昆虫抗冻蛋白的特性与结构

抗冻蛋白具有特殊的热滞活性,能使溶液的冰点低于熔点、抑制冰晶的生长,特别是在较低的浓度下就有抑制重结晶作用,保护生物免受冻害的影响.本文就昆虫抗冻蛋白的生化特性、影响昆虫抗冻蛋白热滞活性的因素进行介绍,以黄粉甲、云杉卷叶蛾和赤翅甲为例对昆虫抗冻蛋白的结构作了较为系统的综述.     

家畜胚胎冷冻保存的研究进展

胚胎的冷冻保存已成为许多家畜胚胎移植中的常规技术环节之一,许多专家学者对冷冻方法进行了广泛深入的研究。在最近几年间,有关家畜胚胎冷冻保存的研究主要集中在冷冻／解冻方法上,增加胚胎解冻后的活力以及摸索一种有效的低温保护液,对不同低温保护剂的理化性质的研究,添加各种大分子物质以及植物和动物的抗冻蛋白的分离和应用,这些都给胚胎冷冻增加了新的内容。     

荆防颗粒对寒冷刺激诱导小鼠机体损伤的保护作用

目的 研究荆防颗粒对寒冷刺激诱导小鼠机体损伤的保护作用及其作用机制。方法 雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组和荆防颗粒高、中、低剂量（16、8、4g/kg）,每组8只。给予相应药物连续干预7d,同时每天进行冰水浴寒冷刺激以建立小鼠机体损伤模型,每天测定小鼠体质量,实验结束后测定并计算脏器指数;观察小鼠耳组织外观和病理损伤程度;检测检测血清中丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）活性及三酰甘油（triglycerides,TG）、肌酐（creatinine,CRE）、尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;检测肌肉组织中抗冻蛋白（antifreeze protein,AFP）水平。结果 经荆防颗粒干预后,各组小鼠体质量无显著性差异,体质量变化较为平稳,其中荆防颗粒低剂量组小鼠体质量增长较快,脏器指数无显著差异;耳组织外观及病理切片结果显示,小鼠受寒冷刺激诱导的损伤程度减轻;血清中IL-6、IL-1β、TNF-α和BUN水平降低（P＜0.05、0.01）;肌肉组织中AFP水平升高（P＜0.05、0.01）。结论 荆防颗粒对寒冷刺激诱导的机体损伤具有保护作用,其作用机制与抑制炎症反应、增加AFP水平有关。     

抗冻蛋白

文中介绍了抗冻蛋白的类型、组成、抗冻机制和应用研究的进展。抗冻蛋白（ＡＦＰ）是一类能抑制冰晶生长的蛋白或糖蛋白，它存在于一些生活在极地鱼类、越冬的昆虫和植物中，使这些动植物在如此寒冷的环境中不致冻结而生存。抗冻蛋白分为抗冻糖蛋白、Ｉ型抗冻蛋白、Ⅱ型抗冻蛋白和Ⅲ型抗冻蛋白四种类型。人们已经从一些动植物中分离、提取与鉴定抗冻蛋白，并对其结构、功能、生物合成、在其他生物体内的表达、应用等方面进行了研究。     

冷适应过程中大鼠核糖体相关蛋白质的变化

观察大鼠冷适应2周到3个月后,其肝核糖体相关蛋白质经盐析后的A部分,在DEAE-Cellulose上层析得到的峰Ⅱ比正常组明显升高(冷/正比值为3.50-5.42)。盐析后的B部分,在Sephadex G-100上层析得到的峰Ⅱ比正常组低(冷/正比值为0.433-0.481)。这些变化可能系冷适应过程有新的适应性基因表达。     

昆虫抗冻蛋白DAFP的原核表达、纯化和抗血清制备

目的:制备昆虫抗冻蛋白DAFP特异性的鼠抗血清。方法:根据GenBank已发表的Dendroides canadensis抗冻蛋白基因序列(gi:2737939),人工合成加拿大拟步甲虫(Dendroides canadensis)的抗冻蛋白基因(dafp),并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和pMAL-p2x中,在大肠杆菌中进行表达。表达的融合蛋白经Glutathione Sepharose4B纯化后,免疫小鼠制备抗DAFP的抗血清,抗体的效价及特异性分别采用ELISA和Western blot进行检测。结果:SDS-PAGE检测表明,人工合成的dafp基因在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为38000的可溶性融合蛋白。以该融合蛋白免疫小鼠所制备的抗体,其ELISA滴度为1∶5000,Western blot证实BL21/pGEX-4T-1-dafp菌和TB1/pMAL-p2x-dafp菌的表达产物可特异性地与该抗体结合。结论:在大肠杆菌中成功地表达了DAFP的融合蛋白并制备出抗融合蛋白的鼠抗血清,为进一步研究DAFP的特性奠定了基础。     

几种昆虫抗冻蛋白的研究概况

昆虫抗冻蛋白具有很强的抗冻活性,其结构与其他生物不同。本文分别从结构、基因克隆、抗冻活性等方面对几种昆虫的抗冻蛋白进行综述,并对昆虫抗冻蛋白的发展前景进行了展望。     

植物抗冻蛋白纯化、活性与二级结构测定

用DEAE-纤维素DE-52，丙烯葡聚糖S300柱层析，热处理及等速电泳技术分离纯化了热稳定的冬季沙冬青叶片抗冻蛋白(AFP)，获得了电泳纯的分子量约为50KDa的AFP，经Shiff试剂检验为含糖的AFGP。按差示扫描量热法(DSC)测定了该蛋白热滞活性(THA)，约在5mg／ml时为     

无二甲基亚砜细胞冻存技术的研究进展及展望

冷冻保存技术已成为细胞治疗、辅助生殖、组织工程和疫苗储存等生物医学应用的必要方法。冰晶的形成是冷冻保存的主要限制因素, 并会对生物样本造成致命性损伤。二甲基亚砜(DMSO)是传统上常用的冷冻保护剂, 然而考虑到DMSO自身细胞毒性和给药后对机体产生的潜在不良反应, 因此寻找具有安全性和有效性的替代DMSO方法的需求逐渐增长。本文拟概述多种治疗性细胞的无DMSO保存的研究进展及面临的问题和挑战, 以期推动新型细胞冷冻保存技术更好地开展。     

黄粉甲抗冻蛋白基因克隆及生物信息学分析

目的：获得黄粉甲抗冻蛋白基因afpTx及相关生物信息学资料.方法：从黄粉甲幼虫中提取总RNA,通过RT-PCR合成黄粉甲抗冻蛋白基因afpTx的cDNA片段,克隆入载体pMD19-T,进行测序分析.酶切后将其亚克隆入表达载体pET32a（＋）,构建表达质粒pET32a-afpTx,并转化到大肠杆菌DL21后提取质粒,双酶切鉴定.采用MEGA4.0,BioEdit5.0.6软件对本研究克隆的抗冻蛋白基因afpTx进行氨基酸序列同源性变异及进化分析.结果：测序结果afpTx的cDNA长度为336bp;编码112个氨基酸;酶切、电泳结果表明克隆和亚克隆获得成功.抗冻蛋白氨基酸序列相似性分析表明afpTx与GenBank上提交的23条黄粉甲抗冻蛋白的氨基酸序列平均一致性为88%;与11条赤翅甲抗冻蛋白氨基酸序列的平均一致性为67%,2种甲虫的平均一致性为63%.进化树分析结果显示黄粉甲与赤翅甲抗冻蛋白序列是同源序列.赤翅甲的序列趋异度显著大于黄粉甲抗冻蛋白基因序列.结论：成功克隆了本地黄粉甲的afpTx基因,该序列是GenBank上提交的黄粉甲与赤翅甲抗冻蛋白的同源序列.