Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的 为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片，提高检测灵敏性，对Patrick Brown实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法 玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化，然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层，经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能，并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果 方法改进后芯片表面性能优良：固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论 利用共价连接，方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸，解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷，提高了芯片检测的灵敏性。     

挖土机司机精液质量分析

挖土机司机因高温作业 ,每日工作时间长 ,驾驶室及座位长时间处于高温 ,致使会阴部温度升高。目前会阴部体表高温对男性生殖功能的影响报道不多 ,本文对我院 1998年 11月至2 0 0 2年 10月的男性挖土机司机精液质量进行了分析和评价 ,现报告如下。1　对象与方法1.1　对象　我院有 1998年 11月至 2 0 0 2年 10月不孕症男性患者检查精液质量 6 9例 ,其中挖土机司机 18例 ,年龄 2 5～ 35岁 ,既往无生殖系统疾病。对照组为体检的男性 2 1名 ,均未接触其他可能引起生殖功能损害的理化因素 ,两组在吸烟、饮酒、婚姻状况、年龄、文化程度以及经济状…     

原位分子杂交中载玻片包被法的改良

随着生物科学技术的发展,核酸分子原位杂交技术在各形态学研究领域得到了广泛的应用,成为续组织化学和免疫组织化学之后一项十分重要的技术手段,为进一步在分子水平上研究正常及病理组织内特定基因的变化提供了可能.原位分子杂交大多是在载玻片上进行的,由于实验时程长,中途又需经多种缓冲液的洗涤、孵育,载玻片处理不当,很易引起组织切片在实验不同时期脱落,造成不必要的人力、物力损失,因此我们摸索并改进了几种载玻片的包被方法.1 材料和方法 (1)载玻片包被前的处理 截玻片经洗涤液浸泡过夜,流水冲洗后,1mol/L HCl浸泡1～3h或泡酸4～8h,流水冲洗,而后用双蒸水冲洗2～3     

用逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒分型诊断

目的 建立一种逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒(CVB1～6)进行分型诊断。方法 一对通用PCR引物，它能有效扩增所有CVB1-6型的特异性DNA片段；另选取6条各型特异性寡核苷酸探针，将它们分别共价结合在不同的微孔板上。经过一次PCR扩增，扩增后的产物分别与包被有不同探针的微孔板进行杂交检测，从而有效鉴别CVB各型。结果 本法与ELISA法的分型比较显示它们具有很好的一致性，无错误分型。对152例IgM抗体阳性标本的检测，该方法阳性率为71．7％。结论 本法可准确对CVB进行分型，为CVB的临床诊断及流行病学调查提供了一种有效的方法。     

基因转殖酵母菌培养液中生物素的高灵敏ELISA竞争测定法

目的　发展一种测定基因转殖酵母菌培养液中生物素的灵敏ELISA竞争测定法。方法　酶标板先用猪肺炎支原体包被 ,再依次用兔抗猪肺炎支原体抗血浆、羊抗兔IgG -生物素温育形成固态生物素 ,同溶液中的生物素 (标准液或试样 )竞争有限量的链霉亲和素 HRP。建立了在 5 0 - 2 0 0 0ng·L- 1 范围内生物素的标准曲线。结果　检测限为 83ng·L- 1 ,比文献报告的ELISA测生物素的最低测定浓度小 10 0 0倍。测定生物素浓度为 2 0 0、5 0 0、10 0 0ng·L- 1 的用空白培养液稀释的标准生物素试样的相对标准偏差分别是 2 4 87%、6 15 %、7 86 % ,平均回收率为 10 1 13%。在用本法测定野生酵母菌及其 6 3个基因转殖酵母菌培养液中的生物素时 ,发现 85 %以上的培养液试样中生物素浓度均得到不同程度扩增。结论　用猪肺炎支原体作包被蛋白 ,提高了ELISA结果的精确度和准确度 ,可供测定其它介质中生物素的参考     

肿瘤蛋白质组学研究进展

蛋白质组学研究是后基因组时代肿瘤学研究的重点。激光捕获微切割、蛋白质芯片、同位素包被亲和标记等新技术促进了蛋白质组学的发展及其在各种癌症研究中的应用。蛋白质组技术给肿瘤标志物筛选和个体化治疗等领域带来了新的途径。     

乙型肝炎病毒表面抗原酶联免疫吸附试验包被板回收利用的探讨

酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)在临床实验诊断中已得到广泛应用。1997年《中华人民共和国献血法》颁布后，采血机构要对血液进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体(FICV)、艾滋病病毒抗体(HIV)的初检、复检，用血单位对血液也要进行复检，且规定应用酶标法。在这大量的初检、复检中，特别是复检中决大多数呈阴性反应。     

氧化锆材料的生物相容性研究

目的:检验氧化锆陶瓷材料和成骨细胞体外培养的细胞相容性,为其作为种植体的材料提供依据。方法:将氧化锆薄片和提取的大鼠成骨细胞进行体外培养,相差显微镜观察成骨细胞在氧化锆薄片上的生长情况。结果:MTT实验,扫描电镜观察,碱性磷酸酶检测,实验组与对照组载玻片和成骨细胞的培养有无明显差异。结论:成骨细胞在氧化锆薄片上生长良好,显示其具有良好的生物相容性。     

二甲双胍抑制高浓度葡萄糖刺激的脂肪分解及机制

目的研究二甲双胍抑制高浓度葡萄糖刺激的脂肪分解及其机制。方法以SD大鼠附睾原代脂肪细胞为研究对象,分为对照A组、对照B组、实验A组和实验B组,每组3个平行管。对照A组予以5 mmol·L^-1葡萄糖,对照B组予以25 mmol·L^-1葡萄糖,实验A组予以5 mmol·L^-1葡萄糖+500μmol·L^-1二甲双胍,实验B组予以25 mmol·L^-1葡萄糖+500μmol·L^-1二甲双胍。细胞孵育24 h后,测定培养基中甘油释放量作为评价脂肪分解的指标,用酶化学法测定脂肪分解酶活性,用Western Blot法检测脂滴包被蛋白表达及其磷酸化水平、脂肪组织三酰甘油水解酶(ATGL)蛋白表达。结果对照B组和实验B组的甘油释放量分别为(1.61±0.08)和(0.50±0.06)μmol·m L^-1packed cell volume,实验B组与对照B组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.001)。这种抑制效应从孵育16 h开始明显并持续到24 h。对照B组和实验B组的脂肪分解酶活性分别为(344.28±65.98)和(200.44±64.25)μmol glycerol·mg protein^-1·h^-1,2组比较,实验B组降低41.78%,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照B组相比,实验B组脂滴包被蛋白磷酸化减少,差异有统计学意义(P<0.01),但2组的ATGL蛋白水平与对照A组相比,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论二甲双胍通过抑制脂滴包被蛋白磷酸化和脂肪分解酶活性,从而减少高浓度葡萄糖刺激的脂肪分解,这种效应可以减少糖尿病高血糖状态下游离脂肪酸从脂肪组织向血浆释放,进而减轻胰岛素抵抗。