肠杆菌科细菌多重耐药操纵子的研究进展

多重耐药（mar)操纵子是广泛存在于肠杆菌科细菌染色体上的一个压力反应调控中心。mar位点突变或细菌暴露于诱导物时，其编码的转录激活蛋白MarA超表达，后者通过调节众多基因转录及改变细菌对药物的转运，使细菌对多种结构不相关的抗生素、有机溶剂及氧化作用压力的抗性增加，形成多重耐药（Mar)表型。     

医源性表皮葡萄球菌ica操纵子转录水平对生物膜表型的影响

目的探讨表皮葡萄球菌临床株中ica操纵子转录水平对生物膜表型差异的影响。方法采用微量板半定量法检测细菌生物膜表型,用Southern杂交和聚合酶链反应检测icaA基因及ica操纵子中是否存在插入序列,用RNA狭缝杂交和逆转录实时定量聚合酶链反应检测icaA基因和icaR基因的转录水平;采用χ2检验分析icaA基因与生物膜表型的相关性,采用单因素方差检验分析转录水平的差异。结果101株临床分离株中,32.7%(33/101株)能形成生物膜,其中22株icaA基因阳性;67.3%(68/101株)无生物膜形成,其中15株icaA基因阳性。15株icaA /生物膜表型-分离株中,ica操纵子各基因中均不存在插入序列,icaA基因的转录水平明显低于生物膜阳性的ATCC35984株(P<0.05),其中2株icaR基因的转录水平高于ATCC35984株(P<0.01)。结论表皮葡萄球菌临床株中ica操纵子的存在与生物膜表型相关(χ2=19.045,P<0.01);ica操纵子的低转录是icaA /生物膜表型-临床株不形成生物膜的主要原因。     

人MxA基因启动子-88/-123位多态性荧光PCR检测方法的建立及临床应用

目的 建立一套快速、灵敏和特异的人抗黏液蛋白A(MxA)基因启动子中干扰素刺激应答元件-88/-123位多态性检测体系,为合理应用IFN-α治疗慢性乙型肝炎提供分子生物学检测手段.方法 对经IFN-α治疗的患者进行HBV DNA、HBV基因分型及MxA基因启动子中干扰素刺激应答元件-88/-123位多态性位点检测,确定基因多态性与IFN-α治疗效果之间的关系.通过各种条件优化实验,建立MxA基因启动子中干扰素刺激应答元件-88/-123位多态性荧光PCR检测体系,并通过与DNA序列分析法检测结果的对比,验证荧光PCR检测体系的灵敏性及特异性,从而对该体系的临床适用性进行初步评估.采用卡方检验计算P值、回归分析法计算对比率和95%可信区间.结果 MxA基因启动子干扰素刺激应答元件中-88位为G/T杂合型和-123位为C/A杂合型者皆为IFN-α敏感型,-88位为G/G纯合型和-123位为C/C纯合型者为IFN-α不敏感型.与DNA序列分析的金标准相比,荧光PCR检测的符合率为99.65%.结论 荧光PCR检测体系,可灵敏、快捷地检测患者MxA基因多态性位点.     

问号钩端螺旋体MazF蛋白对巨噬细胞的毒性作用分析

目的了解问号钩端螺旋体（简称钩体） MazEF毒素-抗毒素系统中MazF蛋白对巨噬细胞的细胞毒性及其机制。方法采用原核表达系统表达问号钩体赖型赖株MazEF毒素-抗毒素系统中的MazE和MazF蛋白（ rMazE和rMazF ）。采用DNA和RNA降解试验确定rMazF的DNA或RNA酶活性以及rMazE抑制rMazF酶活性的作用。采用实时荧光定量RT-PCT、Western blot 和激光共聚焦显微镜法,分别检测问号钩体赖株感染THP-1单核细胞时mazE和mazF基因转录、表达及分泌情况。采用CCK-8法和流式细胞术检测mazF基因产物对THP-1细胞的细胞毒性及死亡方式。结果 rMazF能水解问号钩体赖株和 THP-1细胞的RNA,但无DNA酶活性, rMazE 能抑制rMazF的RNA酶活性。感染THP-1细胞后,mazE-mRNA和mazF-mRNA及MazE和MazF蛋白表达水平显著升高,但仅有MazF蛋白外分泌。 mazF 基因产物对 THP-1细胞有细胞毒性并引起细胞坏死。结论MazEF毒素-抗毒素系统中具有RNA酶活性的MazF蛋白是问号钩体的毒力因子,可引起感染的巨噬细胞坏死。     

RUNX3 基因启动子甲基化与膀胱移行细胞癌发生的关系

目的 检测抑癌基因RUNX3 启动子区CpG 岛甲基化状态及其在 BTCC 中 mRNA 和蛋白表达水平.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation - specific PCR,MSP)技术检测 BTCC 中RUNX3 基因启动子区域甲基化状态,RT - PCR 和 Western blot 法分别检测其 mRNA 和蛋白表达水平.结果 RUNX3基因在正常膀胱组织中未发生甲基化,而在 BTCC 组织中甲基化频率占46.9%(15/32),并且随着肿瘤分级、分期的增加,其甲基化水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01).在15例启动子异常甲基化的癌组织标本中,14 例同时伴有 RUNX3 基因表达缺失或下调,二者存在明显的相关性(r=0.6472,P=0.012).RUNX3 mRNA 和蛋白表达在正常膀胱组织和 BTCC 组织分别为93.8%(30/32)、34.4%(11/32),二组间表达差异有统计学意义(P相似文献   

宫颈癌及子宫内膜癌细胞系中hTERT启动子活性的研究

目的 :探讨Hela及HHUC细胞系中hTERT启动子的活性及其与hTERTmRNA表达和端粒酶活性之间的关系。方法 :将hTERT核心启动子基因转入Hela、HHUC细胞系、人正常皮肤表皮细胞及子宫内膜上皮细胞中 ,检测细胞系hTERT启动子的活性、hTERTmRNA表达水平及端粒酶活性。分别以HEK2 93细胞系作为阳性对照 ,HELF细胞系作为阴性对照。结果 :细胞系Hela、HHUC、人正常皮肤表皮细胞及正常子宫内膜上皮细胞中的hTERT启动子活性分别为 2 0 1%、14 9%、0 3%和 0 5 % ;hTERTmRNA相对表达水平分别为 0 6 3、0 5 1、0和 0 ;端粒酶活性分别为 0 393、0 387、0 14 4和 0 15 2。结论 :宫颈癌细胞系及子宫内膜癌细胞系中hTERT启动子活性、hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性均特异性增高 ,而在正常角化细胞及子宫内膜上皮细胞中则被抑制或不表达。hTERT启动子活性水平与hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性之间有显著相关性     

放射线敏感性自杀基因体外杀伤肝癌细胞的实验研究

目的观察可被放射线转录激活的早期生长反应基因 1(earlygrowthresponse 1,Egr 1)启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (herpssimplexvirusthymidinekinase ,tk)对肝癌细胞的高效杀伤作用。方法构建以Egr 1为启动子 ,以tk为目的基因的重组质粒pET ,经脂质体介导转染人肝癌细胞株SMMC 772 1,命名为SMMC/ET细胞 ,经G418抗性筛选、60 Co γ射线照射后 ,加入前药丙氧鸟苷 (ganciclovirGCV) ,测定其对肝癌细胞的杀伤作用。结果与对照组肝癌细胞 ( 0 88± 0 12 )相比 ,经γ射线照射后 ,前药GCV可明显提高对SMMC/ET肝癌细胞的杀伤效率 ( 0 0 7± 0 0 3) (P <0 0 0 1)。结论放射敏感性自杀基因在γ射线作用下可以显著提高对肝癌细胞的杀伤作用。     

翻译偶联对霍乱毒素A,B亚基比例表达的影响

目的：证实霍乱毒素操纵子Ａ,Ｂ基因间存在翻译联,解释霍乱毒素Ｂ亚基基因表达水平是Ａ亚基５倍的机理。方法;构建了适合翻译调控研究的报告质粒,通过在ｃｔｘＡ基因５’及３’端进行移码突变,研究突变对Ｂ亚基基因表达水平的影响。结果：建立合适的研究霍乱霉素基因翻译调控的系统,在ｃｔｘＡ基因的近Ｃ移码突变后,Ｂ基因的表达水平降低到１／５（８０％）。结论：霍乱霉素Ａ,Ｂ亚基基因间存在翻译联调控,这种调控是霍乱毒     

金黄色葡萄球菌生物膜形成与ica操纵子关系探讨

目的 了解不同部位分离金黄色葡萄球菌在不同时间生物膜形成与ica操纵子关系.方法采用结晶紫法测定不同部位在不同时间形成生物膜的含量;采用PCR法测定菌株是否含有ica基因.结果生物膜形成能力强的菌株则ica基因大部分为阳性.结论含有ica基因的金黄色葡萄球菌则生物膜形成的能力较强.