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1.
目的 克隆土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶的全长基因。方法 根据日本血吸虫和曼氏血吸虫磷酸丙糖异构酶基因的保守区设计引物,利用RT—PCR扩增出土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基闪的大片段,再结合RACE技术分别得到磷酸丙糖异构酶基因的3’端和5’端,将3部分序列拼接后获得磷酸丙糖异构酶基因全长cDNA序列,并提交GenBank。结果 成功克隆了土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因全长cDNA序列并提交GenBank,登录号为DQ092331。结论 土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因全长cDNA的克隆为进一步表达及其生物学性能的分析提供了理论基础。 相似文献
2.
结核分支杆菌rpoB基因突变与耐利福平的临床应用 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:研究结核分支杆菌耐利福平(RFP)分离株rpoB基因突变情况并评价其应用价值。方法:采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR—SSCP)方法对355株结核分支杆菌临床分离株(其中敏感株109株,耐RFP或含耐RFP株246株)rpoB基因进行检测,并对其中17株耐药株用双氧末端终止法进行测序分析。结果:以结核分支杆菌H37RV为对照,109株药物敏感株的rpoB基因均无突变,特异性100%;246株耐药株中,225株rpoB基因SSCP图谱异常,其敏感性91.5%。17株耐药株(其中SSCP异常11株,正常6株)PCR扩增产物经测序证实,11株在531位密码子TCG-TTG,4株在526位密码子CAC-TAC,1株在516位密码子GAC—GTC,1株未改变。结论:rpoB基因突变是耐RFP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制;其最常见的突变位点是531位色氨酸和526位组氨酸,应用PCR—SSCP技术可快速检测结核分支杆菌对RFP的耐药性。 相似文献
3.
人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA,(human telomeraseRNA,hTR)的cDNA探针,分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法(TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。18例活检胃癌组织及45例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为l00%,相应TRAP分析的阳性率分别为88.89%、86.67%,低于RNA斑点杂交(P<0.05)。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA,具有高度的敏感性和特异性,弥补了TRAP分析敏感性不足的缺点。 相似文献
4.
邱蔚六 《上海交通大学学报(医学版)》2005,25(4)
口腔颌面部癌瘤是头颈部癌瘤的重要组成部分.目前,其 5年生存率大约在60%左右,为了提高晚期病例的疗效,以手术为主的综合治疗(或称多学科治疗)早已在临床应用多年,然而各种疗法的安排需要有一个特定的顺序方能取得更好的效果.为此完整的概念应为 "综合序列治疗"(combined and sequential therapy).本文对此予以浅析. 相似文献
5.
应用基因芯片深入研究肿瘤基因表达谱有助于很好地定性肿瘤,确定肿瘤治疗的敏感性,判断预后,寻找新的治疗靶点。对大多数原发性肝癌患者,治疗的选择很局限,预后凶险,迫切需要对其致癌物的分子机制、肿瘤浸润、复发、转移过程、治疗的敏感性及预后判断等进行深入的探讨。现综述近年基因芯片技术在原发性肝癌中的研究进展,以期对其分子全貌有更深入的认识。 相似文献
6.
磁共振二维扰相梯度回波小角度激励序列在半月板损伤中的诊断价值 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨磁共振二维扰相梯度回波小角度激励序列(FLASH-2D)在半月扳损伤中的诊断价值.方法回顾性分析55俐膝关节半月板损伤的磁共振与关节镜资料..磁共振均行SE序列T1WI、PD+T2WI矢状位和冠状位扫描及FLASH-2D序列矢状位扫描。以关节镜为标准,对比半月板损伤在磁共振各种成像序列中的显示情况。结果本组关节镜检查诊断半月板损伤51例,SE序列T1WI、PD+T2WI正中矢状位和冠状位诊断半月板损伤45例.敏感性为78%.特异性为90%;FLASH-2D序列矢状位诊断半月板损伤49例,敏感性为90%,特异性为97%。结论FLASH-2D序列矢状位与SE序列T1WI、PD+T2WI正中矢状位和冠状位相比,具有更高的敏感性和特异性,在半月板损伤中具有更高的诊断价值。 相似文献
7.
Cloning and Subcloning of cDNA Coding for Group Ⅱ Allergen of Dermatophagoides Farinae 总被引:6,自引:0,他引:6
LIChao-pin YANGQing-gui 《南京医科大学学报(英文版)》2004,18(5):239-243
Objective: To clone, sequence and subclone the cDNA coding for group Ⅱ allergen of Dermatophagoidesfarinae(Der f2). Methods: The cDNA gene fragment of Der f2 was amplified by RT-PCR. After being purified, the gene fragment was cloned into a vector pMD-18T. The recombinant plasmid pMD-18T-Der f2 was transformed into E. coli JM109. Positive clones were screened and identified by PCR and digested with restriction endonuclease, and the sequence of inserted Der f2 cDNA was also analyzed. Then Der f2 was subcloned into the vector of pET-32a( ). Results: The Der f2 cDNA was specifically amplified from RNA by RTPCR. The recombinant plasmid pMD-18T-Der f2 and pET-32a( ),Der f2 was constructed and digested by SacⅠ and NotⅠ, and the size of gene fragment was 455bp and in accordance with the expected one. Conclusion: The pET-32a( )-Der f2 subclone was constructed successfully. 相似文献
8.
保守氨基酸残基在生物进化过程中具有较强的稳定性,一般不会发生太大的变化;生物信息学认为:氨基酸序列决定蛋白质结构,蛋白质结构决定蛋白质功能。因此,作者基于氨基酸的生化特性、几何特性和动态特性描述了一个新颖的算法去发现蛋白酶家族中的保守氨基酸残基,而保守氨基酸残基将对蛋白质的结构和功能的研究具有重要的意义。 相似文献
9.
C端序列的删除对非出血重组蛇毒纤溶酶的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
[目的]研究C端序列对非出血重组纤溶酶(rFⅡ)特异性、活性和热敏感性的影响.[方法]通过SOEing PCR方法构建删除C端序列的突变体,突变体和rFⅡ分别在P.pastoris中诱导表达.表达和纯化的蛋白用SDS-PAGE和Westeren blot进行鉴定.之后分析其生化特性.[结果]rFⅡ及突变体通过SDS-PAGE和Westeren blot得到证实.生化分析揭示:①突变体对显色底物N-(p-Tosyl)-Gly-Pro-Lys-pNA的催化效率(Kcat/Km)是rFⅡ的1.9倍;②突变体和rFⅡ对氧化的胰岛素B链拥有共同的优先裂解位点,可是在随后的裂解中开始展现差异;③突变体显示了更高的纤(原)活性;④热处理表明突变体相较r FⅡ对温度的增加更敏感;⑤通过圆二色谱测量,突变体的螺旋比例有所增加.[结论]删除的序列参与rFⅡ的特异性、活性和热敏感性,该序列可作为下一步优化的候选序列. 相似文献
10.