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1.
单抗亲和层析生产高比活HCG方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
本实验以健康孕妇尿为原料,利用苯甲酸沉淀,有机溶剂沉积,离子交换层析和凝胶过滤等方法得到HCG纯品(14000IU/mg)。用该产品免疫小鼠。将产生的免疫鼠脾脏与NS-1骨髓瘤细胞用半固相法要交细胞融合,筛选纯化出HCG单抗克隆抗体(Ka=7.5×10^8m^-^1)。将HCG单抗与Sepharose4B偶联制成免疫吸附亲和层析柱,可将HCG粗品(2000IU/mg)一次纯化得到HCG纯品(150 相似文献
2.
人尿胰蛋白酶抑制剂与激肽释放酶联产及纯化的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本文探讨了采用Polyerde-3吸附剂,从男性尿中提取HUTI-HUKN粗品,再依次经抑肽酶-琼脂糖4B亲和层析、胰蛋白酶-琼脂糖4B亲和层析,将HUTI和HUKN分离并纯化。每20升尿液得精品HUTI50mg,比活1,250u/mg;HUKN3mg,比活666u/mg。活性回收率分别为41%和50%。 相似文献
3.
LPS亲和层析柱吸附抗LPS抗体的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:制作LPS亲和层析柱(affinity chromatography columu)并观察它对急性运动轴索型神经病(acute motoraxonal neuropathy,AMAN)患者血浆中的抗脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)抗体的吸附。方法:以致AMAN空肠弯曲菌(campylobacter jejuni,Cj)Penner 0:19型的LPS作为配体与CNBr-activated Sepharose 4 Fast Flow亲和介质偶联制作亲和层析柱;利用间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)检测过柱前后样本以及抗体经洗脱后,洗脱液中所含抗LPS抗体滴度。结果:阳性的抗LPS抗体血浆流过LPS亲和层析柱后,12/13管流出液中抗LPS抗体变为阴性;抗体经洗脱后,在洗脱液中检出高滴度的抗LPS抗体。结论:LPS亲合层析柱是一种去除AMAN病人血浆中抗LPS抗体较为理想的方法。 相似文献
4.
5.
目的 分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶,为溶栓药物的研究奠定基础。方法 利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶,测定其比活力,并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用,采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果 亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分,比活力为89.08 U·mg-1,比纯化前提高了7.37倍,该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论 利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基,采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分,且比活力相对提高。 相似文献
6.
建立兔乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)分离纯化的新方法,研究该酶的动力学特性。采用Blue Dexteran和Sepharose 4B交联制成Blue Dextran-Sephaqrose 4B染料配体亲和层析柱,结合QAE-Sephadex A450离子交换层析分离兔LDH-C4,以作图法测定该酶动力学数据。 相似文献
7.
生物工程技术制备人源抗-HBs Fab 片段 总被引:1,自引:2,他引:1
目的:用生物工程技术制备人源性抗-HBsFab。方法:将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBsFab基因克隆入pBAD/gⅢA载体,进而转化Tpo10大肠杆菌,对重组质粒菌发酵表达后,利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab蛋白。对所得包涵体依次变性,溶解,纯化后,利用透析进行复性,用Western blot检测Fab蛋白的特异性,Dot blot测定其生物学活性。结果:经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白,有较好的生物学活性,并且总量达到80mg/L。对所获包涵体进行透析复性后,也可得到少量有活性的蛋白,但比例很小。结论;用pBAD/gⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBsFab片段,发酵培养后,经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白。为人源抗-HBsFab片段的大量制备提供了有效手段。 相似文献
8.
RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的: 制备RAI16蛋白的合成肽多克隆抗体, 并进行初步鉴定和应用, 为研究RAI16蛋白的功能及作用机制获得重要的实验工具.方法: 应用Fmoc法化学合成RAI16蛋白N端第44~55位氨基酸的多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的RAI16蛋白的多肽与KLH交联; 皮下注射抗原免疫新西兰纯种大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫组化、 Western blot等初步鉴定和应用.结果: 化学合成RAI16蛋白N端第44~55位氨基酸的多肽, 纯化后多肽纯度为96% , 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价为1∶ 125 000.该多肽抗体可特异识别人脾脏组织中相对分子质量(Mr)约为55 000的RAI16蛋白.结论: 所制备的多克隆抗体能与天然RAI16蛋白发生特异性反应, 可应用于ELISA、免疫组化、免疫沉淀和Western blot等实验, 为确定RAI16蛋白的组织分布和亚细胞定位、研究RAI16蛋白的功能及作用机制提供了重要的实验工具. 相似文献
9.
根据本实验室的工作,老化红细胞表面可结合自身IgG的特点,建立了一种新的分离年轻及老化红细胞的方法。由于Protein A可与IgG有特异结合,用活化的Sepharose 6MB结合Protein A制成亲和层析柱,以此分离老化红细胞。同时对分离的红细胞作了谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氨酶、6-磷酸脱氢酶的活性和变形性及吞噬情况的比较。 相似文献
10.
用抗CD59单抗2A7与CNBr-Sepharose4B偶联制备亲和层析柱,从正常人红细胞膜蛋白抽提物中分离纯化出CD59分子。本法纯化的CD59分子量为18-20KDa对还原剂敏感,与McAbssMEM43和1F5有高亲和性,再掺入豚鼠红细胞后,能够抑制人体补体的反应性溶血,本文还对三株抗CD59单抗2A7,MEM43及1F5的抗原特异性进行了初步分析。 相似文献