麻风病

20060098 建立巢式PCR和异源双链法检测石蜡标本麻风菌DDS耐药株；20060099 新发和复发麻风患中麻风菌的氨苯砜、利福平耐药基因的检测；20060100 甘肃省麻风病人血缘性与非血缘性亲属家庭发病的对比研究；……[编按]     

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立

.学者论坛·在动物实验中解决临床难题···························，·······································································……顾玉东(3)基因〕:程     

螺旋体传染病

莱姆病临床实验室诊断的研究现状（综述）,梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd基因的克隆、表达及其免疫活性研究,广州市番禹区钩端螺旋体病流行病学特征分析,梅毒螺旋体的巢式PCR检测与基因分型,承德地区莱姆病自然疫源性特征分析,     

SARS病毒基因检测结果与患者病情、病程和体液免疫的关系研究

目的:研究严重急性呼吸综合征患者的病情、病程和特异性抗体产生对SARS病毒基因阳性检出率的影响.方法:采用巢式反转录PCR检测健康人,发烧非SARS患者,不同时期和不同病情SARS患者以及存不存在特异性抗体的SARS患者痰标本中的SARS病毒核酸即RNA.结果:巢式RT-PCR检测SARS患者痰标本中的SARS病毒RNA的敏感度为60.0 %.6 d～10 d组阳性检出率最高,为100 %,高于11 d～25 d组,而11 d～25 d组的阳性检出率又高于＞25 d组(P＜0.01);病情轻组比病情重组的阳性检出率高(P＜0.05);抗体阴性组比抗体阳性组检出率高(P＜0.05).结论:SARS病毒基因检测阳性率在轻病情组比重病情组高,住院时间短组比住院时间长组高,血清特异性抗体阴性组比阳性组高.     

使用C6／36细胞培养结合RT-PCR方法来提高IgM阳性血清样本中DEN-1病毒的检测效率[英]／DePaula SO，Lima DM，Clotteau M，et al／／Intervirology

巴西圣保罗大学DePaula等用登革热感染恢复期血清样本接种C6／36细胞，比较了逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光(IFA)测定1型登革(DEN-1)病毒的效率。     

病理生理学

靶向抑制survivin对胰腺癌细胞增殖和凋亡效应的影响；长期不进展者与艾滋病患者HIV-1 nef特异性CD8^＋T细胞应答的初步研究；Survivin蛋白在膀胱移行细胞癌组织中的表达及临床意义；抗坏血酸抑制核因子KB受体活化子配体诱导RAW 264．7细胞的分化和功能；异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注时核因子xB的活化和炎症因子表达的影响；不稳定性心绞痛患者调脂干预对颈动脉粥样硬化及C反应蛋白的影响；siRNA诱导K562细胞凋亡的实验研究；人巨细胞病毒感染巨核祖细胞及反义寡核苷酸抗病毒感染作用的研究；实时定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓细胞WT1基因表达；高血压合并糖尿病患者颈动脉内膜-中层厚度的观察；丹参对自发性高血压大鼠心肌醛固酮合成的抑制作用及其机制；内源性血管紧张素Ⅱ对大鼠血管钙化的作用；血管内皮生长因子与肿瘤坏死因子-α在佐剂关节炎大鼠滑膜中表达；香烟提取物对人支气管平滑肌细胞DNA的损伤作用及细胞应激的影响；封闭枯否细胞和脾切除对急性肝损伤影响的实验性研究。     

实时定量RT-PCR的原理及方法

实时定量RT-PCR广泛应用于定量检测mRAN表达水平,为基础研究、分子药物学和生物技术研究提供了一种有力的方法。该法具有易操作、高通量、敏感性高和特异性强的特点,随着新酶、新探针和新仪器的发展而得到快速的发展。本文将对实时定量RT-PCR的定量原理、仪器应用、探针种类的研究进展以及细胞因子mRNA表达水平检测上的应用作一综述。     

细胞因子Midkine融合蛋白的表达及其单克隆抗体的制备与应用

目的:克隆细胞因子midkine(MK)基因,表达其融合蛋白,制备抗MK单克隆抗体(mAb)并检测MK在肿瘤细胞中的表达。方法:利用MK基因的特异性引物,通过RT-PCR从人肾癌组织mRNA中扩增人MKcDNA分子。将其定向克隆于原核表达载体中,在大肠杆菌中表达MS2-MK融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用传统的杂交瘤技术,进行细胞融合、筛选、克隆化并制备mAb腹水。用ELISA法分析其Ig亚类,用免疫细胞化学染色法检测MK在肿瘤细胞中的表达。结果:成功地克隆出MK基因并表达了MS2-MK融合蛋白。通过免疫和筛选,获得2株分泌小鼠抗人MKmAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb的Ig亚类分别为IgG1和IgG2a。免疫细胞化学染色显示,2株mAb与人胃癌细胞株MGC803和胃癌组织呈强阳性反应。结论:在原核细胞中获得MS2-MK融合蛋白的表达,并制备出抗MK的mAb,为研究MK的生物学活性提供了条件。     

半巢式PCR技术检测牙菌斑唾液及胃黏膜中幽门螺杆菌

本文通过半巢式PCR对 82例慢性胃炎和十二指肠溃疡患者的牙菌斑、唾液及胃黏膜中的幽门螺杆菌 (Hp)进行了检测。 82例患者中活动期十二指肠溃疡患者 2 4例 ,慢性浅表性胃炎 2 7例 ,慢性萎缩性胃炎 31例 ,其中男性 4 2例 ,女性 4 0例 ,平均年龄 4 2 .3岁。半巢式PCR首先以 1对引物扩增出磷酸葡萄糖胺变位酶基因 (phosphogluco saminemu tasegene ,glmM) 75 6bp的片段作为模板 ,再以半巢式引物扩增出 4 96bp的最终产物。引物 0 :5′ CGCGAGCCACAACCCTTTTGAAG 3′ ;引物 1:5′ CGCGCTCACTTGCAAAGCGCACAC 3′;引物 2 :5′…