一种新的质粒介导的IMI-1型碳青霉烯酶

目的　确立亚胺培南耐药阴沟肠杆菌对亚胺培南的耐药机制。方法　采用Etest测定抗菌药物最低抑菌浓度 (MIC) ,通过等电点聚焦电泳 (IEF)、三维试验、接合试验、Southern杂交、聚合酶链反应 (PCR)、克隆测序对酶的活性及编码基因进行研究。结果　阴沟肠杆菌产碳青霉烯酶 ,等电点为 8.1。该酶能被克拉维酸抑制 ,不被氯唑西林、EDTA抑制 ,存在 2f类酶的某些特性 ,其耐药基因位于 80kb左右的质粒上。克隆测序显示与染色体介导的IMI 1有 99%的同源性。结论　阴沟肠杆菌对亚胺培南耐药是由一种新的质粒介导的与染色体介导的IMI 1类似的碳青霉烯酶所致。     

First description of blaNDM-1, blaOXA-48, blaOXA-181 producing Enterobacteriaceae strains in Romania

We report the first isolation and characterization of several Enterobacteriaceae strains harboring bla_NDM-1, bla_OXA-48 and/or bla_OXA-181 genes in a Romanian emergency teaching hospital. Between January 2010 and September 2012 nine carbapenemase-producing Enterobacteriaceae strains were identified. The bla_NDM-1 gene was present in two Enterobacter cloacae strains, an Escherichia coli and two Klebsiella pneumoniae strains. One of these K. pneumoniae strains also harbored the bla_OXA-181 gene. Three other K. pneumoniae strains and one Serratia marcescens carried bla_OXA-48.     

海南省某医院103株鲍曼不动杆菌复合群-内酰胺类耐药性与碳青霉烯酶携带情况分析

目的 鲍曼不动杆菌复合群细菌是临床可造成感染的重要条件性致病菌,本研究旨在调查和分析我国海南省临床来源鲍曼不动杆菌复合群细菌对常用-内酰胺类药物的耐药性及菌株碳青霉烯酶携带情况,探讨其耐药流行性特点。方法 采用微量肉汤稀释法对103株采集自2012-2013年海南省三亚市人民医院的非重复鲍曼不动杆菌复合群细菌进行7种抗菌药物的药敏检测;应用聚合酶链反应(PCR)对收集的鲍曼不动杆菌复合群细菌进行9种碳青霉烯酶编码基因的筛查。结果 103株鲍曼不动杆菌复合群细菌对哌拉西林、头孢他啶、头孢噻肟的耐药率较高(接近50%),对头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为40%,对亚胺培南和美罗培南的耐药率均在20%左右;PCR检测显示有38株携带blaOXA-58基因,62株blaOXA-66基因,其中25株同时携带有这两种基因;其余7种碳青霉烯酶编码基因筛查结果为阴性。结论 本研究中鲍曼不动杆菌复合群细菌对-内酰胺类药物耐药性较高,菌株携带的blaOXA-58和blaOXA-66基因编码的碳青霉烯酶对菌株的耐药表型有一定贡献意义,但仍有其他耐药机制参与到碳青霉烯酶耐药表型的贡献中。     

25株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药机制研究

目的:了解临床分离的耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药谱特征、同源性及碳青霉烯酶的产生状况。方法:采用PHOENIX100自动化细菌鉴定药敏系统及纸片扩散法进行药敏试验;基因外重复回文序列PCR(REP-PCR)法分析其基因同源性;聚合酶链反应(PCR)检测β内酰胺酶基因,并对扩增出的碳青霉烯酶基因进行序列分析;对整合子基因进行PCR检测。等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点。碱裂解法提取质粒。结果:2003年1月～2005年12月我院共分离到30株碳青霉烯类中介或耐药的鲍曼不动杆菌,其中儿科ICU病房9株,外科ICU病房12株。菌株表现为多重耐药,但儿科ICU与其他病房分离株的耐药谱有差异。对存活的非重复的25株菌进行检测,REP-PCR图谱分为A、B、C、D4个基因型,A型7株集中在儿科ICU,16株属于B型,C型和D型各1株。PCR检出10株菌携带OXA-23基因,其中包括7株儿科ICU的碳青霉烯类耐药菌,而外科ICU分离的耐药菌株不具有OXA-23基因。所有菌株均未能检出OXA-24、IMP及VIM基因。有20株携带PER-1型酶基因。22株细菌检测出Ⅰ型整合子基因结构(大小约180～3500bp)。结论:本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致,儿科ICU分离的菌株对碳青霉烯类耐药的主要机制为产生OXA-23型酶,外科ICU分离的菌株对碳青霉烯类耐药的主要机制则可能为膜通透性降低的原因。     

产碳青霉烯酶KPC-2肺炎克雷伯菌局部流行

目的 了解我院对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肺炎克雷伯茵的耐药机制及其同源性分析.方法 收集2006年3月～9月我院对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肺炎克雷伯菌共10株,采用Etest法测定细菌对各抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);通过等电聚焦电泳(IEF)检测所产生的β-内酰胺酶.并通过聚合酶链反应(PCR)及序列分析确定其基因型;接合试验和Southern杂交进行基因定位;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对这些菌株进行同源性分析.结果 10株肺炎克雷伯菌均产KPC-2(pl 6.7)、DHA-1(pl 7.8)和SHV-28(pl 7.6),其中3株同时产TEM-1广谱酶(pl 5.4).blaKPC-2位于60kb左右可接合性质粒上.10株菌株对β-内酰胺类抗生素呈多重耐药,但对多黏菌素,替加环素,复方SMZ敏感.PFGE证实为同一克隆株的传播.结论 质粒介导的KPC-2造成肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性下降.并在我院短暂流行;携带KPC-2基因的临床菌株同时携带多种耐药基因.     

2009-2011年肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶和碳青霉烯酶检测及耐药性分析

近年来,由于抗菌药物的广泛使用,尤其是第三代头孢菌素及碳青霉烯类抗生素的不合理使用,细菌耐药现象越来越严重,临床分离的多重耐药菌株日益增多,给实验室诊断和抗感染治疗带来极大困难。肠杆菌科细菌耐药的主要机制是产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和碳青霉烯酶,可以导致多重耐药的发生,因此有必要增加此类酶的检测,     

肺炎克雷伯菌介导致碳青霉烯类耐药的基因检测研究

目的：分析碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因型。方法分离碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌14株,分别采用E-test实验、改良的Hodge试验、脉冲场琼脂糖凝胶电泳分型及多位点序列分型测定其耐药性、耐药基因型及主要流行序列型。结果14株碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌对常用碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南呈中高度耐药,最低抑菌浓度（MIC）分别为8～64 mg/L、16～128 mg/L;对常见头孢类抗生素头孢哌酮、头孢西丁、头孢他啶和头孢吡肟均呈高度耐药,MIC 32～256 mg/L;对喹诺酮类药物环丙沙星呈中度耐药,MIC 3～32 mg/L;对氨基糖苷类抗生素阿米卡星不稳定,MIC〈0.12～256 mg/L。本组碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型检测均为阳性,基因型属KPC-2;脉冲电泳分型显示A克隆2株、B克隆9株、C克隆3株,多位点序列分型显示ST119株、ST154株、ST4391株,分型结果基本一致。结论碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌对部分其他种类的抗生素亦有较强耐药性,KPC-2型碳青霉烯酶是本院肺炎克雷伯菌产生青霉烯类耐药性的主要原因,主要流行克隆型和序列型分别为B型、ST11型。