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1.
野生型p16和p53抑癌基因共转染对 K562细胞增殖的抑制作用 总被引:2,自引:0,他引:2
抑癌基因p16和p53在抑制肿瘤的发生中起重要作用,在髓细胞白血病细胞系K562中检测出这两种基因有纯合缺失。为探讨野生型p16和p53基因的转染与表达对K562细胞的生长影响,采用了脂质体介导外源野生型p16和p53共转染K562细胞,用免疫细胞化学染色检测p16和P53基因的表达,检测细胞生长曲线,采用流式细胞术进行细胞周期分析。结果显示,共转染后p53和p16在K562细胞中表达阳性率分别为23%和28%;细胞生长受到一定程度的抑制,G1期细胞的比例增加,S期细胞减少,与单独转染p53或p16基因的抑制作用有明显差别(P<0.05)。结论:外源野生型p16和p53基因的共转染比转染单基因对K562细胞生长有更明显的抑制作用,有可能成为白血病基因治疗的一种方法。 相似文献
2.
共转染抑癌基因p16、p53对白血病细胞株HL-60及K562的抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
人类髓系白血病细胞株HL 6 0、K5 6 2同时有p16、p5 3抑癌基因的缺失[1,2 ] 。已有研究将正常的p5 3或p16基因单独导入这两种细胞 ,可以不同程度地抑制肿瘤细胞的生长[1,2 ] 。如果同时将缺失的p16、p5 3两种基因导入HL 6 0及K5 6 2细胞中 ,可能有更好的抑制作用。材料和方法1 质粒与试剂 含野生型p16cDNA的质粒pBluescript p16由GordonPeters教授 (ImperialCancerResearchFund .London)惠赠 ,含野生型p5 3cDNA的质粒pC5 3 SN3及真核表达载体pCNe… 相似文献
3.
我们通过共转染方法观察了反义增殖细胞核抗原 (PCNA)联合野生型 p5 3(wt p5 3)基因对膀胱癌EJ细胞体外生长活性的抑制作用及其分子机制 ,现报告如下。材料与方法 PCNA反义表达载体pLAPSN和 pcDNA wt p5 3由本室常规保存。设置正常对照组、反义PCNA转染组、wt p5 3转染组、反义PCNA +wt p5 3转染组。参照脂质体lipofectamine 2 0 0 2说明书进行基因转染。细胞生长活性检测采用细胞计数法[1] 。DNA合成速率检测采用3 H TdR掺入法[1] 。细胞周期时相分析 :参照文献 [1]进行。基因表达检测采用RT PCR法[2 ] 。细胞凋亡检测采用… 相似文献
4.
目的构建TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体,并观察其在共转染的人骨髓基质细胞中的表达情况。方法应用基因重组技术,构建TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体,在脂质体介导下将其导入体外培养的人骨髓基质细胞内,24 h后观察TPO、IL-6、IL-11瞬时表达情况、蛋白含量及表达,并与未转染组、空载体转染组做对比。结果 1)酶切及测序结果均可证实TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体的正确性。2)细胞转染24 h后,荧光显微镜下可观察到pEGFP-N1的表达,25%细胞发出绿色荧光;免疫细胞化学染色检测出IL-6及IL-11转染后能在细胞内表达。3)转染48 h后,Western blot检测出骨髓基质细胞内TPO、IL-6及IL-11的蛋白表达量。结论 TPO、IL-6、IL-11这3个基因可共转染人骨髓基质细胞,并在细胞内有效表达。 相似文献
5.
目的:构建含有定点突变的人胰岛素原基因的腺病毒表达载体.方法:首先利用RT-PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原eDNA;然后通过重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上产生2个突变位点,使突变的eDNA编码的蛋白质含弗林蛋白酶的识别位点,该突变型胰岛素原cDNA片段命名为INS-M2;最后将INS-M2亚克隆至腺病毒载体系统的穿梭载体的多克隆位点上,并与骨架载体共转染至细菌内,通过细菌内同源重组得到重组载体.结果:HindⅢ和Xho I酶切、Poc I酶切及测序均证实载体pAd-INS-M2构建成功.结论:构建的含定点突变人胰岛素原基因腺病毒载体pAd-INS-M2为进一步转染非胰岛β细胞,对糖尿病进行基因治疗奠定了基础. 相似文献
6.
目的:探讨HER2/neu蛋白细胞胞外段的基因重组腺相关病毒(rAAV-HER2/neu)和粒-巨噬细胞集落刺激因子重组腺相关病毒(rAAV-GM-CSF)共转染树突状细胞(DC)诱导的细胞免疫应答.方法:成熟的DC通过淋巴细胞分离液分离培养获得,流式细胞技术分析HER-2/neu以及细胞表面标志CD1a、CD83、CD80、CD86和HLA-DR的表达,MTT检测混合淋巴反应,3H-TdR释放法检测CTL杀伤活性,RT-PCR检测FasL表达.结果:共转染组(CT)、单独转染组(ST)和未转染组(UT)3组DC的细胞表面标志表达无统计学意义(P>0.05),共转染组中HER2/neu和FasL的表达比单独转染组高,共转染组中可以检测到更强的混合淋巴细胞反应和CTL杀伤活性.结论:HER2/neu蛋白细胞外段的基因通过DC的抗原提呈作用可以诱导出免疫应答,其免疫应答作用与FasL表达相关,而GM-CSF可以增强其免疫应答作用. 相似文献
7.
目的观察慢病毒介导骨形成蛋白2(BMP2)和血管内皮生长因子165(VEGF165)基因共转染对骨髓基质干细胞(MSCs)成骨分化的影响。方法构建携带BMP2、VEGF165和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒表达载体,包装、生产携带BMP2、VEGF165和GFP基因的重组慢病毒(Lv-BMP、Lv-VEGF、Lv-GFP)。分离、培养W istar大鼠骨髓MSCs,分别以Lv-GFP(GFP组)、Lv-BMP(BMP组)、Lv-VEGF(VEGF组)转染MSCs,Lv-BMP和Lv-VEGF共转染MSCs(BMP+VEGF组),另设未转染MSCs对照组。RT-PCR法检测转染后7 d各组细胞BMP2、VEGF165 mRNA表达以及转染后1、2、4周各组细胞骨钙素(OCN)mRNA表达;ELISA法检测转染后1、4、8周各组细胞培养上清液BMP2、VEGF165蛋白表达以及转染后1、2、4周各组细胞培养上清液OCN蛋白表达;转染后第14天,各组细胞行碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性检测。结果 BMP+VEGF组BMP2、VEGF165 mRNA和蛋白高效共表达,BMP2 mRNA和蛋白表达与BMP... 相似文献
8.
目的探讨p38 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)家族四种亚型对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的转录调控。方法以人胚胎肾293(HEK 293)细胞为靶细胞,采用脂质体(LPS)介导的细胞基因共转染技术、荧光素酶报告基因技术,分别将FLAG-tagged p38 MAPK 4种亚型、含有鼠iNOS基因启动子区的荧光素酶报告基因质粒(piNOS-Luc)、空载体(pcDNA3)、β-半乳糖苷酶表达质粒(pCMV-β)共转染,检测并比较荧光素酶相对活性。结果(1)未加刺激时,在HEK 293细胞中,p38 MAPK中仅有p38α能够诱导iNOS基因启动子的转录活性;(2)在LPS刺激下,p38 MAPK 4种亚型均能够诱导iNOS启动子的转录活性,其中,p38β所诱导的转录活性最高,p38α的诱导作用亦很明显。结论(1)LPS能够在HEK 293细胞中诱导iNOS基因转录活性;(2)在HEK 293细胞中,p38 MAPK参与了静息时及LPS刺激下对iN-OS基因的转录调控。 相似文献
9.
目的 探讨诱导凋亡的bax基因和p53抑癌基因共转染对人癌细胞增殖和凋亡的作用。方法 构建pSV-CIP-bax-CAT嵌合基因。在其bax基因上游含人a1(Ⅰ)型胶原基因的第一内含子217bp片段(+822~+1093)和317bp启动子片段。经阳离子转染试剂DOSPER介导,分别用pSV-CIP-bax-CAT转染、pSV-CIP-bax-CAT和pSV-p53-CAT共转染培养的人舌癌Tca8113细胞系(LCC)。结果 免疫狭缝印迹和ELISA检测证实,转染组和共转染组比对照的bax和p53基因表达量明显增加。MTT显色分析、TUNEL荧光显微镜和流式细胞仪监测结果显示,bax基因或p53基因均具抑制LCC增殖和诱导凋亡的作用(bax组和bax+p53组的抑制率分别为23.9%和26.1%)。结论 人a1(Ⅰ)型胶原基因的顺式作用元件能促使bax基因在LCC异位表达;bax与p53共转染48小时,对LCC抑制增殖和诱导凋亡的作用具明显协同效应。 相似文献
10.
目的:探讨新发现的转录因子Zf9对肝纤维化中重要的细胞因子TGFβ1启动子的转录激活作用。方法:以培养的NIH/3T3细胞、人成纤维细胞及人HepG2细胞为靶细胞,共转染Zf9表达质料pCIneoZf9与含TGFβ1启动子报告基因CAT的重组体,测定报告基因CAT的表达活性。结果:在3种细胞中的Zf9对TGFβ1启动子都有反式激活作用。Zf9对TGFβ1的反式激活有明显剂量依赖性。结论:转录因子Z 相似文献