人体胎盘脂多糖辅助治疗初治菌阳肺结核患者疗效及细胞因子观察

目的观察人体胎盘脂多糖辅助治疗初治菌阳肺结核疗效及细胞因子的变化.方法将60例初治菌阳肺结核患者随机分为治疗组和对照组,两组各为30例,均用相同的抗结核治疗,治疗组加用人体胎盘脂多糖.结果治疗二个月后,治疗组痰菌阴转率为96.7%,X线病灶吸收好转率93.3%;与对照组80%,70%,相比较差异有显著性(P＜0.05).T淋巴细胞亚群和血清细胞因子IL-4治疗前后及IFN-γ两组比较均有差异显著(P＜0.01),未见明显副作用.结论人体胎盘脂多糖与化疗药物联合应用可提高初治菌阳肺结核疗效,使用安全.并能提高患者细胞免疫,使初治菌阳阴转率高,病灶吸收快.     

创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织内毒素受体CD14的基因表达及抗菌药物的干预效应

目的探讨创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织内毒素受体CD14的基因表达以及头孢哌酮钠和乳酸左旋氧氟沙星联合抗炎治疗对其的干预效应。方法清洁级雄性SD大鼠随机分为11组。第1组：正常对照组（NC组）;第2～6组：创伤弧菌脓毒症组（VV组）,于注射创伤弧菌后不同时点活杀;第7～11组：创伤弧菌脓毒症联合抗炎治疗干预纽（AA组）,注射创伤弧菌后6h予腹腔注射头孢哌酮钠和乳酸左旋氧氟沙星,在注射创伤弧菌后不同时点活杀。尤菌取部分肺组织,采用RT—PCR法测定各组CD14mRNA的表达量。比较各组CD14mRNA的表达量。结果VV组各组大鼠肺组织CD14mRNA表达量均明显高于NC组（均P〈0．05）;AA组大鼠染菌后肺组织CD14mRNA表达量呈逐渐降低趋势,与同时点的VV组相比,AA组大鼠肺组织CD14mRNA表达量均明显降低（均P〈0．05）。结论创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织CD14mRNA表达量明显增高,及早使用头孢哌酮钠和乳酸左旋氧氟沙星可明显减低创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织CD14mRNA的表达水平,有利于抑制炎症反应。     

地塞米松对大鼠内毒素急性肺损伤肺泡灌洗液中白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α含量的影响

目的 探讨地塞米松对大鼠内毒素（LPS）急性肺损伤（ALI）肺泡灌洗液中白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的影响.方法 将48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、急性肺损伤组（内毒素ALI模型组）、地塞米松干预组,每组16只.每组大鼠依据不同的观察时间点（以大鼠气管内滴注LPS的时刻为起始时刻后的1、2、4、8 h 4个时间点）分为4个亚组（n=4）.给予正常对照组气管内滴注0.9%氯化钠溶液 0.3 mL,10 min后股静脉注射0.9%氯化钠溶液 1 mL;急性肺损伤组气管内滴注LPS 0.2 mg/kg（溶于0.3 mL 0.9%氯化钠溶液）,10 min后股静脉注射0.9%氯化钠溶液 1 mL;地塞米松干预组气管内滴注LPS 0.2 mg/kg,10 min后股静脉注射地塞米松注射液3 mg/kg（溶于1 mL 0.9%氯化钠溶液）.各组于1、2、 4、8 h 4个时间点于心脏抽血检测动脉血氧分压（PaO2）;取肺组织进行肺湿/干质量比值（W/D）测定,并采用苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织形态学变化;用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测肺泡灌洗液（BALF）中IL-1β和TNF-α的含量.结果 给予气管内滴注LPS后于1、2、4、8 h观察大鼠动脉血PaO2,急性肺损伤组、地塞米松干预组较正常对照组显著降低,两组PaO2均在4 h时达最低点,各时间点动脉血PaO2对比,地塞米松干预组均显著高于急性肺损伤组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.在LPS致炎后1、2、4、8 h 4个时间点急性肺损伤组、地塞米松干预组各时间点W/D比值均较正常对照组显著增加,两组间比较地塞米松干预组较急性肺损伤组降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）.病理形态学观察可见急性肺损伤组与地塞米松干预组均出现肺水肿、出血、炎性细胞浸润,而地塞米松干预组肺损伤程度较急性肺损伤组减轻.ELISA试验结果显示急性肺损伤组在气管内滴入LPS 1 h后BALF中IL-1β、TNF-α含量迅速升高,4 h时达峰值,地塞米松干预后IL-1β、TNF-α表达在相同时间点均较模型组显著降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）;而正常对照组BALF中IL-1β、TNF-α在不同时间点无明显变化.结论 地塞米松可通过抑制内毒素性大鼠ALI肺组织中IL-1β、TNF-α的表达,改善呼吸氧合功能,减轻肺损伤.     

异丙酚对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白B1启动子转录活性的影响

目的 探讨异丙酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肺泡巨噬细胞(alveolar maerophages,AM)高迁移率族蛋白B1(high mobility group box l protein,HMGB1)启动子转录激活的影响.方法 以基因重组技术将HMGB1启动子克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGl3-Basic,得到重组质粒pGL3-HMGB1P,采用脂质体介导的转染技术将质粒转染AM细胞.根据转染质粒和施加刺激的不同分为以下各组:未转染组;转染pGL3-Basic组;转染pGL3-HMGB1P组;转染pGL3-HMGB1P+LPS(100 mg/L)刺激组;转染pGL3-HMGB1P+LPS(100 mg/L)+异丙酚(5 mg/L)处理组.通过检测荧光素酶活性米观察启动子活性变化,分别采用Western blot和RT-PCR方法检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达.应用单因素方差分析进行不同组别问的比较.结果 酶切和测序结果证实重组体pGL3-HMGB1P构建止确,荧光素酶活性检测显永pGL3-HMGB1P在AM细胞中有效表达.与转染pGL3-HMGB1P组比较,转染pGL3-HMGB1P+LPS刺激组HMGB1启动子的转录活性(423±27),HMGB1蛋白(0.49±0.03)和mRNA(0.48±0.04)的表达均显著增加(P＜0.05);与转染pGL3-HMGB1P+LPS刺激组比较,转染pGL3-HMGB1P+LPS+异丙酚处理组HMGB1启动子的转录活性(207±13),HMGB1蛋白(0.17±0.02)和mRNA(0.13±0.02)的表达均显著降低(P＜0.05).结论 异丙酚在转录水平通过抑制LPS诱导HMGB1启动子的转录激活而影响HMGB1的表达.     

LPS对BALB/C小鼠肾小管上皮细胞TLR4和TNFα、IL-6表达的影响

目的 探讨TLR4在BALB/C小鼠肾小管上皮细胞(TEC)的表达和内毒素/脂多糖(LPS)刺激后TLR4的变化,以及对产生肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法 通过RT-PCR方法 检测TLR4 mRNA、TNFα mRNA和IL-6 mRNA在TEC的表达;流式细胞术检测TEC的TLR4膜蛋白水平;ELISA检测培养的TEC上清中TNFα、IL-6的含量.结果 正常TEC有TLR4 mRNA表达,但TNF αmRNA、IL-6 mRNA表达甚弱.经LPS刺激后,TEC中的TLR4 mRNA、TNF αmRNA和IL-6 mRNA表达均显著增强,TLR4膜蛋白以及培养上清中的TNFα、IL-6水平亦相应增加.结论 TLR4在LPS激活的TEC中表达显著增强,同时TEC分泌的炎症因子TNFα、IL-6的水平也相应上调.     

不同浓度脂多糖腹腔注射对大鼠认知功能的影响

目的 观察脂多糖(LPS)腹腔注射后大鼠认知功能的变化.方法 将18只雄性SD大鼠随机分为A、B、C三组,分别腹腔注射LPS 6、12 mg/kg及生理盐水.通过Morris水迷宫测定大鼠的学习和记忆能力的变化.结果 与C组相比,在LPS腹腔注射后2、4、8、16和24 h,B组登台潜伏期明显延长,靶象限停留时间明显缩短(P<0.05);而A组仅在LPS腹腔注射后8 h时登台潜伏期延长及靶象限停留时间缩短(P<0.05).与C组相比,在LPS腹腔注射后36 h,B组靶象限停留时间缩短,穿台次数明显减少(P<0.05).结论 LPS 12 mg/kg腹腔注射后可引起大鼠认知功能障碍.     

髓系细胞触发受体1的信号传导在小鼠内毒素性急性肺损伤中的研究

目的通过特异性激活或阻断髓系细胞触发受体1（TREM-1）,观察其在小鼠内毒素性急性肺损伤（ALI）中的信号传导通路。方法小鼠随机分为生理盐水对照组、ALI组、单抗组和LP17组。腹腔注射脂多糖（LPS）复制小鼠ALI模型。ALI造模2 h后,单抗组小鼠腹腔注射抗TREM-1mAb（250μg/kg）,LP17组尾静脉注射LP17人工合成肽（3.5 mg/kg）。采用免疫组化法测定各组6、12、24、48 h肺组织中核转录因子κB（NF-κB）活性的表达;采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各时点血清及肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）、可溶性TREM-1（sTREM-1）和TREM-1的含量;观察各组各时点肺组织形态学改变,比较肺组织病理Smith评分。结果在造模后予以抗TREM-1mAb特异性激活TREM-1,可显著提高48 h时间点NF-κB在肺组织中的表达,导致肺组织及血清中促炎因子大量生成,肺组织病理Smith评分上升。在造模后予以LP17人工合成肽特异性阻断TREM-1则可导致肺组织NF-κB活性程度下调,下调促炎因子,同时小幅度上调抗炎因子,使肺组织病理Smith评分下降。结论 TREM-1表达可通过NF-κB激活途径促进炎症因子的生成,启动炎症反应,导致ALI的肺部病理改变。     

赤芍对内毒素性急性肺损伤大鼠肺诱导型血红素氧化酶和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的观察赤芍对内毒素（LPS）性急性肺损伤（ALI）时肺诱导型血红素氧化酶（HO-1）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响，探讨其保护作用及分子机制。方法40只Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素组（LPS组）、赤芍治疗组、赤芍预防组和血晶素组，每组8只。采用大鼠内毒素ALI模型，于LPS滴注后6h取动脉血行血气分析，测定肺组织中HO-1和iNOS的表达，肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量，血清一氧化氮（NO）及肺组织丙二醛（MDA）含量，同时观察肺组织病理形态学改变。结果与对照组比较，LPS组HO-1和iNOS表达显著增强（P〈0．01），肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量、肺组织MDA和血清NO显著增加，而PaO2和HCO3^-明显降低（P〈0．01）；与LPS组比较，赤芍治疗组、赤芍预防组和血晶素组HO-1表达明显升高，而iNOS表达明显降低（P〈0．05），病理学检查显示肺组织损伤程度较LPS组明显减轻。结论肺组织HO-1表达增强是内毒素性ALI的重要应激保护机制，赤芍对内毒素性ALI的防治作用可能与诱导HO-1的表达和抑制肺组织iNOS异常高表达有关。     

CRISPLD2蛋白对内毒素急性呼吸窘迫综合征小鼠的保护作用

目的 探讨CRISPLD2蛋白对内毒素急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory disease syndrome,ARDS)小鼠的保护作用.方法 采用数字表法,将120只健康雄性昆明小鼠随机分为对照组(A组,40只):气道内滴入LPS(5 mg/kg);LPS预处理组(B组,40只):先予小鼠LPS(2 mg/kg)腹腔内注射,注射后第8天气道内滴入LPS(5 mg/kg);重组CRISPLD2处理组(C组,40只):先予小鼠尾静脉注射重组CRISPLD2(50 mg/kg),6 h后气道内滴入LPS(5 mg/kg).(1)采用数字表法将30只小鼠随机分成A1组、B1组、C1组(各组10只),气道滴入LPS 6 h后处死,测定肺湿干重比(W/D)、通透指数(LPI).(2)采用数字表法将90只小鼠随机分成A2组、B2组、C2组(各组20只),观察5 d内小鼠死亡情况,描绘生存曲线.结果 B、C两组W/D、LPI及5 d死亡率显著低于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B组各项检测结果低于C组,差异有统计学意义(P>0.05).结论 提升CRISPLD2蛋白血浓度对内毒素所致ARDS具有保护作用,可降低肺损伤程度,改善肺毛细血管通透性,降低死亡率.     

双异丙酚预处理对内毒素诱导的人中性粒细胞释放白细胞介素-8和肿瘤坏死因子-α及相应mRNA表达的影响

目的 探讨双异丙酚预处理对内毒素(LPS)诱导的健康成年人静脉血中性粒细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)释放白细胞介素(interleukin,IL)-8和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的影响及其应mRNA表达的变化.方法 采集健康成人志愿者静脉血分离提纯PMN,用1640培养液制成悬液;试验分为6组:Ⅰ组(空白对照组,PMN+培养液),Ⅱ组(双异丙酚溶剂对照组,intralipid),Ⅲ组(双异丙酚组,终浓度5 mg/L双异丙酚),Ⅳ组(内毒素组,终浓度1 mg/L LPS),Ⅴ组(内毒素+溶剂对照组,intralipid+终浓度1 mg/L LPS),Ⅵ组(双异丙酚+内毒素组,终浓度5 mg/L双异丙酚+终浓度1 mg/L LPS).加药培养12h后,ELISA法检测培养上清液TNF-α、IL-8的浓度,荧光定量PCR检测PMN IL-8 mRNA、TNF-αmRNA表达量.结果 与Ⅰ组比较,Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组IL-8浓度升高,Ⅳ组TNF-α浓度升高(P<0.05);与Ⅳ组比较,Ⅵ组IL-8和TNF-α浓度降低(P<0.05).与Ⅰ组比较,Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组IL-8mRNA表达上调,Ⅳ组TNF-α mRNA表达上调(P<0.05);与Ⅳ组比较,Ⅵ组IL-8 mRNA和TNF-α mRNA表达下调(P<0.05).结论 双异丙酚预处理可通过抑制内毒素诱导的人PMN释放IL-8、TNF-α,下调JL-8、TNF-α的mRNA表达,对PMN介导的炎症反应具有抑制作用.