BIO-1211对大鼠支气管收缩和白细胞黏附反应的抑制作用

目的：研究迟缓抗原-4（very late antigen-4，VLA-4）拮抗剂BIO-1211对大鼠支气管收缩和白细胞黏附反应的影响。方法：卵白蛋白致敏大鼠，抗原攻击诱发大鼠支气管收缩反应，采用整体肺功能测定法测定肺阻力（Rt，）和动态肺顺应性（Cdyn）。分离大鼠中性粒细胞，用纤维黏连蛋白（Fn）或血清诱导中性粒细胞产生黏附反应。用组胺和乙酰胆碱诱导豚鼠哮喘反应。结果：给大鼠气雾吸入BIO-1211（1、3、10mg／ml）呈剂量依赖抑制致敏大鼠抗原攻击引起RL的升高和Cdyn降低；BIO-1211（25、50、100、200μg／ml）明显抑制纤维黏连蛋白（Fn）和血清诱导的中性粒细胞黏附反应，其抑制率分别为23．5％、24．6%、61．4％、58．1％和29．99／6、35．9％、35．3％、15．49／6；但BIO-1211（10mg／ml）给豚鼠气雾吸入不能抑制乙酰胆碱和组胺诱导的药物性哮喘。结论：BIO-1211预防致敏大鼠抗原攻击引起的支气管收缩反应，可能与其抑制炎症细胞进入肺组织有关，而对炎症介质无拮抗作用。     

靶向整合素αvβ3受体的新型RGD肽二聚体的131I标记与生物活性的初步评价

目的:对所设计的新型精氨酰-甘氨酰-天冬氨酰(Arg-Gly-Asp,RGD)肽进行131I标记,研究其在肿瘤组织中的靶向性及其在荷瘤鼠体内的生物分布与显像,探讨将其应用于肿瘤血管生成显像的可能性。方法:参照文献报道的对环五肽c(RGDfV)构效关系的研究结果及多肽的化学修饰方法,设计了新型二硫键成环的并经亲水性修饰的cRGD肽二聚体[c(RGD)2],采用ChT法进行131I标记,测定c(RGD)2的亲和常数、标记物的稳定性与油水分配系数;建立荷黑色素瘤动物模型,研究131I-c(RGD)2的体内分布、非标记肽竞争抑制及肿瘤显像。结果:131I对c(RGD)2的标记率为(76.35±2.33)%,经Sephadex G10分离纯化后其放射化学纯度达(95.20±3.25)%。c(RGD)2对受体的亲和常数Ka为(0.137±0.057)×109/mol/L,油水分配系数lgP正辛醇/水为-1.628,131I-c(RGD)2在静脉注射后1 h、3 h、5 h与24 h在肿瘤中的摄取率分别为(0.67±0.13)%ID/g、(0.42±0.08)%ID/g、(0.51±0.11)%ID/g与(0.18±0.02)%ID/g,其在肿瘤中的清除相对缓慢,靶本比(T/NT)随时间延长而增高,静脉注射后24 h,肿瘤与肌肉(T/M)和肿瘤与血液(T/B)的摄取比值分别为4.42±1.70与2.27±0.45。131I-c(RGD)2的肝脏摄取低,静脉注射后1 h肿瘤与肝的摄取比可达2.10±0.60;未标记肽可明显抑制肿瘤对131I-c(RGD)2的摄取。荷瘤小鼠全身显像可见肾显影,在静脉注射后3 h胸部显像可见清晰的肿瘤影像。结论:所设计的通过二硫键成环的c(RGD)2可应用ChT法成功完成131I标记,其可被肿瘤组织特异性摄取,有可能应用于肿瘤血管的生成显像。131I-c(RGD)2的肝脏摄取低,在肿瘤显像中具有一定优势。     

精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸肽对实验性脉络膜新生血管的抑制作用

目的观察精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸（Arg-Gly-Asp-Ser,RGDS）肽对半导体倍频激光诱导的棕色挪威（BN）大鼠脉络膜新生血管（CNV）形成的抑制作用。方法选取27只BN大鼠通过半导体倍频激光（波长为532nm）眼底光凝方式建立CNV模型,另取3只BN大鼠作为正常对照。激光功率、光凝斑直径和曝光时间分别为525mw、50μm及0．05s。光凝后立即将27只模型大鼠随机分为3组,每组9只（18只眼）。分别为大剂量治疗组、小剂量治疗组和对照组,各组每只眼每天玻璃体腔内注射RGDS肽300、100和0μg,各组给药均持续7d。激光光凝后14d各组大鼠均行眼底照相观察、荧光素眼底血管造影（FFA）和吲哚氰绿眼底血管造影（ICGA）检查。每组选取1只大鼠（2只眼）视网膜标本用透射电镜进行毒性观察,8只大鼠16只眼球标本分别行FITC-右旋糖酐标记脉络膜巩膜铺片新生血管定量分析和组织病理学光镜、免疫组化观察,以评估RGDS肽对CNV的抑制效果。结果光凝后14d对照组、小剂量治疗组、大剂量治疗组3组FFA检查中发现荧光渗漏且ICGA检查证实CNV充盈的光凝斑所占百分率分别为69．4％、57．8％、38．9％。脉络膜巩膜铺片新生血管定量分析及组织学切片观察结果显示大剂量治疗组、小剂量治疗组脉络膜新生血管的形成与对照组相比均减少,差异有统计学意义（P〈0．01）。一定剂量的RGDS肽能抑制脉络膜新生血管的生长,并呈剂量依赖关系。透射电镜结果提示玻璃体腔内注射RGDS肽对大鼠视网膜毒性不明显。结论RGDS肽可以抑制实验性脉络膜新生血管的形成,有望成为防治CNV的一种有效方法。     

Dopaminergic neurons: Reversal of effects elicited by γ-butyrolactone by stimulation of the nigro-neostriatal pathway

Summary Angiotensin II, related oligopeptides and acetylcholine were tested on neurones of the cat subfornical organ (SFO). Angiotensin II activates SFO-neurones by local administration onto the surface, by i.v. injection or with the aid of microiontophoretic techniques. Application of related oligopeptides, bradykinin, physalaemin and eledoisin showed no comparable results. Activation of neurones similar to those observed after angiotensin II was obtained with acetylcholine. About 30% of the cells tested were excited by both substances, 56% of tested SFO-cells responded only to angiotensin II, but not to acetylcholine. Atropine sulphate prevents specifically the acetylcholine excitation.Since angiotensin II is involved in regulatory mechanism of thirst, these results suggest the possibility that the SFO is one of the sites, where dipsogenic receptors for this circulating peptide are located.With the aid of grants Nos. 3.774.72 and 3.822.72 of the Swiss National Foundation for Scientific Research and the Dr. Eric Slack-Gyr Foundation, Zürich.     

Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO对实验性近视眼视网膜细胞凋亡的治疗

目的研究鸡近视眼视网膜细胞凋亡的分子机制及Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO的治疗作用.方法眼睑缝合法建立鸡的近视眼模型.玻璃体内注射Ac-DEVD-CHO后按预定时间检影验光,摘眼球,测量眼球外径,并拍眼底照片,用电镜、末端脱氧核糖核苷酸连接酶介导生物素化脱氧尿苷酸末端标记(TUNEL)技术及流式细胞术检测视网膜的凋亡细胞.用免疫组化、流式细胞术和色敏比色法分析视网膜Caspase 3蛋白表达及其活性变化.结果眼睑缝合12周时缝合眼与对照眼相比屈光度加深,眼球外径增大.缝合眼中出现漆裂纹样眼底改变(发生率为45.56%),并在缝合眼视网膜内、外核层发现凋亡细胞,凋亡率高于对照眼(P<0.05),且视网膜Caspase 3蛋白及活性均增高.玻璃体内注射Ac-DEVD-CHO后,缝合眼视网膜细胞的凋亡率和Caspase 3蛋白及其活性均减少,而且Ac-DEVD-CHO抑制视网膜细胞凋亡的作用随剂量的加大而增强.结论 Caspase 3在鸡近视眼视网膜细胞的凋亡过程中发挥重要作用,Ac-DEVD-CHO通过阻断Caspase 3作用而有效抑制视网膜细胞凋亡.     

Caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk治疗兔外伤性视神经损伤的研究

目的 观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)抑制剂z-DEVD-fmk对兔外伤性视神经损伤的治疗效果.方法 实验研究.选取2～3月龄中国白兔52只(104只眼),4只(8只眼)作为空白对照,48只(96只眼)应用液压冲击颅脑损伤仪建立兔外伤性视神经损伤模型,左眼玻璃体腔注射2%二甲基亚砜5μl为对照组(A组);右眼玻璃体腔注射Capase-3抑制剂z-DEVD-fmk 5μl为实验组(B组).给药后1 d、4 d、7 d、10 d、14 d、21 d行闪光视觉诱发电位(F-VEP),视网膜病理学检查,并应用免疫组织化学方法检测视网膜中Caspase-3表达.所得数据采用t检验、单因素方差分析、q检验及直线相关分析进行统计学处理.结果 给药后7 d,实验组的F-VEP P1波潜伏(90.50±7.61)ms与对照组(113.59±12.92)ms相比缩短(t=4.060,P＜0.05),视网膜神经节细胞计数实验组(237.62±8.50)较对照组(207.03±11.04)有所增多(t=-5.843,P＜0.05),均可持续至给药后21 d,实验组的F-VEP P1波潜伏(67.97±7.93)ms与对照组(134.22±8.50)ms相比缩短(t=13.950,P＜0.05);视网膜神经节细胞计数实验组(207.13±12.21)较对照组(156.32±8.45)增多(t=-10.307,P＜0.05).Caspase-3的A值于给药后7 d,实验组(0.396±0.023)低于对照组(0.458±0.024),差异有统计学意义(t=6.200,P＜0.05).F-VEP P1波潜伏期与Caspase-3 A值呈正相关(r=0.95,P＜0.05).结论 z-DEVD-fmk通过抑制视网膜Caspase-3的表达,对兔外伤性视神经损伤具有治疗作用,可促进神经功能的恢复.     

局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸蛋白酶-3和其激活的DNA酶与神经元损伤的关系及半胱氨酸蛋白酶-3抑制剂的保护作用

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及由半胱氨酸蛋白酶激活的DNA酶(caspase-activated deoxyribonuclease,CAD)的表达变化与神经元损伤的关系,研究caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO对缺血神经元的保护作用.方法 实验设干预组和模型组,线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞1 h后再通模型,干预组于侧脑室给予Ac-DEVD-CHO,模型组给予二甲基亚砜(DMSO).应用HE、免疫组织化学、TUNEL染色及电镜观察大鼠大脑中动脉栓塞1 h后再灌注6、12、24、48、72 h时caspase-3和CAD蛋白的表达及神经元损伤程度的变化.结果 HE染色和电镜观察下,模型组和干预组差异不明显;TUNEL染色阳性细胞数除6 h外,两组间其余时间点相比差异具有统计学意义;模型组和干预组caspase-3蛋白表达24 h达高峰,分别为2.360±0.318与0.804±0.206(t'=10.039,P<0.01),12～48 h与模型组同期相比差异均有统计学意义;模型组和干预组CAD蛋白表达于48 h达高峰,分别为3.061±0.567与0.812±0.240(t'=8.960,P<0.01),12～72 h与模型组同期相比差异均有统计学意义.结论 caspase-3-CAD-DNA降解途径是鼠脑缺血再灌注神经元损伤的重要途径,caspase-3抑制剂具有一定程度的神经保护作用.     

寡肽丙-谷胺-甘-缬抑制多聚次黄苷酸-胞苷酸所致流产的作用

目的 探讨人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，hCG）来源的寡肽丙-谷胺-甘-缬（Ala—Gln—Gly-Val，AQGV）是否具有抗poly I：C诱导的小鼠胚胎吸收的作用及其可能的免疫机制。方法 给予异基因妊娠的BALB／c小鼠腹腔注射多聚次黄苷酸-胞苷酸（poly I：C）建立胚胎吸收模型，注射磷酸盐缓冲液组作为对照，观察孕期多次注射AQGV对胚胎吸收率的影响，并采用流式细胞术检测孕9．5d和13．5d胎盘和外周血中免疫活性细胞，包括T细胞、NK细胞、NKT细胞、B细胞和巨噬细胞等的百分率，以及早期活化标志CD25、共刺激分子CD86和细胞内细胞因子IL-12水平。结果 孕9．5d时AQGV组胎盘中巨噬细胞和B细胞所占比率和CD45^＋细胞内IL-12水平显著低于流产模型组；孕13．5d时除上述变化外，AQGV组胎盘中T细胞所占比率显著低于流产模型组；孕9．5d时AQGV组外周血CD45^＋细胞内IL-12水平明显低于流产模型组；孕13．5d时外周血NK细胞、巨噬细胞、B细胞所占百分率和CD45^＋细胞内IL-12水平明显低于流产模型组。与此相应，AQGV组孕9．5d和13．5d胚胎吸收率也显著下降。结论 AQGV可降低胎盘局部和外周血免疫活性细胞的构成比和抑制免疫反应向Th1型转化，从而抑制poly I：C诱导的小鼠胚胎吸收。     

寡肽药物先导结构的发现与优化

本文综述了(1)以纤维蛋白β链降解产物ARPAK及γ链与GPⅡb/Ⅲa结合的关键序列RGD为基础发展新先导结构,例如对ARPAK优化导致的优秀溶栓寡肽GRPAK和QRPAK以及RGD序列对血栓的靶向性认识导致的杂交肽;(2)针对ARPAK、 GRPAK及QRPAK的药代动力学性质导致的酶稳定性高的环肽以及酶稳定性高且可紫外监测的含咔啉羧酸伪肽先导结构;(3)依据ARPAK在体内的代谢产物发现的超短肽先导结构RPAK和PAK;(4)计算机辅助的构象分析;(5)相关寡肽先导结构的前瞻性研究.     

New derivatives of CNC-amino acids and -oligopeptides: Experimental antitumor activity

Summary The experimental antitumor activity of a series of new nitrosoureas is described in which the chloroethylnitrosocarbamoyl (CNC) group is attached to different carrier molecules: amino acids and oligopeptides.Of a group of 10 CNC-amino acid amide derivatives the majority displayed high therapeutic activity in L 5222 leukemia. Some compounds, especialy the proline and sarcosine derivatives, showed favorable therapeutic ratios; 12 CNC-oligopeptides displayed a more or less pronounced therapeutic activity in L 1210 leukemia. Compounds bearing a free carboxy group were less active than the corresponding unsubstituted or N-methyl substituted amides.Dedicated to Professor Dietrich Schmähl on the occasion of his 60th birthday