基于网络药理学与动物实验探究桂花醇提物对慢性脑缺血神经损伤的保护作用及机制

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路探究桂花醇提物抗慢性脑缺血性神经损伤的保护作用与机制。方法 借助文献检索、TCMSP、BATMAN数据库筛选桂花活性成分及靶点;OMIM、GeneCards疾病数据库检索疾病靶点。取交集靶点构建蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络。借助DAVID数据库进行基因本体（gene ontology,GO）功能和京都基因和基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析,并建立“成分-靶点-通路”网络。采用右侧颈总动脉结扎法建立慢性脑缺血小鼠模型,随机分为假手术组、模型组、脑络通（195 mg/kg）组和桂花醇提物低、高剂量（125、375 mg/kg）组。采用旷场实验评价各组小鼠自发能力及探索行为;检测各组小鼠海马组织胆碱乙酰化酶（choline acetylase,ChAC）和胆碱酯酶（cholinester...     

红景天苷对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 红景天苷是从红景天的根茎部中提取得到的，是红景天中含量最高的天然活性化合物。该实验旨在研究红景天苷对人源性肝癌细胞（HepG2细胞）增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 选取未作任何处理的HepG2细胞作为空白组，以终浓度为20、40、80 μmol·L^-1红景天苷处理的HepG2细胞作为红景天苷组。采用多功能细胞分析仪测定红景天苷对HepG2细胞增殖的影响，划痕实验测定红景天苷对HepG2细胞迁移能力的影响，Transwell小室实验测定红景天苷对HepG2细胞侵袭能力的影响，倒置显微镜观察红景天苷对HepG2细胞形态的影响，透射电镜观察红景天苷对HepG2细胞中线粒体的影响，流式细胞术分析红景天苷对HepG2细胞凋亡及周期分布的影响，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定红景天苷对HepG2细胞相关凋亡基因的影响，蛋白免疫印迹法测定红景天苷对HepG2细胞相关迁移、侵袭及凋亡蛋白的影响。结果 与空白组比较，红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）细胞指数均明显下降（P<0.05），愈合面积均明显增加（P<0.05），且呈时间和浓度依赖性；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）中能够穿过Matrigel基质胶的HepG2细胞数量呈浓度依赖性减少；红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）总凋亡率呈浓度依赖性升高，且阻滞细胞于G₂/M期（P<0.05）；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin）表达呈浓度依赖性升高（P<0.05），神经钙黏附蛋白（N-cadherin）表达呈浓度依赖性降低（P<0.05）。红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）胱天蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Caspase-3蛋白及胱天蛋白酶-9（Caspase-9）蛋白表达均呈浓度依赖性升高（P<0.05），肌动蛋白结合蛋白（Girdin）及Bcl-2表达均呈浓度依赖性降低（P<0.05）。结论 红景天苷对HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭均具有抑制作用，且通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。表明红景天苷可作为一种潜在的肝癌化疗候选药物。     

Salidroside protects PC12 cells from MPP-induced apoptosis via activation of the PI3K/Akt pathway

Oxidative stress plays an important role in the pathogenesis of Parkinson’s disease (PD). Salidroside (SAL), a phenylpropanoid glycoside isolated from Rhodiola rosea L., can exert potent antioxidant properties. In this study, we investigated the protective effects, and the possible mechanism of action, of SAL against 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP⁺)-induced cell damage in rat adrenal pheochromocytoma PC12 cells. Pretreatment of PC12 cells with SAL significantly reduced the ability of MPP⁺ to induce apoptosis in a dose and time-dependent manner. SAL significantly and dose-dependently inhibited MPP⁺-induced chromatin condensation and MPP⁺-induced release of lactate dehydrogenase by PC12 cells. SAL enhanced Akt phosphorylation in PC12 cells, and the protective effects of SAL against MPP⁺-induced apoptosis were abolished by LY294002, a specific inhibitor of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) phosphorylation. These findings suggest that SAL prevents MPP⁺-induced apoptosis in PC12 cells, at least in part through activation of the PI3K/Akt pathway.     

女贞子及其活性成分防治呼吸系统疾病的药理作用研究进展

女贞子药对及女贞子的活性成分红景天苷、齐墩果酸和熊果酸均有平喘作用。红景天苷、齐墩果酸和熊果酸有抗脂多糖、脓毒症、休克、百草枯、氯气、油酸和缺氧引起的急性肺损伤作用,也有抗缺氧、香烟烟雾、二氧化硅、博来霉素和野百合碱引起的慢性肺损伤和肺纤维化作用。它们的肺保护作用的共同机制可能是：（1）上调T-bet基因表达和下调GATA3基因表达,调节Th1/Th2之间的平衡,抑制IgE生成和炎性细胞因子表达,减轻肺和气道的炎症反应;（2）上调Nrf-2通路,发挥抗氧化作用,减轻肺组织的氧化应激反应引起的炎性肺损伤;（3）激活PI3K/AKT信号通路和阻滞TLR4/MyD88/NF-κB炎性信号通路,保护肺上皮细胞;（4）阻滞TGF-β1/Smad通路,抑制胶原合成和成纤维细胞增生,减轻肺纤维化形成。女贞子药对和红景天苷有抗病毒性肺炎作用,齐墩果酸和熊果酸具有广谱抗病毒作用,除了直接抗病毒作用外,提高机体的免疫功能也是作用机制之一。     

红景天苷对大鼠骨折术后认知功能的改善作用及对海马大麻素2型受体表达的影响

目的探讨红景天苷对大鼠骨折术后认知功能的改善作用及对海马大麻素2型受体(CB2R)表达的影响。方法将60只大鼠随机均分为对照组、术后认知功能障碍(POCD)组和红景天苷组,各20只。POCD组和红景天苷组大鼠行胫骨骨折内固定术制备POCD模型,大鼠苏醒后,红景天苷组灌胃给予75 mg/kg的红景天苷,对照组和POCD组灌胃给予等量生理盐水,持续到术后第7天。于术前1 d、术后第1,7天时行旷场实验和恐惧测试。结果 3组大鼠各时点旷场实验探索总路程和声音恐惧测试僵直时间百分比比较,无明显差异(P> 0. 05)。与对照组相比,POCD组和红景天苷组大鼠术后1 d场景恐惧测试僵直时间百分比降低(P <0. 05);与POCD组相比,红景天苷组术后7 d百分比升高(P <0. 05)。与对照组比,POCD组和红景天苷组不同时点血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量及海马组织中CB2R和CD11b含量均增加(P <0. 05);与POCD组相比,红景天苷组不同时点各指标含量降低(P <0. 05)。结论红景天苷可改善大鼠骨折术后POCD,其机制可能通过抑制海马CB2R表达和海马小胶质细胞活化,减轻炎性反应有关。     

红景天苷衍生物的合成及其抗疲劳活性研究

目的 设计并合成系列4-取代的新型红景天苷衍生物并研究其抗疲劳作用。方法 通过五乙酰基葡萄糖与不同的4-取代苄基酪醇,经过糖苷化、脱乙酰基合成红景天苷衍生物;采用小鼠负重游泳为实验模型,通过观察测定小鼠的负重游泳时间研究合成衍生物的抗疲劳作用。结果 合成了10个新型红景天苷衍生物;小鼠负重游泳实验显示：阳性对照组（红景天苷）和3a-1组（苯乙基-β-D-葡萄糖苷）的小鼠游泳时间明显高于空白对照组（P<0.05）,差异有统计学意义;其余组均与空白对照组小鼠负重游泳时间相近,差异无统计学意义。结论 本实验设计的红景天苷衍生物合成方法简便、可行;红景天苷及其衍生物苯环上的4位羟基可能与其抗疲劳活性密切相关。     

桂花果实HPLC指纹图谱及9种化学成分含量测定研究

目的建立桂花Osmanthus fragrans果实HPLC指纹图谱及9种化学成分的含量测定方法,为桂花果实的质量控制提供科学依据。方法采用YMC-Pack ODS-A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水(含0.1%磷酸)溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温25℃,进样量10μL,检测波长210 nm,对不同产地桂花果实样品进样分析;采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2012版),建立桂花果实的指纹图谱,同时测定其中9种化学成分含量。结果对不同产地20批桂花果实样品进行指纹图谱研究,共标定了24个峰,指认出其中9个色谱峰。含量测定结果表明,女贞苷G13、特女贞苷、新女贞苷及红景天苷为桂花果实中主要化学成分。经方法学考察,测定方法的精密度和重复性良好,样品在24 h内稳定;红景天苷、毛蕊花糖苷、新女贞苷、特女贞苷、异麦角甾苷、女贞苷G13、槲皮素、芹菜素、山柰酚在一定质量浓度范围内线性良好,加样回收率均在95%～105%。结论建立的桂花果实HPLC指纹图谱及9种化学成分的含量分析方法稳定、可靠,可为桂花果实的质量控制及综合开发提供参考。     

红景天甙联合碳酸钙对老年雌性大鼠骨量、骨代谢和氧化应激水平影响

目的探索红景天甙联合碳酸钙对老年雌性大鼠骨量、骨代谢和氧化应激水平影响。方法将40只24月龄雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为模型组(OP组),红景天甙组(H组),碳酸钙组(Ca组)和红景天甙联合碳酸钙组(H+Ca组),而将10只3个月大鼠作为对照组(NC组)。观察各组大鼠腰椎和双侧股骨骨密度和骨矿物质水平的变化。测定各组大鼠骨代谢指标、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平变化。结果与OP组比较,H、Ca和H+Ca组大鼠腰椎骨密度,双侧股骨骨密度和骨矿物质水平显著升高;治疗12周,H、Ca和H+Ca组血清I型胶原C端肽(CTX-1)、骨钙素、碱性磷酸酶(ALP)、I型前胶原N端肽(PINP)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)水平均显著降低,比较差异有统计学意义(P 0.05);治疗12周,H、Ca和H+Ca组血清SOD和GSH-Px活性明显升高,MDA含量显著降低,差异有统计学意义(P 0.05或P0.01);其中H+Ca组上述指标变化最为显著;差异有统计学意义(P 0.05)。结论红景天甙联合碳酸钙可显著提高老年大鼠的抗氧化能力,增加骨密度,降低骨代谢水平,减少骨矿物质流失,从而预防和治疗骨质疏松症。     

红景天苷对百草枯中毒大鼠肺组织TGF-β1表达的影响

【】 目的 研究红景天苷(SDS)对百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织TGF-β1表达的影响。方法 将130只SD大鼠随机分为正常对照组、PQ模型组、SDS治疗组,后两组又分为1天、3天、7天、14天、21、28天6个亚组,每亚组10只。PQ模型组和SDS治疗组采用一次性灌胃百草枯溶液(20mg/Kg)的方法,制备急性PQ中毒肺损伤模型,染毒1小时后分别给予相同体积的生理盐水、SDS(10mg/Kg)腹腔注射。各组在相应时间点取材,采用免疫组化、RT-PCR测定肺组织中转化生长因子β1(TGF-β1)及其mRNA的表达情况。结果 免疫组化结果显示,与正常对照组比较,PQ模型组、SDS治疗组肺组织TGF-β1表达显著增加(P<0.05),在第14天达到最大值。与PQ模型组各时间点比较,SDS干预组中TGF-β1的表达量低,两者差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示模型组与SDS干预组染毒后第1天大鼠肺组织TGF-β1mRNA水平开始增加,在第14天达到最高值,第28天基因表达恢复正常。SDS治疗组TGF-β1mRNA表达量比模型组低,二者比较有统计学差异(P<0.05)。结论 TGF-β1参与了PQ中毒大鼠肺纤维化病理生理过程,SDS能抑制TGF-β1的表达,减轻PQ中毒大鼠肺损伤。     

Salidroside exerts angiogenic and cytoprotective effects on human bone marrowderived endothelial progenitor cells via Akt/mTOR/p70S6K and MAPK signalling pathways

Background and Purpose

With the increase of age, increased susceptibility to apoptosis and senescence may contribute to proliferative and functional impairment of endothelial progenitor cells (EPCs). The aim of this study was to investigate whether salidroside (SAL) can induce angiogenic differentiation and inhibit oxidative stress-induced apoptosis in bone marrow-derived EPCs (BM-EPCs), and if so, through what mechanism.

Experimental Approach

BM-EPCs were isolated and treated with different concentrations of SAL for up to 4 days. Cell proliferation, migration and tube formation ability were detected by DNA content quantification, transwell assay and Matrigel-based angiogenesis assay. Gene and protein expression were assessed by qRT-PCR and Western blot respectively.

Key Results

Treatment with SAL promoted cellular proliferation and angiogenic differentiation of BM-EPCs, and increased VEGF and NO secretion, which in turn mediated the enhanced angiogenic differentiation of BM-EPCs. Furthermore, SAL significantly attenuated hydrogen peroxide (H₂O₂)-induced cell apoptosis, reduced the intracellular level of reactive oxygen species and restored the mitochondrial membrane potential of BM-EPCs. Moreover, SAL stimulated the phosphorylation of Akt, mammalian target of rapamycin and p70 S6 kinase, as well as ERK1/2, which is associated with cell migration and capillary tube formation. Additionally, SAL reversed the phosphorylation of JNK and p38 MAPK induced by H₂O₂ and suppressed the changes in the Bax/Bcl-xL ratio observed after stimulation with H₂O₂.

Conclusions and Implications

These findings identify novel mechanisms that regulate EPC function and suggest that SAL has therapeutic potential as a new agent to enhance vasculogenesis as well as protect against oxidative endothelial injury.