结肠癌组织中arresten基因的表达

目的:探讨arresten基因在结肠癌组织中的表达及意义。方法:采用RT-PCR检测42例结肠癌癌组织及相应的癌旁组织和远癌组织中arresten mRNA的表达情况。PCR产物经凝胶电泳,比较各组织中arrest-en与β-actin条带的灰度值之比,半定量分析arresten mRNA的表达水平。结果:癌组织中arresten mRNA表达水平(0.43±0.14)低于癌旁组织(0.51±0.13)和远癌组织(0.57±0.11);随着肿瘤分化程度的升高,ar-resten mRNA在癌组织中的表达也增加(P<0.05),但arresten mRNA表达在结肠癌临床分期(TNM)、淋巴结转移和病理类型间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:arresten mRNA在结肠癌组织中低表达,arresten基因在结肠癌的发生发展过程可能发挥重要作用。     

内源性血管生成抑制因子Arresten研究进展

早在1971年,Folkman就提出,肿瘤的生长与转移依赖于新生血管的生成。新生血管沟通循环系统,为肿瘤提供氧气及营养物质,并及时运走代谢产物,促使肿瘤快速生长;新生血管内皮细胞还可以分泌多种生长因子,以旁分泌方式刺激肿瘤细胞增殖;同时通过血液循环将原发癌细胞输送至远处靶器官,为癌细胞提供播散路径。肿瘤血管新生是涉及血管通透性增加、局部基底膜降解、内皮细胞迁移、毛细血管芽生、侵袭周围基质、新血管腔形成等一系列变化的一个多项过程。机体通过调节血管生成因子和抑制因子之间的平衡状态来影响内皮细胞的活动状态,调控血管生成过程。近年来,通过抑制血管生成而抗肿瘤的治疗方法引起人们的广泛关注。     

内源性血管生成抑制因子A rresten在E.coli JM109中的表达及抗新生血管生成的药理学研究

目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体,并进行表达,抑制新生血管的药理学实验中发现,该表达产物具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的功能。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出Arresten基因,构建重组质粒pBV220-Arr转化E.coli JM109进行原核表达,大量表达提取Arresten蛋白,用鸡胚绒毛尿囊膜实验进行活性测定。结果成功构建的重组质粒pBV220-Arr在E.coliJM109菌株中2~8 h均可获得表达,其中诱导4 h表达效率最高,Arresten蛋白可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长,活性功能明显强于血管抑素。结论成功构建Arresten基因重组质粒pBV220-Arr,并可在E.coli JM109菌株中获得表达,Arresten蛋白具有明显的抑制血管生成的作用。     

血管生成抑制因子Arresten研究进展

肿瘤的生长、转移依赖于血管增生，抑制新血管的生成可使肿瘤细胞进入休眠状态并诱导其死亡。本文主要对血管生成抑制因子Arresten的结构、功能以及应用研究作了综述，并对其在肿瘤治疗和新药开发中的意义进行了展望。     

血管生成抑制因子Arresten基因的分子克隆与序列测定

目的 克隆血管生成抑制因子Arresten基因，测定并分析其基因序列。方法 从人胎盘组织中提取总RNA，经逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）扩增出Arresten基因；采用T－A突出端克隆，构建克隆载体pGEM-Arr，测定Arresten基因序列。结果 Arresten基因的克隆中，以特异引物Pr2为反转录引物的Arresten基因的扩增比用Oligo dT的效果好。其序列测定证实Arresten基因克隆成功。结果 Arresten基因需用适当方法克隆，是抗血管生成及肿瘤生成机制研究的基础。     

人Arresten基因的真核表达及其对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的: 真核表达人Arresten蛋白，并研究其对体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移的影响。方法: 用脂质体介导，将含有人Arresten基因的重组质粒pSecTag2-AT转染COS-7细胞；应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染细胞目的基因mRNA表达；收集转染48h后上清液，浓缩后Western blotting分析检测目的蛋白的表达。用转染细胞上清液处理平滑肌细胞后,CCK-8法检测细胞增殖；Transwell小室法检测细胞迁移。结果:RT-PCR结果显示转染Arresten基因的COS-7细胞基因组中存在有目的基因特异性片段（449 bp），表明基因转染成功；Western blotting结果表明转染细胞上清液中有目的蛋白表达。细胞体外增殖分析显示Arresten蛋白可显著抑制血管平滑肌细胞的增殖作用(F=40.154,P<0.01)；Transwell小室法检测显示经对照细胞，载体DNA转染及重组质粒转染的COS-7细胞培养上清液处理的平滑肌细胞迁移数为(28.70±3.97)个、(26.10±4.53)个、(14.00±3.33)个（F=38.915,P<0.01）。结论: 真核表达的人Arresten蛋白能有效抑制体外培养的血管平滑肌细胞的增殖和迁移。     

arresten在CHO细胞的表达及其生物学效应

目的 初步探讨血管生成抑制因子arresten在中国仓鼠卵巢细胞（CHO）中的表达及其生物学效应。方法 用脂质体转染法将真核表达载体pSecTag-arresten导入CHO,抗生素Zeocin筛选获得阳性克隆。RT—PCR检测arresten在mRNA水平的表达,Western blot检测arresten在蛋白水平的表达。将人脐静脉内皮细胞（huvec）分为加DMEM培养组、加SFX无血清培养基培养组及加含arreten的上清培养液组,TransweH小室检测arresten对huvec细胞迁移的影响,Mamgel胶体外管腔生成试验检测arresten对huvec细胞血管形成能力的影响。结果 RT—PCR和Western blot检测显示,arresten在mRNA水平与蛋白水平均有表达。迁移抑制曲线显示,含arresten组的迁移抑制率明显高于对照组（P〈0．05）。加DMEM培养组、加SFX无血清培养基培养组和加含arresten的上清培养液组细胞形成的血管腔分别为16±2、13±1和7±2个,加含arresten的上清培养液组显著低于其他两组（P〈0．05）。提示arresten对huvec细胞的迁移和血管形成具有抑制作用。结论成功构建arresten的真核表达体系,并发现arresten因子可抑制huvec细胞迁移和管腔形成,这可能是其抑制血管生成的途径之一。     

Arresten抑制HUVEC细胞增殖和管腔形成的实验研究

目的:探讨血管生成抑制因子arresten对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖和体外血管腔形成的影响,了解其抑制血管生成的途径。方法:采用MTT比色法,观察不同浓度的arresten对HUVEC细胞增殖的影响;Matrigel胶体外管腔形成试验检测arresten对HUVEC细胞形成血管的影响。结果:MTT比色法显示,arresten对HUVEC细胞增殖具有抑制作用,随着浓度的增加,arresten对HUVEC细胞增殖抑制作用也增强,但当其浓度增加到800 ng/mL后其增殖抑制率不再提高; arresten浓度为0、400及800 ng/mL时,HUVEC细胞形成的血管腔数分别为17±2、9±1及5±1。结论:Arresten能够抑制HUVEC细胞的增殖,并抑制HUVEC细胞形成血管腔。     

Prokaryotic Expression and Biological Activity Analysis of Human Arresten Gene

To express recombinant arresten in Escherichia coli (E. Coli) and investigate its biological activity, prokaryotic expression vector of human arresten gene was constructed by gene engineering. Human arresten gene was amplified from recombinant plasmid pGEMArr by polymerase chain reaction (PCR), and inserted into prokaryotic expression vector pRSET containing T7 promoter. Restriction analysis and DNA sequencing verified that the arresten gene was correctly cloned into the expression vector. The recombinant plasmid pRSETAt was subsequently transformed into E. coli BL21 (DE3), and the target gene was expressed under induction of IPTG. SDS-PAGE analysis revealed that the recombinant protein with a molecular weight of 29 kD (1 kD=0. 992 1 ku) amounted to 29% of the total bacterial proteins. After purification and renaturation, the recombinant protein could significantly suppress the proliferation of human umbilical vein endothelial cells(HUVECs). These results suggested that the expression of a biologically active form of human arresten in the pRSET expression system laid a foundation for further study on the mechanistic insight into arresten action on angiogenesis and the development of powerful anti-cancer drugs.     

arresten对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的抑制作用的研究

目的探讨arresten抑制人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的作用。方法构建包含arrestenc DNA的分泌型真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-ss-arresten,并以脂质体法将重组质粒转染至SGC-7901细胞。蛋白印迹法（Western blot）检测SGC-7901是否分泌表达arresten,同时,通过生长曲线绘制及生长周期测定的方法了解上述转基因措施本身对SGC-7901细胞的体外生物学特性的影响。将转基因的SGC-7901细胞株接种至裸鼠皮下,使其在接种局部表达arresten,观察肿瘤生长情况。结果成功构建了分泌型真核表达载体pcDNA3．1（＋）-ss-arresten,并获得了可分泌表达arresten的人胃癌SGC-7901细胞株。质粒转染对SGC-7901细胞增殖特性无影响。转基因SGC-7901细胞的裸鼠移植瘤生长缓慢。结论arresten抑制人胃癌SGC-7901移植瘤的生长,其途径可能是通过抑制其滋养血管的生长而实现。