NRP-1单克隆抗体对乳腺癌裸鼠移植瘤生长的影响

 目的 探讨NRP-1单克隆抗体（NRP-1 MAb）的特异性，以及不同剂量的NRP-1 MAb治疗乳腺癌裸鼠移植瘤的疗效。方法 Western blot和共聚焦免疫荧光法检测NRP-1 MAb是否识别MCF7细胞上NRP-1蛋白。将MCF7细胞接种于BALB/c裸鼠皮下建立乳腺癌细胞移植瘤模型，并进行瘤组织传代。传代的肿瘤体积生长至300~500 mm3时，随机分为对照组、NRP-1 MAb低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组6只，给药7次。观察荷瘤裸鼠一般状况，测量瘤体大小及裸鼠体重。实验结束时剥离瘤体称重，提取组织蛋白，Western blot检测组织中VEGF蛋白和NRP-1蛋白的表达量。结果 NRP-1MAb成功识别MCF7细胞上的NRP-1蛋白；NRP-1 MAb能够有效抑制MCF7细胞裸鼠移植瘤的生长，低剂量组（1 mg/kg）抑瘤率为47.01%，中剂量组（5 mg/kg）抑瘤率为65.70%，高剂量组（10 mg/kg）抑瘤率为69.19%。。结论 NRP-1 MAb能够识别并有效结合MCF7细胞膜上的NRP-1蛋白，且可抑制MCF7细胞移植瘤的生长，NRP-1 MAb抑制移植瘤的增长可能与下调NRP-1和VEGF表达有关。     

建立一种新的多药耐药的诱导方法

目的建立裸鼠原位肝癌耐药模型。方法培养肝癌细胞系HepG2,建立裸鼠的皮下肿瘤,形成“供瘤鼠”。开腹直视下将瘤块种植于裸鼠的肝包膜下建立原位肝癌模型,通过表阿霉素间歇腹腔化疗,建立裸鼠原位肝癌耐药模型。用体检、B超、CT、剖腹探查监测肝内瘤块生长情况。用逆转录聚和酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测肿瘤耐药基因mdrl-mRNA和p-gp蛋白的表达。结果(1)模型建立无手术死亡(0/25),种植成瘤率为88%(22/25),补种3例全部成功,耐药诱导成功率为80%(16/20);(2)诱导组mdrl-mRNA和P-gp蛋白的表达均明显高于对照组,分别约是对照组的23倍和13倍。结论成功地建立了与临床肝癌相似的裸鼠原位肝癌耐药模型,为进一步研究肝癌多药耐药基因的诊断和逆转提供了良好的动物平台。     

病理性瘢痕裸鼠模型的建立

目的 验证所构建裸鼠瘢痕疙瘩和增生性瘢痕模型在病理性瘢痕研究中的可行性。方法 将0．8cm×0．8cm×0．5cm的人瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组织块移植到裸鼠皮下，大体观察裸鼠及植入物情况。移植后第16天取出移植物与原标本进行下列指标的比较：体积、瘢痕的镜下特征、酸性黏多糖含量及Ⅰ、Ⅱ型胶原含量。结果 移植后裸鼠全部存活且创面愈合良好。瘢痕疙瘩、增生性瘢痕组织块的酸性黏多糖含量移植前分别为3448±1452、1940±509，移植后分别为3237±1871、1809±552，移植前后比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。植入物保持着原有的胶原特性及含量，未检测到细胞变性坏死。结论 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩以适当体积移植到裸鼠皮下，其生物学特性可在一定时间内保持稳定，该动物模型适用于病理性瘢痕的临床研究。     

基因转移FasL治疗人黑素瘤的实验研究

目的探讨体内外基因转移F as配体(F as-ligand,F asL)对恶性人黑素瘤细胞凋亡的影响。方法用携带人F asL cDNA的缺陷型重组腺病毒(A d-F asL),在体外转导两株黑素瘤细胞,并使其表达;通过流式细胞仪、RT-PCR法进行F as/F asL表达检测,TUNEL法及荧光显微镜相关凋亡检测、分析。建立人黑素瘤裸鼠模型,并对其进行体内疗效观察及病理学检查。结果流式细胞仪和RT-PCR检测两株黑素瘤细胞表面均表达F as,不表达F asL,而A d-F asL转导的两株黑素瘤细胞均能表达F asL;A d-F asL能显著诱导两株黑素瘤细胞在体外凋亡或抑制其生长。体内疗效观察黑素瘤荷瘤鼠模型治疗组瘤重(0.48±0.16)g与对照组瘤重(1.02±0.19)g相比,差异有显著性(P<0.05)。肿瘤组织形态学检查,治疗组可见肿瘤细胞凋亡坏死区及炎性细胞浸润。结论F asL基因重组腺病毒在体内外均具有显著诱导人黑素瘤细胞凋亡的效果。     

前列腺癌细胞株Du145裸鼠胫骨部骨肿瘤转移模型的建立

目的:建立一种裸鼠前列腺癌骨转移模型,观察肿瘤局部生长和远处转移情况,并进一步探讨其应用价值。方法:9只6周龄雄性BALB/C裸鼠麻醉后,将前肢及左后肢固定,以1 m l TB针筒-29G针头从胫骨头关节窝,刺入骨髓腔缓缓注入人前列腺癌Du145细胞悬液30μl(约5×106个细胞)至骨髓腔,以建立前列腺癌骨转移模型。观察裸鼠生命体征变化。于濒死状态下处死,取右后肢及其附近淋巴结、肺脏和肝脏等标本,用40 m l/L甲醛固定、石蜡包埋、苏木精-伊红染色后显微镜下观察。结果:9只裸鼠中有6只模型建立成功。接种后平均48 d裸鼠出现跛行现象,右后肢胫骨部可触及米粒大小的包块,质硬,进一步发展至小鼠行走障碍。55 d后出现恶病质,解剖后发现右后肢胫骨部骨质疏松,局部有“腐肉”样组织突出髓腔,填塞肌肉间隙,病理证实为肿瘤组织。肝脏泛黄、被膜皱缩,镜下呈急性重型肝炎的病理改变。结论:胫骨内注射细胞悬液制作裸鼠前列腺癌骨转移模型较好地模拟了人前列腺癌在骨骼微环境中的生长及转归情况,是研究前列腺肿瘤骨转移的适宜模型。     

双特异抗体介导的人单核—巨噬细胞对荷人肝癌裸鼠的抑制作用

观察双特异性单克隆抗体介导的人单核－巨噬细胞在裸鼠体内对肝癌生长的抑制作用。用化学交联法制备双特异性单克隆抗体ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ＇＿２，并将其与单核－巨噬细胞－同注入荷人肝癌裸鼠体内，观察肿瘤体积的变化。     

Frequency of T-Cell Progenitors in Nude Mice

The hypothesis that prothymocytes are distinct from and regulated independently of multilineage hemopoietic progenitors was tested by enumeration of these two cell populations in normal versus congenitally athymic (nude) mice. The absence of a thymus and of peripheral T cells in nude mice had no effect on the frequency of either multilineage progenitors (day 12 CFU-S) or prothymocytes (CFU-T), suggesting that there is no feedback regulation of CFU-T frequency. Thymus seeding from the bone marrow is therefore likely to be regulated by the availability of niches for prothymocyte maturation, rather than by feedback control of prothymocyte production.     

胃癌单克隆抗体在裸鼠移植瘤中的免疫定位和显像

本文采用Ｉｏｄｏｇｅｎ法将鼠抗人胃癌单克隆抗体ＲＳＦ９（ＩｇＭ）予以１３１Ｉ标记，研究ＲＳＦ９在荷人胃癌裸鼠中的定位和显像能力。结果表明，ＲＳＦ９在体内能特异性地与肿瘤组织结合，Ｔ／ＮＴ比值随时间延长逐渐升高，９６ｈＴ／ＮＴ比值均大于２．５，瘤／血比值为２．６９，肿瘤定位指数达５．１８，ＳＰＥＣＴ得到清晰的肿瘤图像。ＲＳＦ９具有良好的体内导向定位能力。ＩｇＭ型单抗也可用于肿瘤显像。     

Enzyme-linked immunosorbent assay for Giardia-specific IgA in mouse intestinal secretions

We describe an ELISA for trophozoite-specific IgA in the intestinal secretions of mice infected with Giardia muris. Using this method, trophozoite-specific IgA was demonstrated in intestinal secretions of Giardia-infected immunocompetent BALB/c mice. Such antibody was undetectable in the intestinal secretions of Giardia-infected athymic (nude) mice. Immunocompetent BALB/c mice are able to clear G. muris infection whereas nude mice are not. The study provides evidence that the chronicity of G. muris infection in nude mice results from lack of intestinal trophozoite-specific IgA in these animals. By means of the ELISA, trophozoite-specific IgA was demonstrated in intestinal secretions from immunocompetent mice in the absence of protease inhibitors.     

抗端粒酶核酶抑制肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的研究

设计针对端粒酶RNA组分的特异性核酶，研究该核酶对肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响。构建含针对端粒酶RNA组分锤头状核酶基因的重组真核表达质粒pBBS212-RZ，以及建立人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤模型。将不同剂量的pBBS212-RZ用脂质体包裹后进行瘤体内多点注射，对照组注射生理盐水或空质粒载体pBBS212。连续注射2l天后，测量移植瘤体积和重量，检测瘤组织端粒酶活性。抗端粒酶特异性核酶使瘤组织端粒酶活性下降(抑制率为72％)，明显地抑制了肝癌细胞裸鼠移植瘤生长(抑制率为68％)，且存在剂量依赖性。抗端粒酶特异性核酶作为一种有效的端粒酶抑制剂，可抑制肝癌细胞的生长，有望在肝癌基因治疗中发挥作用。