糜蛋白酶mRNA水平及其酶活性与糖尿病仓鼠心肌病变的关系

目的 对糖尿病仓鼠模型心肌中糜蛋白酶(chymase) mRNA水平及其酶活性进行检测,观察chymase mRNA水平、酶活性与心肌局部血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平的关系.方法 腹腔注射链脲菌素诱导糖尿病仓鼠模型,电镜观察心肌超微结构,链霉素-亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC)检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测chymase mRNA水平变化,放射免疫分析法测定心肌chymase和血管紧张素转换酶(ACE)活性、Ang Ⅱ含量.结果 (1)糖尿病组仓鼠心肌细胞线粒体肿胀明显,局部破裂,肌丝广泛溶解,核肿胀,Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积、心肌细胞凋亡明显;(2)糖尿病组与对照组比较,心肌chyamse活性明显升高,分别为(0.88±0.07) U/mg组织和(0.54±0.04)U/mg组织(P＜0.01),而ACE活性差异无统计学意义;Ang Ⅱ含量明显升高,分别为(95.8±16.0)pg/mg组织和(51.1±20.8)pg/mg组织(P＜0.01);(3)糖尿病组心肌chyamse mRNA表达水平为0.810±0.026,较对照组0.490±0.087显著升高(P＜0.01).结论 糖尿病仓鼠病变心肌的chymase mRNA表达水平和酶活性明显升高,并伴随心肌局部Ang Ⅱ含量的升高.     

注射用糜蛋白酶中组胺类物质检查方法学研究

【摘要】目的：建立注射用糜蛋白酶中组胺类物质检查方法。 方法：采用组胺检查法对注射用糜蛋白酶中组胺类物质进行限度检查方法学研究,并与现行猫法进行比较研究。结果：加标回收率86%～117%;豚鼠法方法特异性(真阴性率)100%,灵敏度(真阳性率)70%,猫法方法特异性100%,灵敏度70%;四个实验室室内重复性分别为82%、75%、83%、81%;实验室间重复性为92.9%～96.4%.结论：该方法准确与猫法相当、重复性好,可作为降压物质检查法的替代方法。     

不同药物吸入治疗对新生儿肺炎的疗效评价

目的探讨沐舒坦和糜蛋白酶不同雾化方式治疗新生儿肺炎的临床疗效及安全性。方法将我院2011年7月至2013年8月明确诊断的78例新生儿肺炎患儿按照随机数字表法随机分为治疗组和对照组,每组39例。两组患儿在综合治疗基础上,对照组应用糜蛋白酶雾化,治疗组予沐舒坦压缩雾化,观察两组治疗疗效。结果与治疗后24、48、72h比较,治疗组患儿PaO2较对照组明显上升,PaCO2较对照组明显下降,氧合指数较对照组升高明显改善,差异均有统计学意义（P〈0．01）。治疗组在症状缓解、体征消失时间和住院天数较对照组缩短,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;治疗组中显效25例,有效9例,无效5例,有效率为87．2％。对照组中显效14例,有效6例,无效19例,有效率为51．3％,两组间差异有统计学意义（P〈0．01）。两组在治疗过程中均未发现相关的药物不良反应。结论雾化吸入治疗新生儿肺炎沐舒坦疗效优于糜蛋白酶,缩短疗程,值得推广应用。     

药物预防甲状腺手术切口粘连的探讨

目的 探讨糜蛋白酶、玻璃酸钠对甲状腺手术切口粘连的预防作用.方法 将甲状腺手术患者随机分成糜蛋白酶组、玻璃酸钠组、生理盐水组及对照组,术后2、4、6、1 2个月后进行随访观察切口粘连情况.结果 前三组与对照组的粘连发生率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 药物干预可以减少甲状腺手术切口粘连.     

Randomized controlled study of digestive enzyme activity following trophic feeding

A randomized, controlled, prospective study of 80 preterm infants of birthweight less than 1750 g requiring ventilatory support was performed. While ventilatory support was required group TF (39 infants) received trophic feeding (0.5-1 ml h -1 ) along with parenteral nutrition, whereas group C (41 infants) received parenteral nutrition alone. When ventilatory support was no longer required milk feeds were started in group C and then increased in both groups until full milk feeds were established. The ratio of lactase to sucrase activity (L:S ratio) was measured in aspirated proximal intestinal fluid on 3 occasions: immediately after ventilatory support was withdrawn (T0), 7 days later (T7) and 14 days later (T14). On the same 3 occasions faecal chymotrypsin activity was measured. The mean difference (95% confidence interval) L:S ratio was significantly higher in group TF at both T0 and T14, 1.8 (0.03, 3.57) and 0.78 (0.2, 1.35) U l -1 , respectively. There was no significant difference in faecal chymotrypsin concentration.

Conclusion : Trophic feeding alters relative intestinal disaccharidase activity, probably by inducing lactase production, but has no effect on pancreatic chymotrypsin activity.     

肥大细胞参与蛋白负荷肾病大鼠肾间质的纤维化

目的 观察肥大细胞（MC）在蛋白负荷肾病肾间质纤维化大鼠模型肾脏的分布并探讨其与蛋白尿所致肾间质纤维化、肾间质转化生长因子β1（TGF-β1）及干细胞因子（SCF）表达的关系。 方法 60只SD大鼠行右肾全切术后，模型组腹腔注射牛血清白蛋白（BSA）复制蛋白负荷肾病大鼠的模型（n=30），对照组腹腔注射生理盐水（n=30），分别于模型成功后第3、7和11周，随机处死10只大鼠，检测尿蛋白和血生化指标。采用甲苯胺蓝组织化学和糜蛋白酶（chymase）免疫组化的方法观察肥大细胞在肾脏的浸润。采用免疫组化法检测TGF-β1、SCF在肾组织的表达，并分析它们之间及与蛋白尿所致肾间质纤维化的相关性。 结果 模型组大鼠随着BSA注射量的增加, 尿蛋白量（24 h）增加，第7周达到高峰[(199.1±98.4) mg], 以后开始下降，第11周为(133.7±67.8) mg。在模型组大鼠的肾皮质、髓质均可见甲苯胺蓝染色阳性及chymase阳性的肥大细胞, 以间质纤维化区域最为多见。随着肾间质纤维化的加重, 肥大细胞数目增多，各时间点模型组大鼠与对照组差异均有统计学意义（P < 0.05）。TGF-β1及SCF主要在肾小管、间质、部分系膜细胞及壁层上皮细胞表达，随时间的延长表达量增加，各时间点模型组大鼠与对照组差异均有统计学意义（P < 0.05）。肥大细胞的数量与肾间质纤维化的程度、TGF-β1和SCF的表达均呈正相关(r分别为0.722、0.521、0.916, 均P < 0.01)。 结论 肥大细胞浸润与蛋白负荷肾病大鼠肾间质纤维化程度密切相关。蛋白尿可能通过SCF介导肥大细胞到肾脏，释放chymase，促进肾组织TGF-β1表达，介导蛋白尿所致的肾间质纤维化。     

Influence of ethanol on survival of acinar cells isolated from rat pancreas

The role of ethanol in precipitating acute pancreatitis has been studied in model experiments. The influence of ethanol on the survival of isolated pancreatic acinar cells (PAC) and a possible coaction with noxious agents (such as trypsin, chymotrypsin, temporary anoxia, and partial uncoupling of the oxidative phosphorylation by 2,4-dinitrophenol [DNP]) has been investigated. Isolated PACs withstood ethanol levels up to 180 mM without significant decrease of viability within 4 h incubation at 37°C. A 90-min deprivation of oxygen was widely tolerated also. However, with a combination of both ethanol application and oxygen deprivation, a clearly forced cell damage was observed as was true with a combination of ethanol and chymotrypsin. The action of DNP or of extracellular trypsin on cell survival was not amplified by the addition of ethanol (180 mM). This study reveals two possible sites of action at which ethanol may contribute to the pathogenesis of acute pancreatitis.     

鼠抗人肥大细胞类糜蛋白酶N端片段抗体的制备与鉴定

目的:在大肠杆菌中表达人肥大细胞类糜蛋白酶(hMCC)N端片段(hMCC-N),并制备其鼠源性多克隆抗体。方法:通过PCR法扩增hMCC-N端基因片段,将其克隆至pMAL-c2x原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Amylose树脂亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠抗hMCC-N端片段多克隆抗体,并以间接ELISA测定抗体效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果:PCR扩增得到360bp的hMCC-N端基因片段,克隆入表达载体pMAL-c2x,构建了与标签蛋白麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体pMAL-c2x/hMCC-N,融合蛋白在大肠杆菌中得到了稳定表达,并经亲和层析,纯化出可溶性的重组蛋白,用其免疫小鼠,获取了鼠抗hMCC-N端片段的多克隆抗体,ELISA结果显示效价达1∶12800,Westernblot分析表明该抗体能特异结合hMCC。结论:成功地制备了效价高、特异性较强鼠抗hMCC-N端片段抗体,为进一步建立hMCC的ELISA检测方法打下了良好的基础。     

抑制糜酶活性对动脉粥样硬化早期仓鼠腹主动脉血流动力学的影响

目的 探讨抑制糜酶活性对仓鼠动脉粥样硬化病变腹主动脉血流动力学的影响。方法 42只8周龄雄性叙利亚金黄仓鼠随机分为A、B、C三组，各14只。A组为高脂对照组，B组采用高脂喂养＋曲尼司特灌胃，C组为正常对照组。分别在第0周和第12周末进行血脂检测，并应用多普勒超声检测各组仓鼠腹主动脉收缩期峰值血流速度（SV）、舒张末期血流速度（DV）、平均血流速度（MV）、搏动指数（PI）和阻力指数（RI）。第12周末处死仓鼠，采用体外灌流技术检测腹主动脉的糜酶活性及血管紧张素转换酶（ACE）活性。结果 12周后，A、B两组与C组比较，总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白均显著增高（P〈0.01）。多普勒超声检测显示，B组较A组SV、MV、PI和RI显著降低（P〈0．01），DV显著增高（P〈0．05）。A、B两组腹主动脉糜酶活性均较C组显著增高（分别升高63％、20％，P〈0．01），B组糜酶活性与A组比较显著降低26％（P〈0．01），ACE活性轻度增高，但组间比较差异无统计学意义（P〉（0．05）。糜酶活性与血流动力学指标SV、PI和RI呈正相关（r分别为0．47、0．60和0．61，P〈0．01）。结论 抑制糜酶活性可显著改善仓鼠动脉粥样硬化病变腹主动脉的血流动力学水平，进而延缓动脉粥样硬化病变的发展。     

沐舒坦联合雾化吸入对支气管肺炎的临床疗效

目的:分析沐舒坦联合雾化吸痰是否改善婴儿支气管肺炎预后。方法:将小婴儿支气管肺炎患儿80例随机分为治疗组(常规治疗+氨溴索静脉滴注联合雾化吸入)和对照组(常规治疗),分析对比治疗后两组患儿临床症状、体征变化及消失时间、用药后的不良反应及肺不张发生率。结果:治疗组应用沐舒坦静脉滴注联合雾化吸入治疗,在口吐白沫消失时间、体温降至正常时间、肺部体征消失时间以及住院疗程均较对照组明显缩短。结论:氨溴索静脉滴注联合雾化吸入治疗小儿支气管肺炎具有良好疗效,可减少并发症发生率,值得临床推广。