明显高于对照组,差异有统计学意义(χ2=10.800,P <0.05)。结论带有 Hp2-2表型的人群可能对 IC 有遗传易感性,其血清 Hp 含量增高可能在 IC 发病中起一定作用。