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本研究利用逆转录PCR技术和家族特异性引物,先后从9株分泌不同特异性单抗杂交瘤细胞株中扩增出轻,重链可变区基因,并经克隆和序列测定。其中利用轻链引物从分泌抗转铁蛋白受体单抗的杂交瘤细胞株中扩增出了无功能的VK序列。经分析和GenBank数据库比较,该序列虽与BALB/cVK21-E细胞株分泌的抗体轻链有98%同源性,但是在V/J连接区内有4个碱基对缺失,导致后续阅读框架移位,因而出现终止密码子而致 相似文献
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人源化抗体构建过程中假链的产生及应对策略 总被引:1,自引:0,他引:1
目的在人源化抗体构建过程中,采用方便、快捷的分子克隆手段。消除SP2/0内源性畸形轻链转录本以获得正确的轻链cDNA。方法在mRNA抽提时,不用常规的TRIZOL法抽提总RNA,而采用经腹腔培养。生长状态良好的杂交瘤细胞。用QIAGEN公司Oligotex Direct mRNA Purification Kit,将polyA^+的mRNA富集。可有效减少畸变转录本的含量,提高功能型mRNA的丰度。利用polyA^+RNA。采用RT-PCR,我们成功地克隆到了轻链可变区序列,序列分析证实读码框完全正确,属于轻链可变区基因。结果NCBI数据库BLAST显示。克隆的基因序列符合小鼠lg可变区特征,具有正确的CDR和FR功能区及VJ连接区。结论采用polyA^+ mRNA富集技术,成功克隆获得阻断型抗人CD154 mAb(4F1)单克隆抗体的轻链、重链可变区基因,成功地消除了SP2/0内源性畸形转录本对免疫球蛋白功能性轻链基因的影响。 相似文献
5.
王洪武 《中华医学信息导报》2006,21(5):15-16
单克隆抗体 1975年 Koehler等采用细胞融合技术,使小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞,后者产生的抗体,称为单克隆抗体(monoclonal antilxxly ,MoAb),简称单抗,由于单抗具有性质纯、效价高,特异性强,少或无血清交叉反应等特点 ,已被广泛应用于肿瘤的治疗。 相似文献
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9.
B细胞杂交瘤技术制备抗同种特异T细胞膜抗原单克隆抗体 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:为进一步分析TCV免疫诱导同种免疫反应低下的机制。方法:采用B细胞杂交瘤技术获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果:两次的细胞融合中共得到12株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞,为分析抗体在TCV中的作用提供条件。结论:TCV免疫可引起抗TCV细胞抗体的产生,以同系免疫的方法得到的活化B细胞用于B细胞杂交生产单抗是可行的。 相似文献
10.
氨甲酰磷酸合成酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:制备抗人氨甲酰磷酸合成酶(CPSI)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定与应用.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备 mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化及免疫荧光染色的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原,借助免疫捕获的方法用抗体来分离复合物.结果:获得3株可稳定分泌抗人CPSI mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgGl(K),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化、免疫荧光染色、免疫沉淀实验和复合物的分离.结论:成功制备了抗人CPSI的mAb,为CPSI的研究提供了有力的工具. 相似文献