邻苯二甲酸二丁酯致大鼠隐睾睾丸和附睾病理组织学改变研究

目的：邻苯二甲酸二丁酯（DBP）孕晚期染毒诱导子代雄鼠隐睾的发生和探讨隐睾睾丸、附睾病理组织学的改变。方法：孕鼠40只，随机分组，在怀孕14-18天期间，每天分别灌胃给予大豆油（A组）、DBP100mg／kg（B组）、500mg／kg（C组）、800mg／kg（D组）。出生70天后观察雄仔鼠隐睾发生率及隐睾睾丸、附睾病理组织学改变。结果：C、D组雄仔鼠隐睾发生率为10．8％和63．5％；隐睾睾丸、附睾的脏器系数显著减轻；睾丸生精上皮萎缩，生精细胞层减少甚至消失，曲精小管体积减小；同时附睾管腔中精子缺如。电镜下隐睾睾丸中出现异常的支持细胞。结论：睾丸是DBP主要作用的靶器官；中、高剂量DBP孕晚期染毒可致雄仔鼠隐睾的发生、睾丸生精上皮的损害，从而影响其生育能力。     

邻苯二甲酸二丁酯导致雄性大鼠子鼠尿道下裂畸形及其机制研究

目的:邻苯二甲酸二丁酯(DBP)孕晚期染毒诱导雄性SD大鼠子鼠发生尿道下裂畸形,并进一步探讨DBP致雄性子鼠发生尿道下裂的分子作用机制。方法:孕鼠20只,怀孕14~18 d,随机分为对照组和DBP染毒组,每天分别予大豆油及DBP 750 mg/kg灌胃。出生后(PND)1 d,统计雄性子鼠中尿道下裂的发生率,观察尿道下裂雄性子鼠生殖结节的病理学改变。放射免疫法检测血清雄激素水平,实时荧光定量PCR和Western印迹检测生殖结节中雄激素受体(AR)、音猬因子(Shh)、骨形态发生蛋白4(Bmp4)和成纤维细胞成长因子8(Fgf8)的mRNA和蛋白表达水平。结果:对照组中无尿道下裂发生,DBP染毒组中雄性子鼠尿道下裂发生率为43.6%,病理学检查发现生殖结节典型的尿道下裂畸形。尿道下裂雄性子鼠的血清雄激素水平[(0.49±0.05)ng/ml]较对照组[(1.12±0.05)ng/ml]明显降低(P0.05),生殖结节中AR、Shh、Bmp4和Fgf8基因的mRNA水平(0.50±0.05、0.65±0.07、0.42±0.05、0.46±0.04)较对照组(1.00±0.12、1.00±0.15、1.00±0.13、1.00±0.12)明显降低(P0.05),蛋白水平(0.34±0.05、0.51±0.07、0.43±0.05、0.57±0.04)较对照组(1.00±0.09、1.00±0.12、1.00±0.11、1.00±0.13)明显降低(P0.05)。结论:孕晚期DBP染毒可以导致雄性子鼠发生尿道下裂畸形。DBP通过降低雄性子鼠血清雄激素水平和生殖结节中AR、Shh、Bmp4、Fgf8基因的表达,影响生殖结节的正常发育,是DBP导致尿道下裂畸形发生的可能机制。     

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠精子顶体酶活性的影响

目的：观察邻苯二甲酸二丁酯对大鼠精子顶体酶活性的影响。方法：选取SD大鼠150只,随机分为3个周期进行灌胃给药即30 d、60 d、90 d,每个给药周期又分为5个实验组,每组10只动物,即空白对照组、溶剂对照组、邻苯二甲酸二丁酯高中低3个剂量组（1000、200、50 mg·kgbw-1）。灌胃30 d、60 d、90 d后分别测定大鼠精子中顶体酶的浓度。结果：给药60 d、90 d时,邻苯二甲酸二丁酯的中、高剂量组大鼠精子顶体酶的浓度与溶剂对照组比较明显降低;邻苯二甲酸二丁酯的中、高剂量组60 d、90 d大鼠精子顶体酶的浓度与30 d比较明显降低。结论：邻苯二甲酸二丁酯对大鼠精子顶体酶的活性具有明显的抑制作用。     

邻苯二甲酸二丁酯对小鼠卵巢功能的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对小鼠卵巢功能的影响.方法 将雌性昆明小鼠按体重随机分为高(400mg/kg)、中(40mg/kg)、低(4mg/kg)DBP染毒组和1个溶剂对照组(二甲基亚砜),每组12只.每天腹腔注射1次[0.005ml/(g·d)],连续染毒14 d.阴道脱落细胞涂片法观察动情周期变化,分别于终止染毒第1、14天处死,分离卵巢和子宫,计算脏器系数,并观察卵巢病理变化.结果 各染毒组小鼠食欲降低,活动减少,精神萎靡不振,被毛光泽度下降,部分出现腹泻,体重下降;对照组小鼠食欲正常,精神较好,被毛有光泽.不同组别小鼠染毒前、后体重比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).中、高剂量组小鼠动情后期、间期和动情周期时间长于对照组,高剂量组小鼠动情后期、间期和动情周期时间长于低剂量组,差异均有统计学意义(P＜0.05).随着染毒剂量的增加,小鼠动情周期时间逐渐延长,呈剂量-反应关系(rs=0.677,P＜0.001),并主要表现为动情后期和动情间期的延长.终止染毒第1、14天,高、中、低剂量组小鼠卵巢脏器系数与对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).终止染毒第1天,高、中、低剂量组小鼠子宫脏器系数高于对照组,终止染毒第14天,中、高剂量组小鼠子宫脏器系数高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).随染毒剂量的增高,子宫脏器系数有升高的趋势,呈剂量-反应关系(rs=0.564,P=0.010).终止染毒第1天,高剂量组成熟卵泡数低于对照组,中、高剂量组闭锁卵泡数高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01);终止染毒第14天,高剂量组闭锁卵泡数高于对照组,差异有统计学意义(P《0.05).结论 邻苯二甲酸二丁酯可影响小鼠卵巢的内分泌功能及卵泡的发育、成熟,在体内可能具有类雌激素作用.     

尿道下裂仔鼠阴茎蛋白质组学分析及膜联蛋白A3的表达变化研究

目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)胚胎期暴露对仔鼠阴茎组织蛋白表达谱的影响,分离并鉴定差异表达蛋白质。验证膜联蛋白A3在仔鼠阴茎中的表达变化,初步探讨其在尿道下裂发生中的作用。方法:SPF级SD孕鼠20只,妊娠14～18d(GD14～GD18),随机均分为2组,实验组给予DBP按800mg/kg染毒孕鼠,对照组按大豆油5ml/kg,2组孕鼠均每天灌胃1次连续5d。出生后3d取出实验组尿道下裂雄性仔鼠阴茎和对照组正常雄性仔鼠阴茎,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析,筛选出的差异蛋白质点利用质谱技术进行鉴定,并运用Western印迹和免疫组化法分析膜联蛋白A3在仔鼠阴茎中的表达变化。结果:共筛选出31个差异表达蛋白,其中17个通过质谱分析和SwissProt蛋白数据库检索得到鉴定,包括丙酮酸激酶M2、α烯醇化酶、膜联蛋白A3等。膜联蛋白A3相对表达量在尿道下裂组为1.851±0.014(n=10),正常对照组为2.603±0.012(n=10),两组的差异具有显著性(P<0.05)。膜联蛋白A3主要定位于仔鼠尿道上皮细胞。结论:运用蛋白质组学方法,建立了DBP孕期暴露致尿道下裂雄性仔鼠与正常仔鼠阴茎蛋白质差异表达谱系。膜联蛋白A3的表达变化可能在尿道下裂尿道沟融合障碍过程中发挥重要作用。     

邻苯二甲酸二丁酯暴露对青春期雌性大鼠卵巢P450scc基因表达的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对青春期雌性大鼠的生殖毒性作用及作用机制.方法:21d龄SPF级雌性SD大鼠,随机分为DBP250 mg/kg、500 mg/kg、1 000 mg/kg3个染毒组和溶剂对照组(玉米油),连续8周灌胃染毒.染毒结束后,在动情前期对大鼠实施处死,取动脉血,利用放射免疫荧光法检测血清中孕酮(P)水平;取卵巢组织提取mRNA,实时荧光定量RT-PCR检测大鼠卵巢组织细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA表达水平.结果:各处理组间大鼠血清P水平有统计学差异(F=4.306,P=0.014),与对照组比较,DBP 1 000 mg/kg剂量组大鼠血清P水平降低(P＜0.05),与对照组比较,250mg/kg及500mg/kg剂量大鼠血清P水平无统计学差异.各处理组间大鼠卵巢P450scc mRNA表达水平有统计学差异(H=15.591,P＜0.01),与对照组比较,DBP 250 mg/kg、500 mg/kg、1 000 mg/kg剂量组大鼠卵巢P450scc mRNA表达水平降低(P＜0.01),各剂量组间卵巢P450scc mRNA表达水平比较无统计学差异(P＞0.05).结论:DBP可使青春期雌性大鼠卵巢P450scc表达降低,提示DBP对雌性大鼠产生生殖毒性.     

邻苯二甲酸二丁酯对小鼠骨髓微核和精子形态的影响

目的了解邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对微核试验和精子畸形试验的影响。方法将昆明种小鼠随机分为5组,DBP染毒剂量为500mg/kg(低剂量组),1000mg/kg(中剂量组)和2000mg/kg(高剂量组),以及阴性对照组(玉米油)和阳性对照组(环磷酰胺,40mg/kg),每只小鼠计数1000个骨髓嗜多染红细胞(PCE)和每个剂量组的小鼠计数1000个精子的形态。结果中、高剂量组微核率与阴性对照组相比明显升高(P<0.05),且各剂量组微核率随染毒浓度的增加而升高,呈现剂量-反应关系(r=0.937,P<0.01);中、高剂量组精子畸形率与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),且各剂量组精子畸形率随染毒浓度的增加而升高,呈剂量-反应关系(r=0.904,P<0.01),畸形精子中以无钩为最多,其次是香蕉形、尾折叠、双头,分别为4.5%、3.09%和1.32%,结论DBP染毒在一定剂量下对小鼠骨髓微核试验和精子畸形试验呈现阳性结果。     

邻苯二甲酸二丁酯和苯并[a]芘联合染毒对大鼠睾丸支持细胞的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯和苯并[a]芘单独或联合染毒对大鼠睾丸支持细胞增殖及乳酸分泌的影响.方法 分离纯化大鼠睾丸支持细胞,油红O染色鉴定纯度大于90%后,以0.1、1、10、100、500 μg/ml 邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)和0.01、0.1、1、10、100 μg/ml 苯并[a]芘[benzo(a)pyrene,BaP]单独或依次联合染毒,用MTT法检测对支持细胞增殖的影响,并测定培养液中的乳酸含量.结果 DBP染毒后100 μg/ml 吸光度值[D(490)]显著高于对照组(P＜0.01).BaP染毒各组的D(490)值与对照组比较,无统计学差异.DBP 100 μg/ml BaP 10 μg/ml联合染毒组D(490)值显著上升(P＜0.01),而在500 μg/ml DBP 50 μg/ml BaP联合染毒组D(490)值下降(P＜0.05).DBP 100 μg/ml组、 100 μg/ml DBP 10 μg/ml BaP组和500 μg/ml DBP 50 μg/ml DBP组培养液中的乳酸显著增加(P＜0.01),DBP 500 μg/ml组和BaP 50 μg/ml组培养液中的乳酸含量也增高(P＜0.05).结论 一定剂量DBP可刺激支持细胞增殖并增加乳酸分泌,BaP虽不抑制支持细胞的增殖,但可使乳酸分泌增加.二者联合作用,在一定剂量下以DBP的效应为主,但在高剂量可抑制细胞增殖,呈现一定的协同作用.     

邻苯二甲酸二丁酯对雌性果蝇生育力的影响

目的研究邻苯二甲酸二丁酯（di-n-butyl phthalate,DBP）对雌性果蝇生育力的影响。方法将雌性果蝇随机分为5组,分别给予含DBP0%、0.1%、0.4%、1.6%、6.4%的培养基喂饲,10 d后与雄蝇配对产子,每日观察并记录子代孵化数。结果随着DBP浓度的增加,0.1%、0.4%、1.6%浓度组雌性果蝇产卵时间逐渐延长,子代数量逐渐增多,1.6%浓度组与对照组比较有差异。但6.4%浓度组雌蝇的不育率比对照组高（P〈0.01）,产卵时间缩短,后代数量减少。结论低浓度的DBP能增加雌性果蝇的生育力,高浓度的DBP使其生育力降低。     

邻苯二甲酸二丁酯对F1 代仔鼠睾丸损害的可逆性恢复特性

目的研究和探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对F1代仔鼠睾丸损害是否具有可逆性恢复的特性。方法在宫内暴露和哺乳期(妊娠1d至仔鼠出生21d),每日每kg体重0、50、250和500mg DBP灌胃染毒孕鼠(每组10只),从解剖学、病理学等角度观察DBP对不同发育阶段(出生14、21和70d)F1代雄性大鼠的睾丸损害。结果与对照组相比,虽然不同发育阶段大鼠睾丸重量及系数没有明显统计学意义,但与对照组相比较,250、500mg／L组出生14d大鼠生精上皮变薄,Sertoli细胞数量明显减少(分别减少至对照组的84％和86％),并出现空泡样改变;出生21d时,Sertoli细胞数量和形态基本恢复正常,但有少量生精细胞脱落;至出生70d时,个别大鼠睾丸出现曲细精管变性、生精上皮萎缩等不可逆性损害。结论DBP宫内暴露和哺乳期染毒可损害F1代大鼠睾丸Sertili细胞,但随着仔鼠的发育,DBP致Sertoli细胞损害作用具有部分可逆性恢复的特性。