参与连翘苯丙烷合成途径的WRKY转录因子的筛选与鉴定

目的 筛选出参与连翘Forsythia suspensa苯丙烷合成途径的WRKY转录因子并进行生物信息学分析。方法 通过对从连翘转录组数据中筛选出的62条连翘WRKY基因序列进行鉴定;通过采用蛋白理化性质和基序分析、蛋白结构分析、系统进化分析、功能注释、蛋白互作分析、外源激素处理后实时荧光定量分析等方式进行相关分析。结果 最终筛选出52条具有WRKY结构域的连翘WRKY转录因子。WRKY转录因子编码蛋白的氨基酸数目在105～728,相对分子质量在12277.95～80 321.99。蛋白基序分析显示其均有WRKY结构域,与拟南芥WRKY转录因子构建系统进化树将连翘52个WRKY转录因子进一步分为3大类;筛选出5个可能参与连翘苯丙烷合成途径的连翘WRKY转录因子,并推测其可能以被MAPK级联反应所调控的方式介导连翘中苯丙烷合成途径。结论 通过分析转录组测序结果,从52个连翘WRKY转录因子中筛选出5个可能参与连翘苯丙烷合成途径的转录因子,其表现出组织特异性表达,且对不同浓度茉莉酸甲脂表现出不同的响应,为进一步研究其作用机制提供研究方向。     

连翘败毒片的抗内毒素及免疫调节作用研究

【目的】研究连翘败毒片的抗内毒素及免疫调节作用。【方法】测定大鼠内毒素模型的肝线粒体脂质过氧化物(LPO)、溶酶体酸性磷酸酶(ACP)和超氧化物歧化酶(SOD)活性，观察小鼠死亡率；采用血清抗体生成方法测定小鼠溶血素和采用二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠局部迟发超敏DTH反应，并记录其胸腺指数和脾指数。【结果】连翘败毒片可降低线粒体中的LPO和ACP浓度，升高SOD活性，对内毒素所致小鼠的死亡有明显的保护作用，显著增加小鼠血清HC50含量，并增加小鼠迟发超敏DHC反应、胸腺指数和脾指数。【结论】连翘败毒片具有抗内毒素及提高机体细胞免疫、体液免疫的作用。     

均匀设计在熊果酸提取工艺中的应用

采用均匀设计对连翘中熊果酸的提取工艺进行考察,以乙醇浓度、提取时间、液固比、提取次数为考察因素,采用U7(7)4表进行实验,根据多元回归方程得到最佳提取工艺为:乙醇浓度为75%,其加入量为原料的7倍,提取2次,每次60 min.     

连翘对重症急性胰腺炎大鼠肝组织中NF-κB和Foxp3表达的影响

目的探讨核因子NF-κB和Foxp3在重症急性胰腺炎（SAP）肝损伤中的作用及连翘对其表达活性的影响。方法雄性Wistar大鼠80只,随机分成假手术组（SO组）、SAP组和干预组,其中干预组分连翘高、中、低剂量组和阳性对照组（PDTC）。牛磺胆酸钠溶液在胰胆管远端注射造模,SO和SAP组于术后3、6、12 h,干预组于术后12 h处死大鼠,分别留取标本。测各组血淀粉酶（AMY）、ALT及TNFα水平,鲎试剂法测血浆内毒素水平,流式细胞术测外周血Treg百分数,对胰腺及肝脏进行病理学检查及评分,RT-PCR法检测肝脏组织中NF-κBmRNA和Foxp3mRNA表达量。组间比较采用单因素方差分析,进一步进行多重比较,采用LSD法进行统计学处理,各指标间相关性分析采用直线相关分析。结果与SO组比较,SAP组中各项指标均随时间升高,于12 h达高峰。与SAP12 h组相比,干预组（大鼠死亡率为0）肝脏组织中的NF-κBmRNA和Foxp3mRNA表达明显降低（P〈0.01）,与Treg呈正相关（r=0.738,P〈0.01）。随连翘剂量增加,AMY、ALT及TNFα水平均明显降低,肝脏和胰腺组织炎症明显减轻,高剂量组和阳性对照组相比较无明显差异（P〉0.05）。结论 NF-κB的激活参与SAP肝损伤的发生,连翘能显著降低NF-κB的活性及肝脏组织中NF-κBmRNA和Foxp3mRNA的表达,减轻SAP肝损伤的严重程度。     

Anti-inflammatory effects of YeongyoSeungma-tang

Ethnopharmacological relevance

YeongyoSeungma-tang which includes Fructus Forsythia, has been used in oriental traditional medicine for treatment of early smallpox and atopic dermatitis.

Aim of the study

YeongyoSeungma-tang was carried out to investigate for anti-inflammatory effects.

Materials and methods

YeongyoSeungma-tang was tested for anti-inflammatory effects against lipopolysaccharide (LPS)-induced nitric oxide (NO), prostaglandin E₂ (PGE₂), and tumor necrosis factor alpha (TNF-α) releases as well as nuclear factor kappa B (NF-κB) expression using RAW264.7 macrophage cells.

Results

YeongyoSeungma-tang significantly inhibited generation of NO (42% and 59% inhibition at doses of 5 μg/mL and 10 μg/mL, respectively), PGE₂ (46% and 80% inhibition at doses of 5 μg/mL and 10 μg/mL, respectively) and TNF-α (6% and 23% inhibition at doses of 5 μg/mL and 10 μg/mL, respectively) on LPS-stimulated RAW 264.7 cells in a concentration-dependent manner. Consistently in these observations, the expression of inducible NO synthase (iNOS) enzyme was also inhibited by YeongyoSeungma-tang. However, YeongyoSeungma-tang did not show any influence on the expression of cyclooxygenase-2. The cream containing 0.075% YeongyoSeungma-tang showed good skin moisturizing effect without any irritation.

Conclusion

The present study may support the fact that YeongyoSeungma-tang can have the good possibility as an anti-inflammatory agent for troubled skins.     

连翘属药用植物化学成分研究进展

目的:探讨连翘属药用植物化学成分研究概况。方法:总结国内外相关文献,综述连翘属药用植物所含化学成分的种类、数量及结构。结果:目前已从连翘属药用植物中分离出苯乙醇苷类20个,木脂素类18个,C₆-C₂天然醇类13个,萜类13个,黄酮类5个,还有一些挥发油及其他类成分。结论:通过对该属药用植物化学成分的系统总结,对开展本属其它药用植物的研究有很好的参考价值。     

凹凸棒对中药中连翘苷吸附作用考察

目的：考察凹凸棒作为吸附澄清剂，对连翘药材、银翘解毒颗粒水煎提取液中连翘苷的吸附作用和对无效成分的吸附清除作用。方法：以水煎提取液中浸出物含量和连翘苷的含量作为评价指标，分别用不同量的普通凹凸棒和酸化凹凸棒处理，连翘药材及银翘解毒颗粒水煎提取液，评价其吸附澄清效果，并与自然静置沉淀法进行比较。结果：普通凹凸棒对无效成分具有较明显的吸附清除作用，对连翘苷含量没有明显吸附影响。酸化凹凸棒对连翘苷含量有较明显的吸附作用，对无效成分也有一定的吸附清除作用。结论：凹凸棒可作为银翘解毒颗粒水煎提取液的吸附澄清剂，尤其是酸化凹凸棒值得作进一步的表面结构修饰研究，以优化其吸附澄清效果。     

连翘对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌的体外抗菌活性研究

[目的]观察连翘对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌的体外抗菌活性。[方法]用新的中药抑菌实验方法进行连翘对84株金葡菌和140株表皮葡萄球菌的体外抗菌活性的测定。[结果]连翘对金葡菌和表皮葡萄球菌能抑制50%菌株的最低细菌浓度(MIC50)均为0.122g/L,而能抑制90%菌株的最低抑菌浓度(MIC90)分别为0.98和0.244g/L。[结论]连翘对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有较好的体外抗菌效果。     

RP-HPLC法同时测定不同采收期连翘中乌索酸和齐墩果酸的含量

目的建立同时测定连翘中乌索酸和齐墩果酸含量的测定方法。方法采用HPLC法测定其含量。色谱柱为Nucleodur C18色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比为88∶12),流速为0.8 mL.min-1,检测波长为210 nm,柱温为25℃。结果乌索酸、齐墩果酸进样量分别在0.4265~4.2650μg(r=0.9997)和0.4624~4.6240μg(r=0.9999)内峰面积与进样量呈良好的线性关系;乌索酸和齐墩果酸的平均回收率分别为99.6%(RSD为0.7%)和98.7%(RSD为0.8%)。结论该方法可用于中药连翘的质量评价和控制。     

金银花、连翘配伍提取物体外抗甲型流感病毒FM1株的实验研究

目的:观察金银花、连翘配伍提取物(JLT)体外抑制甲型流感病毒FM1株的作用。方法:采用血凝试验方法,测定不同质量浓度JLT体外和鸡胚内抑制流感病毒效价,分析JLT对病毒增殖的影响。结果:与病毒对照组比较,JLT组血凝效价降低,其抑制作用时间可从1 h持续到24 h,其对病毒的抑制作用随着药物质量浓度的降低而逐渐减弱;JLT在400 mg/mL、200 mg/mL及100 mg/mL时,对感染流感病毒鸡胚具有预防和保护治疗作用(P<0.001),而在400 mg/mL时的预防作用明显优于阳性对照组(P<0.05)。结论:JLT可有效抑制甲型流感病毒FM1株。