培养环境的温度变化与人MⅡ期卵母细胞纺锤体形态学变化的关系

目的:观察环境温度的改变对MⅡ期人卵纺锤体结构的影响.方法:40例非男性因素的不孕妇女,将常规体外授精后未受精的MⅡ期卵子置于室温(23～25℃)直至纺锤体消失.于纺锤体消失后,将卵子分成3个实验组:1组纺锤体消失后立即复温(n=8);2组纺锤体消失后室温下静置5 min再复温(n=6);3组纺锤体消失后室温下静置10 min再复温(n=6).卵子复温后5 min,10 min,2 h分别观察纺锤体的复现情况.结果:20个未受精的MⅡ期卵子置于室温下5 min内纺锤体均消失.1组中的8个卵子,2组中的6个卵子复温后再次观测到了MⅡ期纺锤体.3组中的6个卵子只有3个卵子再次出现了MⅡ期纺锤体.对照组的18个卵子放置于37℃恒温板上观察30 min,纺锤体均未见消失.结论:MⅡ期卵子纺锤体对环境温度的改变非常敏感.温度降低将导致纺锤体消失,随着时间的延长,纺锤体复现几率明显减少.     

卵母细胞纺锤体观察及在辅助生殖领域应用与展望

在细胞分裂过程中,纺锤体对卵母细胞染色体的运动、分配和极体的排出非常关键。以往研究动物卵母细胞纺锤体的方法都是侵袭性的,对于人卵母细胞不能广泛应用。近来,活卵母细胞纺锤体的观察方法已基本成熟,通过这些观察方法可以非侵袭性地观测研究卵母细胞中纺锤体的形态和动力学特征。在人类辅助生殖领域有广阔的应用前景。     

第一极体不能精确定位人卵母细胞纺锤体

目的 观测人卵母细胞纺锤体的确切位置，从而指导今后的生殖医学临床工作。方法 应用纺锤体成像系统观测体外成熟及体内成熟组人卵母细胞纺锤体，测量卵子中心、纺锤体与第一极体之间形成的角度。比较两组结果的差异。结果 体外成熟组纺锤体与第一极体形成角度和体内成熟组存在显著差异(P=0．006)。结论 人卵母细胞的位置并不能准确定位卵母细胞纺锤体的位置。体外成熟组纺锤体与第一极体形成的角度要明显小于体内成熟组。应用纺锤体成像系统可以安全、有效地观察人卵母细胞纺锤体。     

小鼠窦前卵泡培养成熟后卵母细胞纺锤体的变化

目的小鼠窦前卵泡体外培养得到成熟卵母细胞,观察卵母细胞的染色体和纺锤体形态,分析其变化及原因。方法完整小鼠窦前卵泡培养12 d,得到的卵母细胞进行免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察纺锤体和染色体的形态和分布。结果经过体外培养,得到GV、M I、MⅡ期卵母细胞分别占总数27.9%、37.2%、34.9%;GV期卵母细胞存在完整的染色质圆环,11.8%的M I期卵母细胞显示正常纺锤体和染色体;38.5%的MⅡ期卵母细胞显示正常的纺锤体和染色体。结论小鼠窦前卵泡经体外培养后能够得到成熟的MⅡ期卵母细胞,但是其效率较低。原因可能是卵母细胞骨架结构的异常使染色体分离障碍,部分卵母细胞停留于M I期;同时成熟卵母细胞的受精率低也与纺锤体异常有关。     

有丝分裂阻滞缺陷基因异常在肿瘤中的研究进展

纺锤体组装检验点（ Spindle assembly checkpoint ，SAC）是机体有丝分裂的重要监控机制，能够监控着丝点与微管之间的连接，确保染色体正确分离。有丝分裂阻滞缺陷家族蛋白（ Mitotic arrest defi-cient protein，Mad）作为SAC的重要组成部分，其主要在正常有丝分裂过程中发挥作用。 Mad家族基因突变或蛋白表达异常可能导致染色体异常分离，在促使肿瘤发生、预示肿瘤预后不良、化疗药物耐药等方面都起到一定作用。     

通过测定微核面积和DNA含量来检出非整倍体毒剂的应用

1980年Yamamoto等首先报道了对7种染色体断裂剂和4种纺锤体毒剂诱导的小鼠骨髓红细胞MN直径的测定结果。他们用照片放大与显微尺测定结合,把MN直径大于1/4胞浆直径者定为大MN,结果发现断裂剂组大MN只有0～2.5%,而纺锤体毒剂组高达44%～47%,MN直径断裂剂组多在1μm内,纺锤体毒剂组多在1～4μm内。两类毒剂差异非常显著。     

用于抗肿瘤的ATP竞争性纺锤体驱动蛋白抑制药的研究进展

纺锤体驱动蛋白(kinesin spindle protein,KSP)抑制药是抗肿瘤药物研究的一个重要方向,已有数个KSP抑制药进入临床研究。ATP竞争性KSP抑制药的发现,为克服因为结合位点突变而引起的对ATP非竞争性KSP抑制药耐药提供了新的研究思路。本文综述了近年来报道的ATP竞争性KSP抑制药,为进一步的研究提供了参考。     

Rho相关激酶抑制剂Y27632对小鼠腔前卵泡体外发育的作用

目的 探讨Rho相关激酶（ROCK）抑制剂Y27632在小鼠腔前卵泡体外发育中的作用。 方法 取出生12.5 d的小鼠卵巢,机械法收集单枚腔前卵泡,采用超低吸附96孔板模拟3D环境对其进行培养。设置对照组和含有Y27632的实验组,通过形态学观察、卵泡直径的变化、成熟卵泡的数量、成熟卵母细胞纺锤体的变化等来评估卵泡的整体发育情况。采用Real-time PCR技术检测颗粒细胞中卵泡刺激素受体（FSHR）、卵母细胞中骨形态发生蛋白15（BMP15）、生长分化因子9（GDF9）等以及凋亡相关基因（Bad、Bax和Caspase-3）的表达情况,同时,用细胞存活染料检测卵泡发育过程中颗粒细胞的凋亡情况。 结果 ROCK抑制剂Y27632对卵泡直径增长和基本发育指标（存活数、成腔率和成熟率）无明显影响（P>0.05）,但对照组卵母细胞成熟后纺锤体组装出现异常。培养8 d后,与对照组相比,实验组颗粒细胞特异性基因FSHR上调;卵母细胞特异性基因BMP15和GDF9上调,而叉头框O3（FoxO3)下调;凋亡基因Bax、Bad和Caspase3表达下调,实验组卵泡内的颗粒细胞凋亡明显少于对照组。 结论 小鼠卵泡体外发育过程中,ROCK抑制剂Y27632能够抑制颗粒细胞的凋亡,防止卵母细胞纺锤体组装异常,进而提高卵泡体外发育质量。     

染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定

目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA（shRNA）表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株（SGC-shKIF4A）和稳定表达无意义shRNA的对照细胞（SGC-shNC）;同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.