鸟氨酸脱羧酶在乳腺癌中的表达及其意义

为探讨鸟氨酸脱羧酶（ODC）基因表达在乳腺癌发生发展中的作用，笔者利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定20例乳腺癌组织及相应癌旁乳腺组织中ODCmRNA表达的相对水平，观察其与乳腺癌的发生发展及与乳腺癌临床分期的关系。结果示乳腺癌组织中ODC的表达明显高于癌旁组织（P<0.05），乳腺癌组织中ODC的相对水平与临床TNM分期呈正相关趋势（P<0.01）。提示ODC在乳腺癌组织中呈高表达，并与临床TNM分期呈正相关，说明其在乳腺癌的发生发展中可能起重要作用。     

胃癌腹腔冲洗液多巴脱羧酶mRNA的检测

目的：通过检测胃癌腹腔冲洗液中DDCmRNA的表达，探讨多巴胶羟酶（DDC）与胃癌腹膜转移的关系，并为胃癌腹膜转移预测和亚临床转移的筛检提供新的方法．方法：用RNA提取和RT-PCR方法检测92例胃癌腹腔冲洗液中DDCmRNA的表达，同时做腹腔冲洗细胞学（PLC）检查；10例良性疾病的腹腔冲洗液作为阴性对照，结果：92例胃癌腹腔冲洗液中有57例检测到DDCmRNA的表达（62．0％），其表达阳性率与胃癌腹膜转移的PS因素密切相关（P〈0．05）；且胃癌腹腔冲洗液中DDCmRNA的表达水平还与胃癌浸润深度、浆膜类型、PLC检查结果以及是否存在肉眼腹膜转移有关，浸润深度深、浆膜受侵程度重、PLC检查结果阳性及存在肉眼腹膜转移病灶者的DDCmRNA表达相对值明显升高（P〈0．05）；而10例良性疾病腹腔冲洗液均未检测到DDCmRNA的表达．结论：胃癌腹腔液中DDCmRNA的表达与胃癌腹膜转移密切相关，通过RT—PCR来检测DDCmRNA适用于胃癌腹膜转移的预测和亚临床转移的筛检。     

鸟氨酸-天门冬氨酸联合乳果糖治疗肝性脑病疗效观察

目的探讨鸟氨酸-天门冬氨酸(雅博司)联合乳果糖治疗肝性脑病的疗效.方法选择56例肝性脑病患者,在综合性治疗的基础上,给鸟氨酸-天门冬氨酸20g/d静脉滴注;乳果糖20ml口服或鼻饲,每日三次.另选36例患者作为对照组,给一般综合性治疗,同时给乙酰谷酰胺1.0g/d静脉滴注,分别治疗20天.结果治疗组病死率明显下降,与对照组相比,有显著性差异(x2=4.02,P＜0.05),在降低血氨及促进脑电图改善方面,两组也存在显著性差异.结论雅博司联合乳果糖治疗慢性重型肝炎合并的肝性脑病,疗效显著,值得研究和应用.     

大鼠实验性胃溃疡自愈期间肠嗜铬样细胞的变化

目的:探讨肠嗜铬样细胞与大鼠实验性胃溃疡自愈的关系. 方法:通过制备大鼠乙酸性胃体溃疡模型,采用免疫组化、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和放射免疫测定的方法,观察溃疡自愈过程中大鼠胃黏膜内ECL细胞形态、组氨酸脱羧酶(HDC)mRNA和组胺含量的变化. 结果:胃溃疡大鼠胃黏膜内HDC阳性细胞率和胞质平均灰度值在制模术后第1日即开始降低,术后第6日达到最低,随后开始回升,术后第12日基本正常. 胃黏膜内HDC mRNA表达在制模术后第1日开始降低,第3日最明显,第6日开始恢复,第9日后接近正常. 制模术后胃黏膜内组胺含量也出现下调,以术后第6日为最低. 结论:ECL细胞可通过减弱其合成组胺的功能,参与胃溃疡自愈的调节过程.     

谷氨酸脱羧酶抗体检测在2型糖尿病早期诊断中的意义

目的探讨谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)检测在2型糖尿病患者早期诊断中的意义。方法比较2型糖尿病患者GAD-Ab阳性组12例与阴性组86例的临床特征、体重指数、C肽、糖化血红蛋白等指标。结果GAD-Ab阳性组发病年龄低于阴性组,空腹及餐后2 h C肽值较低,使用胰岛素者比例较高,酮症酸中毒发生率高。结论检测2型糖尿病患者的GAD-Ab可帮助临床上早期发现迟发自身免疫糖尿病病人,尽早采用胰岛素治疗,对保护残存的胰岛功能有重要意义。     

酶活性法测定GAD抗体及其初步临床应用

目的建立测定谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）抗体的方法，以探讨该抗体对胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）的预测、早期诊断及其发病机制研究的意义。方法用专用酶反应试管建立放射性同位素底物测定ＧＡＤ活性的分析方法。结果底物浓度为４ｍｍｏｌ／ｍｌ（３７ｋＢｑ）时，酶活性测定在一定浓度范围内剂量效应呈直线关系（ｒ＝０９８９）。结合免疫沉淀与酶活性分析，建立了免疫沉淀酶活性分析测定ＧＡＤ抗体的方法，２份ＩＤＤＭ患者ＧＡＤ抗体阳性血清与酶活性免疫沉淀指数存在剂量效应关系。用免疫沉淀酶法测定１５例正常人及２０例病程１年以内的ＩＤＤＭ患者血清，两组酶活性免疫沉淀指数分别为０１９３±００８７和０３８１±０１２１，差异有显著性（Ｐ＜００１）。按照超过正常人组免疫沉淀指数ｘ＋２ｓ为阳性区分，２０例ＩＤＤＭ患者血清中ＧＡＤ抗体阳性９例，占４５％。结论该方法简单，能直接反映酶活性的改变，无需高纯度的ＧＡＤ，特别适用于刚开始从事ＧＡＤ抗体研究的实验室及阳性血清筛查。     

人工牛黄对实验性惊厥大鼠脑内海马及门区神经元丢失的抑制和GAD免疫反应阳性细胞的保护作用研究

目的:研究人工牛黄对致痫大鼠行为的影响，海马及门区神经元丢失情况和谷氨酸脱羧酶(GAD)免疫反应阳性细胞数目的改变，探讨该药的抗惊厥作用。 方法: 采用戊四唑急性惊厥模型，参照Racine标准观察行为学表现，用Nissl染色作海马及门区神经元计数，用免疫组织化学方法作GAD免疫反应阳性细胞计数。 结果: 牛黄防治组惊厥发作的潜伏时间较对照组长，发作次数较惊厥组少，而在海马及门区的神经元和在海马的GAD阳性细胞的丢失数量较惊厥组的少。 结论:人工牛黄能延长惊厥发作的潜伏期，减少发作次数，减轻神经元丢失和保护GAD免疫反应阳性细胞。     

谷氨酸脱羧酶65片段与IL－10双基因真核表达载体的构建与鉴定

 目的 优化以往构建的以预防 1 型糖尿病为目的的全长谷氨酸脱羧酶（GAD）65 DNA疫苗，尝试构建GAD 65片段与IL-10双基因真核表达载体。方法 从GAD65质粒中扩增出GAD190-315片段和GAD490-570片段的cDNA，以overlap PCR法将之分别与hIL-2信号肽cDNA拼接，得到SGAD190-315、SGAD490-570融合基因。以p43.2-mIL-10质粒为模板，用PCR方法扩增出IL-10基因。将SGAD190-315、SGAD490-570融合基因分别与IL-10基因依次克隆入双启动子真核表达载体pBudCE4.1中，构建出2种双基因重组真核表达载体pBud-SGAD190-315/IL-10和pBud-SGAD490-570/IL-10。2种重组真核表达载体经测序鉴定正确后，用脂质体介导的方法转染COS-7细胞，转染后48和72 h以蛋白质印迹法检测细胞裂解产物及上清液中SGAD190-315和SGAD490-570融合基因的表达，ELISA方法检测细胞上清液中IL-10的表达。结果　核酸序列测定表明克隆的SGAD190-315、SGAD490-570融合基因和IL-10基因序列与报告序列一致。蛋白质印迹法和ELISA方法均检测到SGAD190-315/IL-10和SGAD490-570/IL-10重组真核表达载体在COS-7细胞中的表达。结论　成功构建了2种GAD65片段与IL-10双基因真核表达载体，为1型糖尿病的基因疫苗预防研究提供了实验基础。