Ku70的多样性功能及研究展望

Ku70是一种非常丰富的核蛋白，广泛存在于人类、哺乳类动物、线虫、昆虫、酵母、原核生物以及植物体内。现代研究发现，Ku70在DNA双链破裂修复、DNA复制、基因转录调控、端粒结构的维持等多种细胞活动中，均扮演着重要角色。本文主要对Ku70结构、功能及其研究展望作一个简要概述。     

原核生物转录起始的负调控

原核生物转录起始是多个反应组成的动力学过程 ,每一个反应特别是其中一个或几个限速步骤往往成为转录因子的调节点。原核生物阻遏蛋白介导的负调控因启动子而异 ,包括抑制 RNA聚合酶与启动子结合、抑制开放复合物形成、抑制启动子清空等多种机制。不同的阻遏机制与被调系统启动子自身的特性相适应     

Peroxiredoxin Ⅱ研究进展

peroxiredoxins（prxs）蛋白是新近发现的一类过氧化物酶,属于抗氧化蛋白超家族,广泛存在于原核生物和真核生物中。该家族第1个被发现的蛋白是来源于酵母菌的25kD蛋白质,命名为巯基特异性抗氧化酶。哺乳动物的Prxs家族包括6个成员,即prxⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ。prxs家族的所有蛋白均在N-端具有保守的半胱氨基酸（cys）残基,部分蛋白在C-端也有保守的cys残基。根据各成员间的同源性和cys残基的数目,prxs家族蛋白可分为3个亚类,即2-cys Prx（prxⅠ～Ⅳ）,非典型2-Cys prx（prxV）和1-cys prx（prx Ⅵ）。     

人His-AWP1融合蛋白表达载体的构建及其在原核生物的表达

目的 获取了His-AWP1融合蛋白，为了阶段深入研究AWP1的结构。功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础。方法 应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法从人ECV304内皮细胞系中克隆AWP1cDNA，并将其重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒pET-14b中，经酶切，序列鉴定，选择正确重组克隆。将其质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，用Ni^2 -NTAHis柱纯化和SDS-PAGE分离蛋白。结果 克隆到一个627bp的AWP1cDNA片段，重组质粒目的DNA测序正确，纯化出了一个分子量约为38kD的融合蛋白，结论 用基因工程方法在原核细胞表达并成功纯化出His-AWP融合蛋白。     

毕赤酵母表达系统

毕赤酵母表达系统是一种新的真核基因表达系统，由于其有许多突出的优点，越来越受到分子生物学界的重视，已有多种重组蛋白在该系统成功表达。本文从表达菌株、表达载体、转化及整合、外源蛋白的表达及修饰等方面对其进行综述，并分析了影响毕赤酵母高效表达外源蛋白的因素。     

重组人tumstatin的原核生物表达和多克隆抗体制备

目的原核生物表达可溶性的tumstatin抗原并制备相应的多克隆抗体。方法利用原核表达载体pMAL-tumstatin在大肠埃希菌BL21中表达tumstatin,经Amylose Resin亲和层析柱和Q Sepharose Fast Flow柱纯化tumstatin,以纯化蛋白免疫新西兰兔,获得抗tumstatin多克隆抗体。利用western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。结果tumstatin蛋白表达成功。SDS-PAGE分析表明其为可溶性表达。成功获得了tumstatin纯品及兔抗tumstatin多克隆抗体。ELISA法表明多克隆抗体效价>5 000。western blot检测证明多克隆抗体的特异性良好。结论成功表达、纯化tumstatin蛋白,并获得高特异性、高效价兔抗tumstatin多克隆抗体,为其在临床免疫学检测应用奠定了基础。     

生殖道解脲支原体感染293例分析

解脲支原体(Ureaplasma Urealyticum,UU)是一类介于细菌和病毒之间的最小原核生物,它可寄生于人类泌尿生殖道,引起人体许多疾病,并可通过生殖道及血液传播给胎儿及新生儿.本文对293例宫颈分泌物解脲支原体培养阳性并行药物敏感性试验的患者进行分析.     

线粒体DNA修复系统与神经疾病

Clayton曾报道线粒体不能清除粒体DNA(i mtochondri-cal DNA,mtDNA)中由紫外钱诱导生成的嘧啶二体,因而一直认为线粒体没有mtDNA修复功能。近年来,通过对原核生物和低等真核生物的研究,人们对DNA修复系统有了深入的认识,证明mtDNA修复系统可保持mtDNA遗传物质的完整性和稳定性,避免遗传物质突变的产生,保证DNA复制的高保真度。但是对其仍缺乏完整的理解。目前报道在线粒体中存在碱基切除修复、错配修复、重组修复、直接修复等修复系统。较多研究证实mtDNA修复系统与一些神经疾病发病相关。1线粒体DNA(mtDNA)基因组结构及其修…     

Enhancement of binding activity of soluble human CD40 to CD40 ligand through incorporation of an isoleucine zipper motif

AIM: To investigate the effect of incorporation of an isoleucine zipper (IZ) motif into CD40 on binding activity of CD40 for the CD40 ligand (CD40L). METHODS: Prokaryotic expression vectors for 2 soluble CD40 derivatives, shCD40His and shCD40IZ containing an IZ domain, were constructed and expressed in Escherichia coli. The recombinant proteins were purified to homogeneity after refolding from inclusion bodies. Their molecular weights in solution of shCD40His and shCD40IZ were compared by size-exclusion chromatography, and their binding activity for CD40L on Jurkat T cells was determined by flow cytometry. RESULTS: shCD40His and shCD40IZ were generated. Both of them possessed significant binding activity for the cognate ligand CD40L expressed on the cell surface. shCD40IZ had much higher binding activity to its ligand (CD40L) than did shCD40His. Furthermore, size-exclusion chromatography demonstrated that shCD40IZ existed in high molecular mass forms that were most likely to be trimers in solution. CONCLUSION: Incorporation of an IZ motif into CD40 enhances its binding activity for CD40L through trimerization of the CD40 derivative.