兔髓核细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为髓核细胞的研究

目的 研究体外新西兰大白兔髓核细胞(nucleus pulposus cells)与SD大鼠骨髓间充质干细胞(mes-enchymal stem cells,MSCs)共培养时,兔髓核细胞与大鼠MSCs直接和间接接触对MSCs分化为髓核细胞的影响.方法 DAPI (4‘,6-二咪基-2‘-苯吲哚盐酸)标记原代髓核细胞后,分别与第三代MSCs按接触组和非接触组(Transwell培养系统)共培养.每隔24小时应用免疫荧光观察MSCs的形态学变化,并用RT-PCR方法检测Ⅱ型胶原和可凝集蛋白多糖(Aggrecan)的表达.结果 直接接触培养组中可见分化的MSCs形态和功能接近髓核细胞;非直接接触组的MSCs未见变化.结论 髓核细胞与MSCs的直接接触,是诱导MSCs分化为髓核细胞的重要因素.     

SDF1/CXCR4信号轴在退变髓核细胞诱导血管新生中的作用

目的探讨髓核细胞(NPCs)分泌的基质细胞衍生因子1(SDF1)对退变椎间盘血管化的影响及相关分子机制。方法培养退变椎间盘NPCs,病毒转染分别上调和下调SDF1表达,根据SDF1表达情况分为DOWN、D和UP 3组;培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),将不同组NPCs或其条件培养基与HUVECs进行共培养,期间还在共培养体系中加入CXCR4受体抑制剂AMD3100,CCK8检测、细胞迁移实验、管腔形成实验观察HUVECs成血管能力。结果各组NPCs构建成功;与HUVECs共培养后,利用CCK8法、细胞迁移实验、管腔形成实验检测结果显示随SDF1表达升高,内皮细胞活力、迁移能力、管腔形成能力也随之升高(P0.05);当加入AMD3100后,内皮细胞活力、迁移能力、管腔形成能力在D组和UP组均受到显著抑制(P0.05)。结论人退变椎间盘NPCs表达SDF1。SDF1/CXCR4信号轴影响内皮细胞活力、迁移能力和成管能力,并在退变椎间盘血管化中发挥重要作用。     

体外不同比例再生肝细胞与结肠癌细胞的共培养

Objective To investigate the proliferation potential of colon cancer cells co-cultured with different proportions regenerating hepatocytes and role of the cell growth factors related to liver regeneration in vitro.Methods Active regenerating hepatocytes were obtained by collagenase perfusion in situ of rats models underwent 70% liver resection after 24 hours.Co-cultures with different proportions of hepatocytes to human colon cell line SW480 were performed respectively.The proportion of hepatocytes to human colon cell line SW480 Was 10:1 in group A,1:1 in group B.There was only human colon cell line SW480 in group C(control group).Proliferation capacity was assessed with the percentage by 3H-thy incorporation.Concentration of epidermal growth factor(EGF),insulin-like growth factor-1(IGF-1)and hepatocyte growth factor(HGF)was analyzed by ELISA.Results There was no significant difference among the 3 groups in 3H-thy incorporation percentage,and concentration of EGF,IGF-land HGF after 24 hours' culture(P>0.05).3H-thy incorporation percentage(15.9±1.4,13.2±1.5),and concerntration of EGF [(722.9±55.4)ng/L,(498.2+41.5)ng/L]and IGF-1[(755.2±35.7)ng/L,(538.1±37.5)ng/L]in Group A and B were higher than that in group C after 72 hours(P<0.05).Especially the indexes above in group A were higher than that in group B(P<0.05).there was no significant difference in concerntration of HGF among the 3 groups after 72 hours(P>O.05).Conclusions These results imply that the regenerating hepatocytes contribute to the hyperproliferative state of co-culturing colon cancer cells.The mechanism maybe have relationship with EGF and IGF-1 high expression in colon cancer cells caused by growth signals coming from hepatocytes.     

脂肪间充质干细胞向髓核样细胞定向分化研究

目的探讨SD大鼠来源的髓核(nucleus pulposus,NP)细胞促使脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)向NP样细胞定向分化的分子机制。方法采用酶消化法取脂肪细胞,极限稀释法纯化细胞;采用组织块培养法培养NP细胞。利用流式细胞技术,免疫荧光及RT-PCR检测对AMSCs及NP细胞进行鉴定。结果 AMSCs中Sca-1和CD44的阳性率较高,而CD45和CD11b阴性,共培养组荧光强度明显亮于单纯AMSCs组,AMSCs在NP细胞的诱导下聚焦蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)、Sox-9等表达水平较对照组高。结论共培养环境中髓核细胞分泌的可溶性因子TGF-1能促使AMSCs向NP样细胞定向分化。     

人子宫内膜细胞共培养体系对早期鼠胚体外发育的影响

目的:研究人子宫内膜共培养体系对早期鼠胚体外发育的影响及移植后的妊娠情况。方法:将2-细胞小鼠胚胎与人子宫内膜细胞进行体外共培养,对照组为无营养细胞的单纯培养液,每日在显微镜下观察胚胎的发育情况。将培养到囊胚期的胚胎移植回小鼠的子宫腔,观察着床情况。结果:共培养体系中68.3％的2-细胞胚胎发育至桑椹胚期,50.8％发育至囊胚期,囊胚的孵化率为36.7％,胚胎的着床率为25.0％。而对照组只有24.8％的2-细胞胚胎发育至桑椹胚期,11.4％到达囊胚期,且其中大部分为早期囊胚即停止发育。另外对照组细胞碎片出现早且多,卵裂球不均匀,胚形态差,移植后胚胎的着床率仅为3.1％。结论:人子宫内膜细胞共培养体系可以促进小鼠胚胎的体外发育,改善胚胎的质量,提高着床率。     

胚胎体外共培养研究的进展

共培养是模拟早期胚胎在体内发育环境,延长体外发育时间,提高囊胚获得率的方法.因其可提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的成功率,特别是提高反复种植失败(IF)者的妊娠率.尽管有不少争议,近年仍有较多与共培养有关的研究.对共培养系统的改进、应用、作用机制的探讨作介绍.     

人分泌早期子宫内膜共培养体系对早期鼠胚凋亡的影响

目的研究人分泌早期子宫内膜共培养体系对早期鼠胚凋亡的影响。方法将2一细胞期鼠胚与子宫内膜(A冻融、B传代)共培养以及单一培养液培养(C组)。72h后对桑椹期鼠胚用TUNNEL法进行凋亡检测。结果共培养组鼠胚的凋亡率明显低于单一培养组，且不受内膜细胞传代及冻融的影响；共培养组优质胚胎数均高于对照组，而共培养组之间无明显差异。结论共培养人分泌早期子宫内膜能减少早期鼠胚的凋亡，提高胚胎体外发育的质量，延长体外培养时间。     

细胞共培养技术在医药研究中的应用

细胞共培养由于能更好地模拟体内环境,便于更好的观察细胞与细胞、细胞与培养环境之间的相互作用以及探讨药物的作用机制和可能的作用靶点,填补了单层细胞培养与整体动物实验研究的鸿沟,近年来倍受医药领域的关注,成为药物研发、生物制药领域的研究热点.细胞共培养方法包括直接共培养和间接共培养,主要用于疾病病理基础、新型治疗手段以及药物活性筛选的研究.现有的细胞共培养技术主要用于单一药物的药效学研究,用于联合药物相互作用的研究甚少.中药复方之间协同配伍,减毒增效.细胞共培养技术符合中药多成分、多靶点的作用特点,这对于未来探讨中药联合用药对机体的作用及机制的研究具有一定参考价值,为中药及复方研究提供了一种新的手段.该文就细胞共培养技术的方法与运用进行了概述,并对该技术运用于中药及复方的研究进行了展望.     

健脾消癌方调控巨噬细胞M2极化对结直肠癌细胞侵袭作用的研究

目的 探讨健脾消癌方调控巨噬细胞M2极化对结直肠癌HCT116细胞侵袭转移能力的影响。方法 使用佛波酯诱导THP-1细胞成M0型巨噬细胞,通过Transwell法构建HCT116细胞与M0型巨噬细胞共培养体系,设立空白血清对照组、健脾消癌方含药血清组、IL-4+空白血清组、IL-4+健脾消癌方含药血清组。RT-PCR法检测巨噬细胞M2极化相关基因C-C基序趋化因子22(C-C motif chemokine22, CCL22)、精氨酸酶-1(arginase-1, Arg-1)表达,Transwell法检测HCT116侵袭转移能力,Western blot法检测HCT116中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase, MMP-9)蛋白表达水平。结果 与空白血清对照组比较,IL-4+空白血清组能上调CCL22、Arg-1表达（P<0.01）,下调HCT116细胞E-cadherin表达、上调Vimentin、MMP-9表达（P<0.01）,增加结直肠癌HCT116细胞侵袭数（P<...     

纳米氧化铝对血脑屏障通透性影响的体外研究

目的建立体外血脑屏障模型,评价纳米氧化铝对血脑屏障通透性的影响。方法粒度仪测定纳米氧化铝粒径及电位,透射电子显微镜观察纳米氧化铝形态与尺寸。从新生1～3 d Wistar鼠取大脑皮质分别原代培养脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞,并进行免疫组化鉴定。应用Transwell进行两种细胞共培养建立体外血脑屏障模型,并对模型的有效性进行鉴定。以125、250和500μmol/L的50 nm氧化铝对血脑屏障模型进行染毒,比较染毒前后血脑屏障模型对芦丁通透性变化。以500μmol/L纳米氧化铝对血脑屏障模型进行染毒,分别比较0、2、4、6和8 h不同染毒时间对血脑屏障通透性的改变。结果芦丁吸光值检测显示:与0μmol/L纳米氧化铝组相比,125μmol/L组差异无统计学意义,250和500μmol/L组血脑屏障通透性均明显增加(P<0.05)。与0 h组相比,2、4、6和8 h组血脑屏障通透性均明显增加(P<0.05)。结论体外血脑屏障模型实验研究结果显示,纳米氧化铝可以损伤血脑屏障,引起血脑屏障通透性增加。