利用免疫蛋白质组学鉴定炭疽杆菌蛋白MetK及其免疫原性验证

目的验证免疫蛋白质组中鉴定到的S-腺苷甲硫氨酸MetK蛋白的免疫原性。方法免疫蛋白质组学的方法鉴定到MetK蛋白,通过PCR方法扩增metK基因全长,然后将其克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌DH5α,测序正确后提取质粒转入BL21(DE3)中进行诱导表达。再通过Ni-NTA柱纯化MetK蛋白,纯化后的蛋白免疫SPF级的BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,通过多克隆抗体与炭疽芽孢杆菌A16R全菌蛋白Western印迹检测,验证MetK蛋白的免疫原性。结果与结论成功表达了MetK蛋白,制备了其多克隆抗体,为免疫蛋白质组学鉴定到的蛋白点进行验证,也为研究MetK蛋白的生物学功能研究提供了条件。     

metK、vhbS和adpA的串联表达提高红色糖多孢菌红霉素产量的研究

目的在红色糖多孢菌（S.erythraea,SE）中串联表达S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因metK、透明颤菌血红蛋白基因vhbS和多效调控蛋白基因adpA,构建红霉素高产的工程菌株。方法通过PEG介导的原生质体转化方法,将携带metK、vhbS和adpA基因片段的整合型质粒导入红霉素野生菌株SE的A226及工业菌株WB中,安普霉素抗性筛选与PCR鉴定获得工程菌株,并利用枯草芽孢杆菌抑菌实验与高效液相色谱分析比较出发菌株及其工程菌株的红霉素产量。结果与结论成功构建4株A226衍生菌株A226-P1～P4与3株WB衍生菌株WB-P1～P3。相比野生菌株A226,工程菌株A226-P1～P4的相对红霉素效价提高了8%～25%,其红霉素A产量增加了64%～94%。同样,工程菌株WB-P1～P3的相对红霉素效价与红霉素A产量较出发菌株WB都有明显提高,分别增加了6%～10%与31%～62%。说明metK、vhbS和adpA的串联表达提高SE的红霉素产量具有普适性。