Ad5F35-LMP2重组腺病毒免疫效果的研究

目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒(Ad5F35-LMP2),免疫恒河猴的特异性细胞和体液免疫的效果。方法分别使用高剂量(1.5×1010TCID50/只)、中剂量(1.5×109TCID50/只)、低剂量(1.5×108TCID50/只)Ad5F35-LMP2重组腺病毒,同时设对照组(PBS4.0ml/只)。肌内注射免疫恒河猴,每个月一次,共免疫3次,第0、4、8、12周时使用Elispot方法检测猴外周血EBV-LMP2细胞毒性T细胞应答,同时应用免疫酶方法检测血清中LMP2抗体。结果3个剂量Ad5F35-LMP2腺病毒免疫恒河猴均可以诱导出有效的细胞免疫应答及一定的抗体应答,免疫应答水平的高低与病毒剂量的高低有一定的关系,较高剂量产生的细胞及体液免疫应答水平比低剂量的高。结论Ad5F35-LMP2非复制型重组腺病毒疫苗可以有效的诱导恒河猴产生EBV-LMP2特异性细胞和体液免疫反应。     

放射诱导经Egr-1启动子调控的腺病毒介导CDglyTK基因的肿瘤靶向表达

目的：构建由Egr-1基因启动子驱动CDglyTK基因表达的腺病毒载体,通过放射诱导调控CDglyTK基因的肿瘤靶向表达,用于肝癌的基因－放射治疗,方法：利用细菌内高效同源重组法,制备腺病毒载体AdEger-CD/TK.MM45T.Li肝癌细胞感染AdEger-CD/TK后,体外观察γ射线照射诱导CDglyTK基因表达及在前药5－FC、GCV存在的条件下钉对存活率的变化。利用荷瘤小鼠肝癌模型观察不同处理的抑瘤效应。结果：体外实验结果显示,γ射线照射可诱导CDglyTK基因在MM45T.Li肿瘤细胞内的表达,并呈剂量依赖性;显著增强细胞对前药5－FC、GCV的敏感性（P＜0．01）;当5－FC和GCV同时存在时具有明显的协同效应。体内抗肿瘤实验结果提示,与单纯肿瘤局部照射（TLI）、瘤内注射AdEger-CD/TK＋腹腔注射5－FC＋GCVD土产且相比,瘤内注射AdEger-CD/TK＋腹腔注射5－FC＋GCV合并TLI组的抗瘤效果最好（P＜0．01）,并可使30％的肿瘤完全消退,且未见全身毒性反应的增加,结论：利用放射调控CDglyTK基因的肿瘤靶向表达,是一种安全、有效的肿瘤基因治疗新策略。     

腺病毒介导的p53基因对喉癌细胞生长的抑制作用

目的探索ｐ５３基因在喉癌基因治疗方面的可行性。方法以人喉癌细胞系Ｈｅｐ－２为实验对象,将载有人野生型ｐ５３ｃＤＮＡ并含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的重组腺病毒（Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３）感染Ｈｅｐ－２细胞及肿瘤组织,体内外实验观察Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３对Ｈｅｐ－２细胞生长的影响。结果当Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３在１００ＭＯＩ效靶比时,全部Ｈｅｐ－２细胞得到转染。感染２天后ｐ５３蛋白表达达到高峰,Ｈｅｐ－２生长受到明显的抑制。Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３感染Ｈｅｐ－２细胞在裸鼠中失去致瘤性。瘤内注射Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３后,荷瘤裸鼠的肿瘤体积明显减小。结论Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３转导野生型ｐ５３基因可能是一种有效的喉癌基因治疗途径。     

内耳转基因表达的实验研究

目的　了解内耳转基因表达的可行性。方法　将人复制缺陷重组腺病毒基因(Adenoviruses ,Ad ,含大肠杆菌 β 半乳糖苷酶基因LacZ基因 ,Ad5 LacZ)经豚鼠耳蜗蜗窗接种到鼓阶外淋巴后 ,观察在不同时间、不同内耳组织中LacZ基因的表达 (X Gal染色 )及Ad对豚鼠声反应 (听性脑干反应 )、听毛细胞 (扫描电镜 )的影响。结果　Ad介导的LacZ基因在内耳组织中的表达至少可持续 4周 ,其中在螺旋神经节细胞表达稳定 ,Corti器、前庭囊斑、壶腹嵴的毛细胞等也有较强的表达。Ad未对豚鼠声反应 (≤ 80 0 0Hz)造成明显的损伤 ,除耳蜗底回外 ,其余各回未见明显的毛细胞缺失。结论　腺病毒载体可成功地将LacZ基因转导致豚鼠内耳组织中 ,并且未对豚鼠声反应 (低、中频 )及听毛细胞造成明显损伤 ,这对未来的内耳基因治疗研究可能具有重要的参考价值。     

痘病毒载体艾滋病疫苗研究进展

艾滋病是一种传染性强、传播速度快、传播范围广、病死率高的传染病.抗逆转录病毒药物可以抑制感染者体内病毒的复制,但不能将其完全清除.研究显示,以痘病毒为载体,经过局部基因修饰后研制的预防性艾滋病疫苗具有较好安全性和一定免疫原性.此文对痘病毒载体艾滋病疫苗的研究进展进行综述.     

慢性乙型肝炎和原发性肝癌患者体内人腺病毒5型、26型及黑猩猩腺病毒68型中和抗体的流行率

目的:调查慢性乙型病毒性肝炎(CHB)和原发性肝癌(PLC)患者体内人腺病毒5型(Ad Hu5)、26型(Ad Hu26)和黑猩猩腺病毒68型(Ad C68)中和抗体的流行率,为这2种疾病开发安全有效的生物治疗载体提供依据。方法:我们收集196份CHB患者的血清和193份PLC患者的血清,通过腺病毒中和实验检测血清中Ad Hu5、Ad Hu26和Ad C68的中和抗体。结果:在CHB患者中Ad Hu5、Ad Hu26和Ad C68中和抗体的阳性率分别为84.7%、58.2%及39.8%;在PLC患者中Ad Hu5、Ad Hu26和Ad C68中和抗体的阳性率分别为75.1%、66.8%及32.1%。结论:本次实验显示3种腺病毒中和抗体的流行率和抗体滴度都以Ad C68的最低,故其作为CHB和PLC的生物治疗载体较Ad Hu5与Ad Hu26具有优势。     

北京地区急性呼吸道感染住院患儿腺病毒感染临床特征

目的比较北京地区急性呼吸道感染住院患儿中不同型别腺病毒感染临床特征, 明确腺病毒分型的临床必要性。方法采用横断面研究, 纳入2017年11月至2019年10月在首都儿科研究所附属儿童医院因急性呼吸道感染住院的9 022例次患儿呼吸道标本, 经直接免疫荧光(DFA)和(或)核酸检测确定为腺病毒阳性者进行五邻体、六邻体及纤维蛋白基因扩增并测序, 构建系统进化树区分腺病毒型别。收集并分析腺病毒主要型别感染患儿的实验室检查、影像学资料等临床资料, 采用t检验、U检验、χ2检验进行型别间临床特征差异的统计学分析。结果 9 022例次急性呼吸道感染住院患儿中腺病毒阳性检出率为4.34%(392例次), 成功分型205例, 其中男131例、女74例, 年龄22.6(6.7, 52.5)月龄, 3型腺病毒阳性102例(49.76%), 7型86例(41.95%), 1、2、4、6、14、21型共17例。7型与3型腺病毒感染患儿临床特征比较, 在出现喘息[10例(11.63%)比25例(24.51%)]、白细胞计数>15×109/L[4例(4.65%)比14例(13.73%)]、白细胞计数<...     

The adenovirus E4orf6 E3 ubiquitin ligase complex assembles in a novel fashion

The human adenovirus E4orf6 and E1B55K proteins are part of an E3 ubiquitin ligase complex that degrades p53, Mre11 and probably other cellular polypeptides. Our group has demonstrated previously that this complex contains Cul5, Rbx1 and Elongin B and C and is formed through interactions of these cellular proteins with E4orf6. Although this E4orf6 complex is similar in many ways to the cellular SCF and VBC E3 ligase complexes, our previous work indicated that unlike all known Cullin-containing complexes, E4orf6 contains two functional BC-box motifs that permit interactions with Elongin B and C. Here we show that a third BC-box exists that also appears to be fully functional. In addition, we attempted to identify a region in E4orf6 responsible for the specific selection of Cul5, which we show herein by knocking down Cul5 protein levels, is essential for p53 degradation. One sequence within E4orf6 shares limited homology with the 'Cul5 box motif', a recently identified sequence found to be responsible for selection of Cul5 in some cellular Cullin-containing E3 ligase complexes; however, genetic analysis indicated that this motif is not involved in Cullin binding or p53 degradation. Thus E4orf6 appears to utilize a different mechanism for Cul5 selection, and, both in terms of interactions with Elongin B and C and with Cul5, assembles the E3 ligase complex in a highly novel fashion.     

胞嘧啶转氨酶基因联合5-氟胞嘧啶对喉癌细胞的抑制作用

目的 研究腺病毒载体（Ad）介导的胞嘧啶转氨酶（CD）基因转移联合5-氟胞嘧啶（5-FC）对喉鳞状细胞癌（简称喉癌）细胞株Hep-2的体外作用.方法 将构建的含CD基因的重组腺病毒载体在293细胞中扩增,体外感染喉癌细胞株Hep-2,并给予不同浓度前药5-FC进行肿瘤细胞体外杀伤效果观察.结果 用制备的Ad-CD液感染Hep-2细胞,加入不同浓度的前药5-FC,肿瘤细胞生长受到不同程度的抑制.结论 Ad介导的CD基因转染效果强,可直接杀伤喉癌细胞Hep-2.     

CⅡTA基因调控胰腺肿瘤细胞MHCⅡ类分子表达的体外研究

目的 研究CⅡTA基因对人胰腺癌CaPanC-2细胞和小鼠胰腺癌PanC-02细胞主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子表达的影响.方法 将携带CⅢA基因的腺病毒(Ad-CⅡTA)分别感染人胰腺癌CaPanC-2细胞和小鼠胰腺癌PanC-02细胞,培养24、48、72 h.实时PCR法检测感染细胞CⅡTA mRNA的表达,蛋白质印迹法检测CⅡTA蛋白表达,流式细胞仪检测 MHCⅡ类分子阳性表达细胞百分比.结果 CaPanC-2细胞感染后24、48、72 h的CⅡTA mRNA表达量分别为对照组的(16769±6455)、(261568±348850)和(834816 ±97783)倍(P<0.05);PanC-02细胞为对照组的(548546±87755)、(1242684±624888)和(1401647±726145)倍(P<0.05).CaPanC-2和PanC-02细胞均不表达CⅡTA蛋白,感染后48 h,CaPanC-2、PanC-02细胞CⅢTA蛋白表达量为0.746±0.499和0.631±0.244.感染24、48、72 h组CaPanC-2细胞表达MHCⅡ类分子的细胞百分比分别为(8.1±0.3)%、(18.9±0.3)%、(78.5±0.9)%,显著高于对照组的(7.0±0.1)%(P<0.01);PanC-02细胞表达MHCⅡ类分子的细胞百分比分别为(5.1±0.2)%、(37.3 ±2.0)%、(68.8±2.2)%,显著高于对照组的(2.2±0.2)%(P<0.01).结论 Ad-CⅡTA体外感染胰腺肿瘤细胞可促进CⅡTA基因的表达,从而促进细胞表面MHC Ⅱ类分子的表达.