DTT与顺铂诱导对食管癌Eca109细胞磷酸化P38表达的影响

目的:探讨磷酸化P38在顺铂和DTT诱导的食管癌Eca109细胞凋亡中的作用.方法:分别用DTT与顺铂诱导处理食管癌Eca109细胞,未加药组作为对照.采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;用免疫组化方法检测磷酸化P38的表达情况.结果:与对照组相比,DTT处理组及顺铂处理组细胞凋亡率明显升高.免疫组化结果显示:2处理组磷酸化P38的水平均明显高于对照组(P＜0.05);DTT处理组磷酸化P38大部分位于细胞核内,而顺铂组磷酸化P38则主要弥散于细胞浆内.结论:磷酸化P38在DTT和顺铂诱导的食管癌Eca109细胞凋亡时细胞内分布不同,激活的P38可能通过不同途径参与细胞凋亡.     

艾克清胶囊体外抗肿瘤作用的实验研究

目的：观察艾克清胶囊对人肺腺癌细胞（A549）、食管癌细胞（Eca9706）增殖的抑制作用。方法：采用A549细胞及Eca9706细胞为实验对象,用四氮唑（MTT）法检测二者的生存率,用公式计算细胞抑制率,在倒置显微镜下观察二者的细胞形态学改变。结果：①艾克清胶囊能显著抑制A549细胞及Eca9706细胞的增殖,并且有显著的量效关系。②艾克清胶囊低剂量对A549细胞的增殖抑制与对照组相比有一定的抑制作用,但无统计学意义,其对细胞的形态学有一定的影响;在低剂量下,Eca9706细胞增殖速度较快;③艾克清胶囊高剂量能显著影响A549细胞的形态,有直接杀死此两种肿瘤细胞的作用。结论：艾克清胶囊对A549细胞及Eca9706细胞的增殖有明显的抑制作用。抑制机制可能是通过影响细胞的增殖周期或促进了细胞的死亡。     

二硫苏糖醇诱导Eca109细胞凋亡及P38磷酸化检测

目的：检测二硫苏糖醇（DTT）诱导Eca109细胞凋亡及磷酸化P38（PP38）水平。方法：取对数生长期Eca109细胞分为3组：2mmol／LDTT处理组、PP38抑制剂SB203580孵育细胞2h后再加DTT处理组及对照组。应用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；采用免疫组织化学技术检测P38的磷酸化水平。结果：DTT组、SB203580＋DTT组及对照组的细胞凋亡率分别为16．8％、7．8％和3．1％。DTT组和DTT＋SB203580组细胞凋亡率均高于对照组（P〈0．01）；与DTT组相比，SB203580＋DTT组凋亡率下降（P〈0．01）。DTT组PP38水平高于对照组（P〈0．01）。结论：DTT可诱导人食管癌Eca109细胞凋亡，P38磷酸化起促进凋亡的作用。     

8-Br-cAMP和槲皮素诱导Eca-109细胞p16基因启动子DNA结合蛋白的定位研究

目的：探讨8-Br-cAMP和槲皮素(quercetin)诱导的Eca-109细胞p16基因启动子特异性结合的序列特异性DNA结合蛋白(DBP)的定位。方法：应用DBP定位改进方法,以制备的特异性DNA探针检测目的DBP在细胞内的定位;以免疫细胞化学技术,检测纲胞PCNA免疫反应性,作为肿瘤细胞恶性程度生物标志。结果：DBP定位信号以胞核为主,胞质有阳性信号的细胞．胞膜也呈阳性信号;2实验组信号比对照组强;各组信号均以大细胞更强;PCNA免疫细胞化学阳性呈棕黄色颗粒,主要位于胞核．对照组强于实验组。各组均以大细胞阳性信号更强。结论：2实验组与p16基因启动子结合的DBP主要位于胞核,但核外存在结合潜力的蛋白质。2实验组：PCNA免疫反应性均下降。捉示这些与p16基因启动子区结合的DBP在一定程度上可诱导细胞恶性逆转化。     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38和Caspase-3表达的影响

目的 探讨8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38、Caspase-3表达的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分为3组①对照组只加DMEM(Sigma)培养液(含体积分数10%胎牛血清)培养48 h.②Br组终浓度为2×10-5 mol/L 8-Br-cAMP的培养液培养48 h.③Q组终浓度为43 μmol/L槲皮素的培养液培养48 h.对以上3组细胞以TUNEL法染色计数细胞凋亡率.以免疫组化方法观察3组细胞的P38 MAPK-IR和Caspase-3-IR反应性.结果Br组及Q组细胞凋亡率高于对照组;Br组及Q组细胞的P38 MAPK-IR高于对照组;Br组及Q组细胞的Caspase-3-IR亦高于对照组.P38 MAPK-IR与Caspase-3-IR呈正相关.P均<0.05.结论P38 MAPK及Caspase-3参与了8-Br-cAMP及槲皮素诱导的Eca-109细胞的凋亡.     

神经生长因子在食管鳞癌细胞中的表达及分泌

目的 探讨神经生长因子（NGF)与食管鳞癌细胞分化的相关性。方法 采用有限稀释法分选出圆形和梭形单细胞克隆,采用无血清悬浮培养获得细胞球细胞, 贴壁的Eca109细胞分别在含血清和不含血清培养基中培养48h;分别采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR)技术和免疫印迹法,检测NGF在食管鳞癌细胞中mRNA水平和蛋白水平的表达;免疫荧光技术检测NGF在食管鳞癌细胞中的表达定位;免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中NGF的表达定位;用酶联免疫吸附法（ELISA）检测NGF在Eca109细胞培养基中的分泌情况。结果 在Eca109细胞中能检测到NGF的mRNA水平和蛋白水平的表达,其中NGF在细胞球细胞中的mRNA水平和蛋白水平的表达量最高。食管癌组织中检测到NGF表达于细胞质。Eca109细胞在无血清培养条件下能够分泌NGF,且明显高于含血清培养基中的含量。结论 食管癌细胞系Eca109表达并分泌NGF,并且食管癌组织中表达NGF,NGF可能在维持食管鳞状细胞癌的干细胞特性发挥了重要作用。     

Impact of resveratrol on the expression of apoptosis related gene survivin and bax in human cancer cells

Objective： We explored the mechanism of apoptosis in human esophageal cancer Ecal09 cells by resveratrol. Methods： The suppressive ratio of resveratrol on Ecal09 cells proliferation was evaluated by MTT colorimetric assay and morphology was observed by transmission electron microscope. The expression of survivin and bax was analyzed by RT-PCR and Flow Cytometry （FCM）. Results： Resveratrol inhibited the growth of Ecal09 calls in a dose-and time-dependent man- ner, and the suppressive ratio arrived at 76.42%. Morphological apoptosis could be observed after treated with resveratrol.The bulk of some drug-treated cells turned small and the nuclear chromatin became condensed and rnarginated. The results determined by RT-PCR and FCM showed that resveratrol could down-regulate surviving, while up-regulate bax. Conclusion： Resveratrol could induce the apoptosis of human esophageal cancer Ecal09 cells, and its possible molecular mechanisms might be related to modulation the expression of survivin and bax.     

新疆家蚕抗菌肽联合多种化疗药物对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

【目的】研究新疆家蚕抗菌肽联合4种化疗药物对人食管癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响。【方法】应用MTT法检测新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与不同浓度阿霉素(Doxorubicin,DOX)、卡铂(Carboplatin,CBP)、顺铂(Dichloro-Diamineplatinum,DDP)、环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)联合,对人食管癌Eca109细胞增殖的影响;流式细胞仪分析新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与D0X、CBP、DDP、CTX联合,对Eca109细胞凋亡,活性氧水平及线粒体膜电位的影响。【结果】新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与化疗药物DOX、DDP、CTX分别单独用药或联合用药均可抑制Eca109细胞的增殖作用,联合用药组与各药物单独处理组相比,细胞凋亡率,活性氧水平及线粒体膜电位均具有显著性差异（P<0.05）。【结论】在体外实验中,抗菌肽与化疗药物DOX、DDP和CTX联用对Eca109细胞具有增殖抑制作用和凋亡诱导作用。新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与DOX、DDP和CTX联合作用Eca109细胞具有协同作用,而与CBP联合作用Eca109细胞则具有拮抗作用。     

木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制

目的 研究木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制.方法 Eca109细胞经不同浓度木犀草苷处理后,MTT法检测Eca109细胞增殖;倒置显微镜观察Eca109细胞形态的变化;流式细胞术检测Eca109细胞周期变化及细胞凋亡情况;RT-PCR检测Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达.结果 MTT实验表明,木犀草苷80、120、160、200、240 μmol/L对Eca109细胞均有抑制作用,且与浓度相关.木犀草苷可引起Eca109细胞形态改变、体积缩小,并与周围细胞脱离,浓度为240 μmol/L时使细胞呈出芽状,有的细胞伸出多个伪足样突起;浓度为160、240 μmol/L时,可将细胞阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡;浓度为240 μmol/L并处理Eca109细胞48h后,使Eca109细胞cyclinD1、survivin和c-myc基因表达低于对照组(P＜0.05).结论 木犀草苷对食管鳞状癌Eca109细胞的生长有显著抑制作用,其通过改变细胞周期、诱导细胞凋亡及抑制相关基因的表达发挥抗肿瘤作用.     

P38在顺铂诱导食管癌Eca109细胞凋亡中的作用

目的探讨应激活化的P38MAPK在顺铂诱导食管癌Eca109细胞凋亡中的作用。方法实验分三组:10μg/mL顺铂处理组、SB203580孵育细胞2h后,再加顺铂处理组及对照组。应用流式细胞仪技术检测各组细胞凋亡率;采用免疫组化技术检测P38MAPK的磷酸化水平。结果顺铂处理组、SB203580加顺铂处理组及对照组的细胞凋亡率分别为17·1%、7·8%和3·1%。二处理组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0·01);与顺铂处理组相比,SB203580加顺铂处理组凋亡率明显下降(P<0·01)。顺铂处理组P38MAPK磷酸化水平明显高于对照组(P<0·01)。结论P38MAPK参与了顺铂诱导食管癌Eca109细胞凋亡,并在其中起促进凋亡的作用。