Cloning and Subcloning of cDNA Coding for Group Ⅱ Allergen of Dermatophagoides Farinae

Objective: To clone, sequence and subclone the cDNA coding for group Ⅱ allergen of Dermatophagoidesfarinae(Der f2). Methods: The cDNA gene fragment of Der f2 was amplified by RT-PCR. After being purified, the gene fragment was cloned into a vector pMD-18T. The recombinant plasmid pMD-18T-Der f2 was transformed into E. coli JM109. Positive clones were screened and identified by PCR and digested with restriction endonuclease, and the sequence of inserted Der f2 cDNA was also analyzed. Then Der f2 was subcloned into the vector of pET-32a( ). Results: The Der f2 cDNA was specifically amplified from RNA by RTPCR. The recombinant plasmid pMD-18T-Der f2 and pET-32a( ),Der f2 was constructed and digested by SacⅠ and NotⅠ, and the size of gene fragment was 455bp and in accordance with the expected one. Conclusion: The pET-32a( )-Der f2 subclone was constructed successfully.     

粉尘螨过敏性哮喘免疫治疗中嗜碱性粒细胞释放能力变化的研究

本研究在对门诊９１例粉尘螨过敏性哮喘的治疗中，以临床症状用药评分和嗜碱性粒细胞脱颗粒试验为主要筛选和观察方法，经７１例变应原特异性免疫治疗和２０例常规药物治疗的对照研究得出的以下结论：１．粉尘螨特异免疫治疗诱导病人嗜碱性粒细胞对外来特异性变应原刺激的释放能力下降，是免疫治疗机是中的一个重要环节。２．反映嗜碱性粒细胞释放能力的嗜碱性粒细胞脱颗粒试验的脱颗粒指数不仅和病情的严重程度相关，而且和治疗过程     

粉尘螨脱敏疗法防治小儿哮喘78例临床疗效观察

哮喘是小儿常见多发病，好发于婴幼儿时期，预防儿童哮喘尤其是婴幼儿哮喘是降低哮喘发病率的重要环节，除了变应原回避外，可用药物对症治疗和针对病因作特异性变态反应疫苗(SAV)治疗，SAV是目前变态反应与哮喘的唯一病因治疗手段，现得到WHO肯定，粉尘螨脱敏治疗是SAV的一种方法之一，粉尘螨是一种强烈的过敏原，广泛存在于自然界中，具有过敏素质的病人吸入微量度粉尘螨抗原即能引起哮喘或其他过敏性疾病，使用粉尘螨脱敏疗法能使敏感机本产生特异性IgG-阻断抗体，体内特异性IgE水平下降，从而降低了哮喘的复发，本文对2000年1月-2003年1月在我科免疫门诊诊治的2—13岁哮喘患儿78例疗程半年-1年，近控15例，显效35例，有效70例，无效8例，总有效率为89．8％，证明粉尘螨脱敏治疗能调节免疫功能，预防气道炎症和气道高反应性，粉尘螨阳性程度越高疗程越长者效果越佳，可使临床症状减轻，发作时间缩短，用药量减少，本方法简便易行，使用安全，无副作用，医疗费用最低，患儿及家长都能接受，是一种值得推广的方法，尤其在农村基层单位。     

脂质体包被粉尘螨变应原的研究

为提高Ⅰ型变态反应性疾病脱敏治疗的疗效与安全性，采用脂质体作为载体，包被粉尘螨变应原，制备为一种具有靶向性及缓释性的制剂。结果：①制备的螨脂质体经Ｇ－２５层析后得到一个洗脱峰；②电子显微镜观察形态呈圆球形，直径约０．１８～０．２８μｍ；③微孔滤膜无菌过滤，细菌培养无菌生长，且形态无明显变化；④皮肤试验提示脂质体包被后的螨变应原仍有活性，与未包被的螨粗制液相比变应原活性有下降（Ｐ＜０．０１）。本研究为变应原的剂型改革探索了一种新方法，对变应性疾病的脱敏治疗有重要意义。     

小儿过敏性哮喘粉尘螨脱敏治疗观察

小儿过敏性哮喘粉尘螨脱敏治疗观察吴茜小儿过敏性哮喘，在我国城乡，尤其是城市，近年有增加的趋势。发病率明显高于成人。起病逐渐趋向幼小年龄，对儿童健康影响较大。我科利用粉尘螨脱敏治疗小儿过敏性哮喘４４例，现报告如下。对象和方法本文诊断标准参考１９８７年全...     

粉尘螨主要变应原Derf1基因的改造与可溶性表达

目的在大肠杆菌中提高粉尘螨1类变应原（Derf1）的可溶性表达。方法用RT-PCR方法扩增得到Derf1的全长序列与成熟肽序列（mDerf1）；以已知DerP5基因的前导序列替换Derf1前导序列和原酶序列，重新构建出rDerf1基因；将上述3个基因分别克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中表达，经Western-blot对三者的表达产物进行分析鉴定。结果Western-blot表明，pGEX-Derf1与pGEX-mDerf1的表达产物分别为分子量约63000与51000的重组蛋白质，重组蛋白质主要存在于细胞裂解液的沉淀中。pGEX-rDerf1大量表达了可溶性目的蛋白质，分子量约53000，并被成功地分离纯化。以上三种表达产物均可被鼠抗GST抗体与螨过敏患者血清特异地识别。结论表达了含Derf1，mDerf1与rDerf1的三种GST融合蛋白质，它们均具免疫反应性，纯化获得了GST-rDerf1融合蛋白质，为后期的诊断及治疗奠定了基础。     

粉尘螨浸液治疗特应性皮炎的疗效和IgE变化的观察

<正> 生物素-抗生物素蛋白酶联吸附试验(BA-ELISA)。 近年来,应用脱敏治疗过敏性疾病已取得了一定疗效,其中包括用粉尘螨治疗特应性皮炎(Atopic Dermatitis,AD),但多因疗程较短,未能发现显著性免疫学变化。我们选择AD患者分别用粉尘螨脱敏治疗和常规药物治疗。历经3年的临床疗效观察和测定血清IgE及特异性IgE水平,并与正常成人分析对比,结果如下。     

玉屏风颗粒联合粉尘螨滴剂舌下脱敏治疗小儿变应性鼻炎肺脾气虚证临床研究

目的：观察玉屏风颗粒联合粉尘螨滴剂舌下脱敏治疗小儿变应性鼻炎肺脾气虚证的临床疗效。方 法：选择90 例变应性鼻炎肺脾气虚证患儿为研究对象,按随机数字表法分为观察组和对照组各45 例。对照组 给予粉尘螨滴剂舌下脱敏治疗,观察组在对照组基础上给予玉屏风颗粒冲服。1 周为1 个疗程,连续治疗6 个 疗程。比较2 组临床疗效、鼻部症状评分、体液免疫功能指标及炎性因子水平。结果：观察组总有效率为 97.78%,高于对照组86.67% （P＜0.05）。治疗后,2 组鼻塞、鼻痒、喷嚏、流涕评分均较治疗前降低（P＜ 0.05）,且观察组各项评分均低于对照组（P＜0.05）。治疗后,2 组血清免疫球蛋白M （IgM）、免疫球蛋白 G（IgG） 水平高于治疗前,免疫球蛋白E（IgE） 水平低于治疗前（P＜0.05）;且观察组IgM、IgG 水平高于对 照组,IgE 水平低于对照组（P＜0.05）。治疗后,2 组血清白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-13（IL-13）、 血管细胞黏附因子-1（VCAM-1） 水平均较治疗前降低（P＜0.05）,且观察组血清IL-4、IL-13、VCAM-1 水 平均低于对照组（P＜0.05）。结论：玉屏风颗粒联合粉尘螨滴剂舌下脱敏治疗小儿变应性鼻炎肺脾气虚证的疗 效显著,有利于改善患儿临床症状,提高机体免疫力,减轻炎症反应。