双重实时荧光PCR快速鉴别人参和西洋参＊

目的 建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光PCR方法。方法 通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对，设计特异性的引物探针，建立双重实时荧光PCR检测方法。PCR反应体系为Premix Ex Taq （Probe qPCR） 10 μL，人参上下游引物各0.5 μL，西洋参上下游引物各0.3 μL，人参与西洋参特异性探针各0.4 μL，DNA模板2 μL，灭菌去离子水补至20 μL。反应条件为95℃预变性30 s；然后以95℃变性5 s，60℃退火延伸30 s进行40个循环。应用该方法测试了27份DNA样品，包括7份人参、6份西洋参、4份人参与西洋参混合样、10份其他人参属样品及其他常见中药材样品的DNA，以确定该方法的特异性。将人参与西洋参样品DNA混合后10倍稀释成不同浓度后进行检测，用以确定该方法的灵敏度。结果 人参及西洋参样品均在特定的荧光通道下出现典型的阳性扩增曲线，人参与西洋参混合样品均同时出现两条阳性扩增曲线，其它对照样品及空白对照均没有出现阳性扩增曲线。灵敏度检测结果显示该方法检测人参及西洋参的最低检测限均为2 pg DNA/反应。结论 本实验建立的双重实时荧光PCR方法能够同时快速、准确、灵敏地鉴别出人参和西洋参。     

微滴式数字PCR和实时荧光定量PCR对新型冠状病毒肺炎患者不同时间血便尿中核酸检测结果初步探讨

目的 分析微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的核酸检测结果,比较两种方法检测各类样本的差异性,为改进新型冠状病毒核酸检测方案提供数据支持。 方法 利用ddPCR和qPCR技术对已经确诊的3例新型冠状病毒肺炎患者发病不同时间的全血、尿液、粪便共22份标本进行新型冠状病毒核酸检测。 结果 两种方法对人保守区域基因扩增结果一致:全血标本信号最强,尿液次之,粪便最少;ddPCR在1份全血,1份尿液,5份粪便中检出ORF-1ab和N基因的阳性微滴,qPCR仅在3份粪便中检出上述基因,漏检的3个标本基因拷贝数平均浓度为128 copies/ml;ddPCR在发病<5、5~15、>15 d的各类标本中都有检出,qPCR检出以中晚期为主;重症病例用ddPCR均可测到阳性微滴,qPCR检测的各类标本均为阴性;轻症病例的各类标本中qPCR只有粪便核酸检测阳性,ddPCR检出率高于qPCR。 结论 ddPCR可以有效克服qPCR 灵敏度不足的难题,是对qPCR 的有益补充,尤其是针对病毒载量比较低的血液、尿液和可疑的粪便或肛拭子标本,适用于早期感染的判断及患者治愈后出院诊断。     

中药菩人丹对单纯型糖尿病视网膜病变患者视野及电生理的影响

目的观察中药菩人丹对单纯性糖尿病视网膜病变(SDR)患者眼底照相、眼底荧光血管造影(FFA)、视野、视觉电生理的影响。方法 2016年1—12月承德医学院附属医院眼科收治SDR患者48例(96眼)。随机数字表法分成2组,观察组24例(48眼),给予中药菩人丹粉剂口服,每次9 g,2次/d;对照组24例(48眼),给予羟苯磺酸钙分散片口服,每次500 mg,3次/d。2组均治疗3个月,观察患者治疗前后眼底照相、FFA、视野平均敏感度(MS)、视网膜电图震荡电位(ERG-QPs)的变化。结果治疗3个月后观察组总有效率高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。与治疗前比较,治疗3个月后2组患者眼底照相及FFA的改变情况(出血、渗出、微血管瘤、视网膜循环时间)差异亦无统计学意义(P>0.05)。视野平均敏感度均显著提高(P<0.01),且观察组优于对照组(t=6. 893,P<0.01),对照组仅ERG-OPsO1潜伏期缩短(P<0.05),余指标均无改善(P>0.05),观察组ERG-OPsO1、O2潜伏期缩短,振幅增加,差异有统计学意义(P<0.05),且均优于对照组(P<0.05)。结论中药菩人丹可明显改善SDR患者的眼底出血、渗出、微血管瘤,提高视野MS值,缩短ERG-OPsO1、O2潜伏期,增加振幅,有效治疗SDR。     

杂交技术对老年多支复杂病变冠心病患者的早期疗效

目的探讨杂交技术对老年多支复杂病变冠心病介入治疗患者的早期疗效。方法采用回顾性研究方法,选取2015年6月至2017年6月在中国人民解放军联勤保障部队第九四二医院行杂交手术的患者310例(研究组)和非体外循环下冠状动脉旁路移植手术的患者共300例(对照组)。观察两组患者的以下指标:①手术时间、术中出血量以及术中再血管化数目;②术后24 h输血量、引流管保留时间、呼吸机辅助通气时间、ICU停留时间;③随访半年,观察早期疗效及并发症的发生情况。结果研究组患者的手术时间、术中出血量、再血管化数目、术后24 h输血量、引流管保留时间、呼吸机辅助通气时间、ICU停留时间分别为(180.4±54.3) min、(198.3±23.4) ml、(2.8±0.5)支、(159.3±30.4) ml、(30.4±10.2) h、(5.0±1.2) h、(24.5±12.2) h,对照组分别为(233.5±87.3) min、(365.5±54.1) ml、(2.7±0.4)支、(367.4±55.4) ml、(51.3±12.1) h、(7.2±2.1) h、(36.7±13.5) h。研究组患者的手术时间、术中出血量、术后24 h输血量、引流管保留时间、呼吸机辅助通气时间、ICU停留时间均显著低于对照组(P 0.05)。两组患者的再血管化数目比较,差异无统计学意义(P0.05)。两组患者均随访半年,结果发现,两组患者的桥血管及支架均保持通畅,无心肌梗死、心源性休克及再血管化治疗等心血管不良事件发生。两组患者的主要并发症发生率比较,差异无统计学意义(χ~2=0.255,P=0.613)。结论杂交技术能有效地缩短老年多支复杂病变冠心病患者介入治疗的手术操作时间和ICU停留时间,降低术中出血量和术后输血量,更有利于患者恢复,值得临床推广应用。