TRAIL对原代卵巢癌细胞增殖、凋亡及核 因子κB的影响

 目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing- ligand; TRAIL）对原代卵巢癌细胞生长的抑制和诱导肿瘤细胞凋亡效应,以及细胞核因子κB(NF κＢ)激活和转运的影响。方法 来源于12例病人原代卵巢癌细胞,给予TRAIL 0、5、10、20、50、100μg/L分别作用24、48、72和96h,运用MTT比色法检测原代卵巢癌细胞生长、增殖情况;细胞免疫荧光法检测原代卵巢癌细胞凋亡和细胞内NF κB激活－转运情况。结果 TRAIL对原代卵巢癌细胞的生长抑制呈剂量依赖性,浓度大于20μg/L时抑制率增辐减慢;浓度相同时对癌细胞的抑制呈时间依赖性,72h后抑制率上升减缓;肿瘤细胞凋亡率随TRAIL作用时间延长而增加,5μg/L 24h、96h凋亡率分别是（28±1.18）%、（55±4.12）%;肿瘤细胞凋亡率也呈剂量依赖性;TRAIL作用后原代卵巢癌细胞质和胞核中NF κB表达增加。结论 TRAIL抑制原代卵巢癌细胞的增殖和生长,并诱导癌细胞的凋亡;激活癌细胞质中NF κB向细胞核内转运。     

益康唑体外净化后自体骨髓移植治疗白血病小鼠的实验研究

 目的　建立一个小鼠急性髓系白血病（AML）净化后骨髓移植的模型并探讨益康唑（Econazole, Ec）药物净化的效果。方法　利用小鼠P815 AML细胞转染新霉素抗性基因，即NeoR基因后与小鼠骨髓细胞混合，体外短期培养净化；通过移植后血液系统恢复，白血病微小残留病变和小鼠的存活进行评估。结果　接受放射治疗后经尾静脉注射P815/NeoR细胞而未经净化的小鼠100 %可检测到白血病细胞；Ec体外净化后骨髓移植小鼠造血恢复没有延迟，而残留白血病细胞阳性率明显降低且小鼠的总生存明显改善。结论　实验所设计的P815/NeoR小鼠AML净化后骨髓移植模型简单易行、重复性好；Ec可用于AML的净化后骨髓移植。     

急性髓细胞性白血病患者微小残留病流式细胞术检测的临床意义

 目的　探讨流式细胞术检测急性髓细胞性白血病（AML）微小残留病（MRD）的临床意义。方法　对21例生存24～128个月成年人AML完全缓解（CR）患者,采用双色直接免疫荧光标记及多参数流式细胞术每隔3～12个月检测一次外周血中MRD,同时检测骨髓细胞形态的变化。结果　21例动态检测MRD水平>10-4患者复发率为80.0 %,MRD水平≤10-4患者复发率为18.1 %。21例随访24 ~ 128个月,复发10例,其中有3例先髓外复发,未复发有11例。10例MRD水平>10-4患者24个月EFS率为30.0 %;11例MRD水平≤10-4患者为90.9 %。MRD水平≤10-4患者中复发的2例,分别在MRD水平升为10-2后3个月、7个月时出现骨髓复发。结论　MRD水平为10-3或以上的患者预后较差,易复发。MRD水平长时间波动在10-3～10-4间,即使骨髓无复发,也要警惕髓外复发。MRD水平≤10-4者生存期长,预后较好。但在生存期超过5年停化疗后,仍应动态监测MRD水平,尤其当MRD水平升至10-2水平时应警防复发,甚至考虑采用干预治疗。     

运用三色ＦＩＳＨ技术确定自然流产夫妇染色体微小区域倒位

摘要： 【目的】 对２例婚后妻子连续２次流产伴２１号染色体结构改变病例进行多探针荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）,探讨ＦＩＳＨ技术在临床诊断微小区域染色体结构异常的应用价值。【方法】通过染色体常规Ｇ 显带技术初步确定染色体结构异常类型及染色体断裂的区带位置,然后挑选位于２１号染色体长臂位点特异性ＢＡＣ克隆,缺口平移法将其标记为探针,与２１号染色体长臂末端的商品化探针混合,进行三色ＦＩＳＨ。【结果】ＦＩＳＨ结果排除了涉及其它染色体结构异常的可能,确定这２例均为２１号染色体长臂微小区段的臂内倒位,这是首次关于２１号染色体臂内倒位导致自发流产病例的报道。【结论】２１号染色体臂内倒位与自然流产相关;多色ＦＩＳＨ 技术在诊断和确定微小区域染色体结构异常中有非常重要的作用和应用价值。     

血浆同型半胱氨酸和叶酸及ＭＴＨＦＲ基因多态性与早产

【目的】 探讨孕妇血浆同型半胱氨酸水平（Ｈｃｙ）、叶酸水平及ＭＴＨＦＲ基因多态性与早产的相关性。【方法】 采用病例对照研究,选取４４０例分娩孕妇为研究对象,其中早产临产孕妇（ｃａｓｅ ｇｒｏｕｐ）、同孕周健康孕妇（ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ）各２２０例。用高效液相色谱荧光检测法（ＨＰＬＣ－ＦＤ）检测两组孕妇血浆同型半胱氨酸水平和叶酸水平差异;１４Ｃ 放射法测定两组孕妇ＭＴＨＦＲ的活性;Ｔａｑｍａｎ－ＭＧＢ技术检测两组孕妇ＭＴＨＦＲ基因的５个ＳＮＰ分型差异。【结果】 早产临产孕妇的血浆Ｈｃｙ 水平（μｍｏｌ／Ｌ）明显高于同孕周健康孕妇的血浆Ｈｃｙ水平 （７．５６ ± ２．９７ ｖｓ． ５．９６ ± ２．５４, Ｐ ＝ ０．０１５）,而早产临产孕妇的血浆叶酸水平（μｍｏｌ／Ｌ）明显低于同孕周健康孕妇血浆叶酸水平（１６．２１ ± ２．９１ ｖｓ． １８．５３ ± ３．４４, Ｐ ＝ ０．００２）。早产临产孕妇ＭＴＨＦＲ的活性（ｎｍｏｌ·ｍｇ－１·ｈ－１）明显低于同孕周健康孕妇ＭＴＨＦＲ的活性（１３．３３ ± ３．１６ ｖｓ． ２６．８６ ± ５．６３, Ｐ ＝ ０．０００）。在ＭＴＨＦＲ基因中ｒｓ１８０１１３１和ｒｓ１８０１１３３在早产临产孕妇组与同孕周健康孕妇组的基因型分布差异有统计学意义（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 早产儿孕妇血浆同型半胱氨酸水平受叶酸水平影响,并与ＭＴＨＦＲ基因ＳＮＰ分型密切相关。     

骨转移螺旋断层调强放疗摆位误差分析

目的 分析骨转移患者在自带兆伏级CT（MVCT）影像引导的螺旋断层放疗中的摆位误差,为骨转移患者从临床靶体积（CTV）外放到计划靶体积（PTV）的距离提供临床依据.方法 对30例骨转移患者采用螺旋断层放疗,体网固定装置,每次治疗前均行MVCT扫描,将扫描所得MVCT图像与定位图像（KVCT）行靶区位置配准,分析患者左右（X）、头脚（Y）、腹背（Z）和横断面旋转（Roll）方向的误差值,根据公式Margin=2.5∑＋0.7σ计算出CTV-PTV外扩Margin值.结果 30例患者共行494次MVCT扫描,线性误差在X、Y、Z方向的误差（系统误差±随机误差）分别为（2.85±0.77）、（3.11±0.95）、（2.21±0.55）mm;在Roll方向的旋转误差为（0.55±0.24）..CTV-PTV外放边界在X、Y、Z三个方向Margin值分别为3.64、4.17、2.86 mm.结论 应用图像引导技术对骨转移的调强放疗可实时摆位纠正,减小了分次治疗的摆位误差,提高了治疗精度,对临床放疗具有指导价值.     

乙型肝炎病毒ＢＣＰ、ＰｒｅＣ和Ｃ区基因突变与母婴传播免疫失败的相关性

【目的】 探讨ＢＣＰ、ＰｒｅＣ和Ｃ区基因突变率及突变热点与ＨＢＶ母婴传播免疫失败的关系。【方法】 选取血清ＨＢｓＡｇ阳性且ＨＢＶ ＤＮＡ定量＞１０００Ｕ／ｍＬ的孕妇,以所分娩的新生儿是否发生免疫失败和孕妇血清ＨＢＶ ＤＮＡ定量水平将孕妇分为免疫失败组（１９例）和对照１组（免疫成功且ＨＢＶ－ＤＮＡ定量≥１．０ × １０７ Ｕ／ｍＬ,４８例）、对照２组（免疫成功且ＨＢＶ－ＤＮＡ定量＜１．０ × １０７ Ｕ／ｍＬ,３８例）。对３组孕妇血中ＨＢＶ进行ＢＣＰ／ＰｒｅＣ／Ｃ区基因ＰＣＲ扩增和测序,比较３组的突变率和突变位点的不同。【结果】免疫失败组与对照１组间ＨＢＶＤＮＡ定量相比,差异无统计学意义（Ｐ ＞ ０．０５）,但均大于对照２组（Ｐ ＜ ０．０５）;ＢＣＰ、ＰｒｅＣ、Ｃ区基因突变率,免疫失败组与对照１组间相比,差异无统计学意义（Ｐ＞ ０．０５）,但均低于对照２组（Ｐ ＜ ０．０５）。突变热点ｎｔＡ１７６２Ｔ、ｎｔＧ１７６４Ａ、ｎｔＧ１８９６Ａ在３组中的发生率差异无统计学意义（Ｐ ＞ ０．０５）。【结论】ＢＣＰ／ＰｒｅＣ／Ｃ区基因突变率与ＨＢＶ ＤＮＡ定量有关,但未见其与ＨＢＶ母婴传播免疫失败有明显相关性;也未见ｔＡ１７６２Ｔ、ｎｔＧ１７６４Ａ、ｎｔＧ１８９６Ａ等突变热点与免疫失败的相关性。     

乳腺叶状肿瘤48例形态学及免疫表型观察

目的 观察乳腺叶状肿瘤（PT）的病理形态学改变及免疫表型特征,探讨其在PT鉴别诊断及预后评估中的意义.方法 筛选乳腺PT病例48例,同时选取10例乳腺纤维腺瘤（FA）作为对照,对所有病例临床特征、病理形态学改变及随访结果进行回顾性分析,采用一抗CD34、CD10、CD117、p53及Ki-67进行免疫组织化学染色.结果 PT境界清楚,大体及镜下均呈典型的叶状结构,裂隙衬覆腺上皮及肌上皮分化良好,间质富于细胞伴过度生长,根据间质增生程度、细胞异型性、核分裂数及肿瘤边缘生长方式等指标将48例叶状肿瘤分为良性31例,交界性12例,恶性5例.恶性肿瘤中3例可见局灶性肿瘤坏死,1例间质出现脂肪肉瘤成分.免疫组织化学染色显示在良性、交界性及恶性组中CD34的中-强度表达率分别为93.5％、58.3％、0,三组间的差异有统计学意义（P＜0.05）;CD10呈灶性表达,阳性率分别为25.8％、83.3％、80.0％,良性PT组与交界和恶性间的差异有统计学意义（P＜0.05）;p53在各组间的表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）,CD117、Ki-67的表达在恶性PT中有较明显增高.随访5～141个月,48例患者经手术治疗后复发病例11例,双肺多发转移致死1例,其余10例经再次手术治疗后无再次复发.结论 病理形态学改变是乳腺PT诊断及分级的主要依据,免疫标志物在肿瘤中的表达对鉴别诊断及预后评估有一定辅助意义.选择合理的术式有助于减少复发和改善预后.     

基层医院一例孕11周拟诊Patau综合征疑难病历产前诊断分析及规范产前诊断思考

目的 通过查找 １ 例孕 １１ ＋３周阴道彩超发现胎儿畸形病因ꎬ明确患胎的超声表型与遗传学 之间的关系ꎬ告知该患胎母亲再次妊娠的方式选择、遗传学分析及产前诊断注意事项ꎮ 方法 经遗传学分 析ꎬ采用常规绒毛染色体核型、ＱＦ－ＰＣＲ 及单核苷酸多态微阵列芯片技术对患胎及其父母进行遗传学检 查ꎬ准确了解其携带的染色体不平衡易位的位置和大小ꎮ 在此基础上建议患胎母亲再次妊娠的方式选择、 遗传学分析及产前诊断注意事项ꎮ 结果 单核苷酸多态微阵列芯片提示患胎存在 ７ 号染色体和 １３ 号染 色体的不平衡易位ꎮ 染色体结构异常的发生来源于携带平衡易位的父亲ꎮ 经单核苷酸多态微阵列芯片检 测ꎬ患胎存在 ７ｑ３３ｑ３６.３ 区段检出 ２２.３１Ｍｂ 缺失ꎻ染色体 １３ｑ３１.１ｑ３４ 区段检出 ３２.７２Ｍｂ 重复ꎬ属于易位型 Ｐａｔａｕ 综合征ꎮ 患胎超声影像中存在全前脑畸形、独眼畸形较为特异性的 １３ 三体综合征表型ꎬ符合临床判 断ꎮ 经遗传咨询告知患者再次妊娠方式选择方式及优缺点及再次妊娠相关产前诊断注意事项ꎮ 结论 阴 道彩超检查可以提高孕早期胎儿结构异常检出率ꎻ重视遗传学分析ꎬ利用结构异常的患胎作为先证者进行 相关遗传学检测利于明确病因ꎬ单核苷酸多态微阵列芯片分析技术的结合有助于鉴别特殊标本染色体核 型异常ꎬ为实现精准医疗进行产前诊断遗传咨询提供了依据ꎮ     

外周血硫酸脱氢表雄酮水平对ＩＶＦ－ＥＴ中卵巢低反应与妊娠结局的预测价值

摘 要： 【目的】 评估月经早期外周血硫酸脱氢表雄酮（ＤＨＥＡＳ）水平对ＩＶＦ－ＥＴ助孕中卵巢低反应（ＰＯＲ）和妊娠结局的预测价值。【方法】 单中心回顾性队列研究。共纳入１２０８例行第一周期ＩＶＦ／ＩＣＳＩ助孕的病人,年龄２０～ ４４岁,排除ＰＣＯＳ患者。采用低剂量长效ＧｎＲＨ激动剂长方案。主要指标为 ①ＩＶＦ治疗周期前３个月内月经周期第１ ～ ３天外周血ＦＳＨ、ＬＨ、雌二醇（Ｅ２）、总睾酮（Ｔ）和ＤＨＥＡＳ水平;经阴道Ｂ超检测ＡＦＣ和平均卵巢容积（ＭＯＶ）;②ＩＶＦ－ＥＴ中的卵巢刺激指标和妊娠结局。【结果】不孕女性中ＤＨＥＡＳ水平有随年龄增加而逐渐下降的趋势,但在各年龄层间无显著差异。年龄＜３５岁的女性中,ＤＨＥＡＳ水平与基础ＦＳＨ、基础ＦＳＨ／ＬＨ、基础Ｅ２、ＡＦＣ、ＭＯＶ、ＣＯＨ后卵巢反应性及妊娠结局均无关。３５≤年龄＜４０岁的女性中,ＤＨＥＡＳ水平与基础ＦＳＨ显著负相关（ｒ＝ －０．２８;Ｐ ＝ ０．０１１）;ＰＯＲ组ＤＨＥＡＳ水平显著低于非ＰＯＲ组;妊娠组ＤＨＥＡＳ水平显著高于未妊娠组。对于３５≤年龄≤４４岁的女性, ＤＨＥＡＳ是预测其卵巢低反应较可靠的指标（ＲＯＣ－ＡＵＣ：０．８３８）,界值２．５８ μｍｏｌ／Ｌ的灵敏度为８５．７％,特异度为８５％（ＯＲ ０．９９８; ９５％ＣＩ ０．９９６－０．９９９; ｐ＝０．０２３）;但不能可靠预测妊娠结局（ＲＯＣ－ＡＵＣ：０．６６２,Ｐ ＝ ０．０４）。 【结论】 本研究认为外周血ＤＨＥＡＳ水平是３５≤年龄≤４４岁病人中卵巢反应的保护因素,作为单一指标时对该人群卵巢低反应发生有适中的预测价值,但是对不妊娠结局的预测不可靠。未来研究需要进一步确认这组病人中伴随低水平ＤＨＥＡＳ的低反应患者进行ＤＨＥＡ预处理后是否能够获益。