蛴螬生物碱提取工艺及体内外抗肿瘤活性研究

目的研究蛴螬生物碱的提取工艺并对其抗肿瘤活性进行评价。方法采用单因素实验和L9(34)正交实验得到最佳提取蛴螬生物碱的方法;采用MTT和荷瘤小鼠抑瘤率的方法测定生物碱的体内外抗肿瘤活性。结果最佳提取工艺为蛴螬粗粉用体积分数95%乙醇浸泡提取24h;蛴螬生物碱对体内外肿瘤细胞有明显抑制作用,且具有质量浓度依赖性。结论蛴螬粗粉用体积分数95%乙醇浸泡24h提取,浓缩浸膏经过酸化萃取得到的生物碱抗肿瘤活性显著。     

蛴螬对激光损伤兔血-视网膜屏障后视网膜白细胞介素-1表达影响的研究

目的:探讨蛴螬对兔光损伤视网膜变性白细胞介素-1(IL-1)表达的影响。方法:将30只实验性兔随机分成5组,分别为空白组、模型组、蛴螬低剂量组、蛴螬中剂量组、蛴螬高剂量组,每组各6只动物,12只眼。除空白组外,其余4组均建立光损伤视网膜变性模型,在给药7d、14d每组分别处死3只兔子后取材做IL-1免疫组化检测,计算机图像系统分析积分光密度值。结果:与模型组比较,蛴螬中、高剂量组的IL-1积分光密度降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:蛴螬通过降低IL-1的表达,抑制细胞炎症因子来发挥保护视网膜作用,中、高剂量组效果较好。     

固相萃取小柱净化-气相色谱法测定蛴螬的有机氯农药残留

目的建立测定蛴螬中9种有机氯类农药残留量的方法。方法采用超声提取,固相萃取小柱净化,气相色谱法进行测定。结果所测定农药的回收率为84.0%～107.4%,样品中六六六的4种异构体、滴滴涕的4种异构体和五氯硝基苯的含量均符合国家的相关规定。结论该方法操作简便,灵敏,适用于蛴螬有机氯类农药的检测。     

蛴螬提取物对人肺癌A549细胞诱导凋亡作用的形态学观察

目的 探讨蛴螬提取物对人肺癌A549细胞诱导凋亡的形态学改变.方法 应用MTT法、HE染色、扫描电镜的方法 观察蛴螬提取物对体外培养的人肺癌A549细胞形态学影响.结果 蛴螬石油醚提取物对人肺癌A549细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.05或P＜0.01).倒置显微镜下蛴螬石油醚提取物80 μg/ml作用后,早期细胞出现凋亡形态学变化,晚期细胞发生膜破裂坏死.HE染色和扫描电镜观察细胞出现典型凋亡形态变化.结论 蛴螬提取物在体外对人A549肺癌细胞株有显著性抑制增殖和诱导凋亡作用.     

蛴螬对激光损伤兔血-视网膜屏障后视网膜TekC、NGF表达的影响＊

目的 探讨蛴螬促进激光损伤兔血-视网膜屏障后的修复作用及机理。方法 30只实验性兔随机分为正常组、模型组、蛴螬组。采用激光损伤血-视网膜屏障动物模型，在屏障损伤后1周及2周两个时相，观察蛴螬对兔血-视网膜屏障损伤修复情况、血-视网膜屏障组织形态结构及神经营养因子受体TrkC、NGF表达及影响。结果 蛴螬能促进损伤的血-视网膜屏障修复，减轻激光导致的视网膜组织及细胞形态学损伤，促进TrkC、NGF的表达，抑制视网膜细胞增殖与变性，从而改善视网膜功能。结论 蛴螬可能通过改善视网膜组织能量代谢，清除氧自由基，促进神经营养因子受体的表达，抑制视细胞增殖，起到保护血-视网膜屏障组织结构的作用。     

蛴螬与蛴螬滴眼液的成分研究

对Ｈｏｌｏｔｒｉｃｈｉａ ｄｉｏｍｐｈａｌｉａ Ｂａｔｅｓ（蛴螬）的水浸液、乙醇提取液、石油醚提取液进行了成分分析,结果表明蛴螬中含有氨基酸、多肽或蛋白质、糖类、生物碱、有机酸盐、甾体化合物等成分。对蛴螬滴眼液氨基酸成分分析表明,其中谷氨酸、甘氨酸含量最高,约占水解氨基酸总量的４０．３３％,推测谷氨酸、甘氨酸可能是其治疗白内障、角膜翳的有效成分之一。蛴螬的成分研究国内外文献均未见报道。     

蛴螬提取物对兔视网膜静脉阻塞模型视网膜组织ET-1表达的影响

目的 观察蛴螬提取物对兔视网膜静脉阻塞(retinal vein occlusion,RVO)模型ET-1表达的干预作用.方法 取健康兔36只,每组9只,分为空白组、模型组、血栓通组、蛴螬组4组.采用波长532 nm的Nd:YAG激光光凝法建立RVO模型,连续灌胃给药,实验后7、14、21 d分别处死兔取材,石蜡包埋切片,用免疫组化法检测视网膜组织中ET-1表达活性,计算机图像分析系统并进行统计分析.结果 蛴螬组7、14、21 d与模型组比较,ET-1表达明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);蛴螬组与血栓通组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);蛴螬组与空白组比较,7、14 d的ET-1表达活性明显高于空白组,差异有统计学意义(P＜0.05),21 d时的ET-1表达活性与空白组差异无统计学意义(D＞0.05).结论 蛴螬能够明显降低兔RVO模型ET-1表达,抗血栓形成,改善RVO后视网膜局部微循环,减轻缺血缺氧对血管内皮细胞的损害.     

蛴螬滴眼液的工艺研究

目的：确定蛴螬滴眼液的制备工艺。方法：采用正交设计,以浸膏得率、甘氨酸和谷氨酸总量、总氮含量及薄层斑点成分显示为考察指标,优选了蛴螬滴眼液的最佳提取工艺条件。结果：确定最佳工艺条件为A3B2C1,即以水为溶媒,加10倍量水浸泡0．5h,煎煮1．5h,滤过,得滤液1;滤渣加7倍量水煎煮1h,得滤液2,合并上述滤液1、2,即得蛴螬提取液。结论：工艺可行,适合于蛴螬滴眼液的制备。     

蛴螬提取物对人肺癌A549细胞Caspase蛋白表达的影响

目的 观察蛴螬提取物对人肺癌A549细胞凋亡时Caspase蛋白表达的影响.方法 采用MTT法检测蛴螬提取物对A549细胞增殖的抑制率,透射电子显微下观察凋亡细胞的超微结构改变,运用S-P免疫细胞化学试剂盒检测Caspase3、Caspase8和 Caspase9的表达情况.结果 蛴螬提取物对A549细胞具有明显的增殖抑制作用,并出现典型的凋亡形态变化;加药组细胞Caspase3、Caspase8和Caspase9表达均增强.结论 蛴螬提取物诱导A549细胞凋亡过程中,激活了Caspase家族.