肺岩宁方对肿瘤坏死因子α诱导的人肺癌细胞系核转录因子κB基因表达的影响

目的：探讨中药肺岩宁方含药血清对肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor—α,TNF—α）诱导的人肺癌细胞系A549核转录因子KB（nuclearfactor—κB,NF—κB）基因表达的影响。方法：制备肺岩宁方含药血清,以肺癌细胞系A549为靶细胞,确定肺岩宁方含药血清用药浓度。将A549细胞分为对照血清组、TNFα组、肺岩宁方含药血清组和综合治疗组。观察用药前后A549细胞大体形态变化;四唑单钠盐法测定肺岩宁方含药血清对细胞增殖的影响;蛋白印迹法检测肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的细胞核NF-κ及抑制性核转录因子（inhibitorxBa,IκBα）表达的影响;将人NF-κB重组质粒用脂质体转染法导入A549细胞24h后,用肺岩宁方含药血清治疗24h,采用双荧光素酶报告基因系统测定肺岩宁方含药血清对TNF—α诱导的细胞核NF-κBp65转录活性的影响。结果：与对照血清比较．15％和20％肺岩宁方含药血清对A549细胞具有明显的增殖抑制作用（P〈0．05,P〈0.01）。1μg／L TNF—α能够明显提高NF—κB基因的表达,与肺岩宁方含药血清共同作用后,能够显著抑制它的表达（P〈0．01）,而细胞内IκBα的表达差异无统计学意义（P〈0．05）;肺岩宁方含药血清能够显著降低A549细胞经NF—κB重组质粒转染后的转录活性（P〈0．01）。结论：肺岩宁方含药血清可抑制人肺癌细胞系增殖,可能是通过对TNF-α诱导的NF-κB基因活性的抑制作用实现的。。     

肺岩宁方对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及管腔形成的影响

目的：观察中药肺岩宁方含药血清对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）增殖、迁移及管腔形成的影响。方法：采用新鲜产后脐带,分离HUVEC。SD大鼠灌胃肺岩宁方制备肺岩宁方含药血清,采用人肺腺癌细胞A549制备条件培养液。用磺酰罗丹明B（sulforhodamineB,SRB）法观察肺岩宁方含药血清对HUVEC、人肺腺癌细胞A549和A549细胞条件培养液诱导HUVEC增殖的抑制作用;采用Boyden Chamber Transwell法检测其对HUVEC细胞迁移的影响;管腔形成实验评价其对HUVEC形成管腔能力的影响。结果：与同浓度对照血清相比,肺岩宁方含药血清能够抑制HUVEC及肺癌细胞条件培养液诱导的内皮细胞的增殖（P〈0．01,P〈0．05）,高浓度肺岩宁方含药血清能够抑制肿瘤细胞A549的体外增殖,肺岩宁方含药血清（12．5％～37．5％）在体外能抑制20％胎牛血清诱导的内皮细胞的迁移（P〈0．05,P〈0．01）以及初级管腔的形成。结论：肺岩宁方具有明显的抑制新生血管生成的作用,这可能是肺岩宁方抗肺癌侵袭转移的机制之一。     

肺炎宁颗粒剂质量标准及稳定性研究

报道了肺炎宁颗粒剂的质量标准研究。对处方中金银花。大青叶和板蓝根进行了薄层鉴别,以黄酮为指标,比色法进行定量分析,同时考察了３批样品恒温下放置了３个月的稳定性。     

整合素连接激酶在C57小鼠Lewis肺癌中的表达及肺岩宁方对其的调控作用

目的探讨肺岩宁方对整合素连接激酶（integrin-linked kinase.ILK）mRNA及蛋白表达的影响。方法建立C57小鼠Lewis肺癌模型。将C57BL-6纯系10周龄雄性小鼠随机分为正常组、模型组、顺铂（DDP）组、肺岩宁方组,每组10只。正常组正常饲养;模型组以0.9%NaCl溶液0.4ml灌胃;顺铂组在造模后第5天开始给药,在开始给药的第1、3、5天,DDP溶液1ml（含DDP0.1mg）腹腔注射,0.9%NaCl溶液0.4ml灌胃;肺岩宁方组在造模后第5天开始给予肺岩宁方药液0.4ml（生药含量36.1g/kg）灌胃。采用Real time PCR和Western blot方法分别检测ILK在移植瘤组织和转移灶发生的肺组织中mRNA、蛋白水平的表达。结果与正常组比较,模型组肿瘤肺转移率、转移灶及Ilk基因表达差异均有统计学意义（P〈0.01）,说明模型成功。与模型组比较,肺岩宁方组可以显著降低肺转移灶的发生的作用（P〈0.01）。各组移植肿瘤组织中,肺岩宁方组ILK基因表达与模型组比较显著降低（P〈0.01）;各组肺组织中,与模型组比较,肺岩宁方组ILK基因表达显著下降（P〈0.01）,而化疗组ILK基因表达反而升高（P〈0.01）。与模型组比较,肺岩宁方组ILK蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论肺岩宁具有显著降低ILK基因表达的作用,调控Snail信号途径的关键信号分子ILK基因有可能是肺岩宁方抗肿瘤转移的有效作用靶点所在。     

肺岩宁颗粒治疗精气两亏型中晚期肺腺癌的临床研究

目的观察肺岩宁颗粒治疗精气两亏型中晚期肺腺癌的临床疗效。方法采用前瞻性随机对照研究,将100例精气两亏型中晚期肺腺癌患者随机分为治疗组(49例)与对照组(51例)。治疗组予肺岩宁颗粒,对照组予肺岩宁颗粒模拟剂。两组疗程均为2个月,观察近期疗效及用药安全性,比较中医证候、卡氏评分、体质量及血清肿瘤标志物的变化情况。结果 (1)最终完成试验者,治疗组44例,对照组43例。(2)治疗组、对照组疾病控制率分别为79.5%、53.5%;组间疾病控制率比较,治疗组明显优于对照组(P0.05)。(3)治疗组、对照组中医证候改善率分别为81.8%、23.3%;组间中医证候改善率比较,治疗组明显优于对照组(P0.05)。(4)治疗组、对照组卡氏评分总有效率分别为93.2%、65.1%;组间卡氏评分总有效率比较,治疗组明显优于对照组(P0.05)。治疗组、对照组体质量总有效率分别为79.5%、69.8%;组间体质量总有效率比较差异无统计学意义(P0.05)。(5)组间治疗后比较,CA125、CA50水平差异有统计学意义,治疗组明显低于对照组(P0.05)。(6)两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论肺岩宁颗粒治疗精气两亏型中晚期肺腺癌的临床疗效满意,可明显稳定患者病情,改善其临床症状,提高其生活质量。     

肺岩宁冲剂对肺癌细胞移植瘤组织基因差异表达的影响

 目的 应用基因芯片技术研究肺岩宁冲剂对裸鼠人肺癌细胞移植瘤组织的基因表达谱的影响,初步探讨肺岩宁冲剂抗肺癌的分子机制。 方法 将人肺癌细胞H460皮下移植瘤裸鼠24只随机分为三组：空白对照组：0.9%氯化钠溶液0.4ml灌胃×14天;化疗组：第1、3、5天DDP溶液1ml(含DDP0.1mg)腹腔注射,0.9%氯化钠溶液0.4ml灌胃×14天;肺岩宁冲剂组：肺岩宁冲剂药液0.4ml（含生药0.6g）灌胃×14天。治疗后第15天提取各组移植瘤组织的总RNA并与人全基因组芯片杂交,经激光共聚焦扫描仪扫描及Lux Scan3.0 软件分析后比较各组中的差异表达基因。 结果 与对照组比较,化疗组共筛查出差异表达基因2187条,其中上调基因997条,下调基因1190条,功能未知基因326条。肺岩宁冲剂组共筛查出差异表达基因2093条,其中上调基因968条,下调基因1025条以及未知功能基因145条。按照基因功能可分为细胞周期相关基因、代谢相关基因、细胞信号转导分子、转录调控因子等。 结论 为明确肺岩宁冲剂抗肺癌的分子机制提供重要参考。     

肺岩宁方对ILK基因沉默后转染人肺癌A549细胞相关基因表达的影响

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)基因沉默后及中药肺岩宁方对相关下游靶基因表达的影响。方法:构建载体转染人肺腺癌细胞A549后,随机分为阴性对照病毒感染细胞(NC)组、RNAi靶点病毒感染细胞(KD)组、10%肺岩宁含药血清干预的NC组与KD组、20%肺岩宁含药血清干预的NC组与KD组,以及阳性对照10%DDP干预的KD组,应用Real time-PCR及Western Blot方法检测下游靶基因蛋白激酶B(Akt/PKB)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、转录因子-1(AP-1)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、β-链蛋白(β-catenin)的mRNA及蛋白表达水平。结果:与NC组比较,KD组GSK-3β、VEGF mRNA和蛋白表达显著下调(P0.05,P0.01),cyclinD1、MMP-9 mRNA和蛋白表达显著上调(P0.05,P0.01),Akt表达无变化,AP-1与β-catenin在mRNA水平表达升高(P0.01)、蛋白水平表达则下降;与KD组比较,KD+10%肺岩宁含药血清和KD+10%DDP组具有下调VEGF、cyclinD1、MMP-9和β-catenin蛋白表达、上调GSK-3β蛋白表达,以及下调AP-1、cyclinD1 mRNA表达的作用(P0.01);与KD组相比,KD+20%肺岩宁含药血清具有下调AP-1、cyclinD1和MMP-9蛋白表达的作用。结论:沉默ILK基因后可以明显降低GSK-3β、VEGF的表达,10%的中药肺岩宁方含药血清可能通过下调靶基因AP-1、cyclinD1、MMP-9、VEGF和β-catenin蛋白表达的作用而发挥其抗肿瘤的作用。     

肺岩宁方及其拆方对Lewis小鼠肿瘤肺转移与VEGF/KDR表达关系的影响

目的:观察肺岩宁方及其拆方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及其激酶功能区受体(kinase-domain insert containing receptor,KDR)mRNA与蛋白表达的影响。方法:建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、肺岩宁组、益气组、补肾组和抗癌组,每组10只。分别给予相应药物干预,均灌胃21 d,第22天处死。观察肺转移情况,取肿瘤组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中VEGF和KDR mRNA及蛋白表达水平。结果:肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠的肺转移率明显低于模型组与益气组(P<0.05)。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达VEGF和KDR,但肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠肿瘤组织中VEGF mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05),肺岩宁方组和抗癌组小鼠肿瘤组织中KDR mR-NA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05)。结论:肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调VEGF及其受体KDR mRNA和蛋白表达有关。     

肺岩宁对晚期非小细胞肺癌生长转移和血清VEGF的影响

观察中药肺岩宁 (黄芪、白术等 )对血管内皮生成因子 (VEGF)分泌的影响及抗晚期非小细胞肺癌侵袭转移的临床疗效。将 ( 91例 )病例分为化疗组 ( 3 1例 )、肺岩宁 +化疗组 (综合组 3 2例 )、肺岩宁组 ( 2 8例 )。化疗组化疗后对症治疗 ,综合组化疗前后服肺岩宁方 ,肺岩宁组单纯服用肺岩宁 ;治疗前后测定血清VEGF水平 ,观察患者原发瘤灶、转移灶变化和新转移灶出现情况 ,评价生活质量和毒副反应。疗程 3～ 4个月。结果 :治疗后原发病灶瘤体综合组与化疗组比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;转移灶瘤体综合组治疗后转移灶的增大显著低于化疗组 (P <0 0 5 ) ;新转移灶肺岩宁组和综合组淋巴结转移和远处转移的发生情况显著低于化疗组 (P <0 0 5 ) ;治疗前后相比 ,化疗组患者血清VEGF水平表现出上升趋势 ,肺岩宁组和综合组治疗后血清VEGF水平显著下降 (P <0 0 5 )。实验采用C5 7BL/ 6小鼠 ,接种Lewis肺癌细胞株 ,随机分为对照组、化疗组、肺岩宁组、综合组。实验结果 :用免疫组化法测定肿瘤切片的VEGF表达 ,小鼠肿瘤VEGF的表达。结论 :益气养精、解毒抗癌的肺岩宁具有抗肺癌侵袭转移的作用 ,减少VEGF分泌 ,抑制血管生成 ,可能是肺岩宁抗肺癌生长转移的机理之一。     

肺岩宁方组分对小鼠肿瘤血管生成与MMP-2、MMP-9关系的研究

目的 观察中药肺岩宁方组分对C57BL/6小鼠Lewis肿瘤微血管密度(microvessel density, MVD)与基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、MMP-9 mRNA及蛋白表达的影响。