赖型钩体flaB2与VR1012中的CpG基序分析

目的：对问号赖型钩端螺旋体（赖型钩体）DNA疫苗[包括内鞭毛蛋白基因（flaB2)和质粒DNA表达载体（VR1012）]的CpG基序（CpG motifs)进行分析，为DNA疫苗免疫机制的阐明和提高DNA疫苗的效能奠定基础。方法：以flaB2与VR1012构建重组DNA的免疫原，对flaB2及VR1012全核苷酸序列进行计算机分析（分类、计数和定位）。结果：CpG的“C”的侧翼为两个嘌呤，“G”的侧翼为两个嘧啶，在flaB2中共3个，分别为GACGCT，GACGTC和GACGCC；在VR1012中共11个，分别为GACGTC1个，GACGCT2个，GACGCC1个，GACGTT1个，GGCGTT2个，GGCGCT2个，GGCGCC1个，AACGCT1个，其中特别重要的TGACGTCA4个和TAACGCCA有1个，位于5'端456－463；509－516；592－599；778－785和486－493；4个TGACGTCA和1个TAACGCCA均位于5'端且相对集中。结论：赖型钩体flaB2与VR1012构成的DNA疫苗含有TGACGTCA等CpG，这些基序又称免疫刺激序列，构成了DNA疫苗中的佐剂。     

沙门氏菌鞭毛蛋白属共同抗原表位的鉴定

应用针对沙门氏菌鞭毛蛋一具有广谱反应性的单抗证实了该蛋白上存在共同抗原表位，进一步鉴定了鞭蛋白基因表达产物，结果同样表明该类共同抗原表位的存在。通过对该共同抗原表位在沙门氏菌属内外的分布规律测定，显示出它的属特异性。用单抗ＣＢＢ和display status     

Helicobacter pylori specific immune response induced by conservative flagellin linear B-cell epitope

AIM:To testify the immunogenicity of a conservative B-cell linear epitope of Helicobacter pylori (H pylori) flagellin A. METHODS: Different programs were used to analyze the secondary structure, molecular hydropathy, and surface accessibility of H pylori flagellin A. Linear B-cell epitopes were estimated based on the structural and physiochemical information. Analysis of residue divergence was proposed to screen a conservative linear epitope. The 29-peptide (Pep29mer) synthesized by chemical method, including the predicted conservative B-cell epitope and a known K2d compatible T-cell epitope, was used to immunize mice, and then H pylori-specific antibodies were detected by ELISA. RESULTS: Based on the analyses of divergent amino acid residues, structural and physiochemical characteristics, it was strongly suggested that the short fragment NDSDGR was the core of a conservative linear epitope in flagellin A. Animals immunized by Pep29mer acquired efficient immune response. In detail, serum H pylori-specific IgA and IgGl increased significantly in immunized group, while IgG2a only had an insignificant change. H pylori-specific IgA in gastrointestinal flushing fluid also increased significantly. CONCLUSION: The conservative short fragment NDSDGR is the core of a linear B-cell epitope of flagellin A.     

细菌鞭毛蛋白免疫调节作用及机制的研究进展

鞭毛是位于某些细菌菌体表面细长呈波状弯曲的具有运动功能的蛋白质附属丝状物,不仅在细菌的运动与致病能力中起到重要作用,而且参与宿主多种免疫调节。鞭毛蛋白(flagellin)是形成鞭毛细丝主要部分的结构蛋白,可以被宿主细胞的Toll样受体5(TLR5)等受体识别,诱导机体免疫应答。目前,鞭毛蛋白因其免疫激活作用被广泛应用...     

组蛋白去乙酰化酶6调控鞭毛重组蛋白A干扰巨噬细胞自噬

目的观察组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)调控嗜肺军团菌鞭毛重组蛋白A(rfla A)对小鼠巨噬细胞自噬相关因子表达的影响,分析其可能的作用机制。方法采用支气管肺泡灌洗法提取C57BL/6J与HDAC6^-/-C57BL/6J两种小鼠巨噬细胞,用小鼠巨噬细胞表面标记物F4/80鉴定;纯化rfla A,CCK-8法检测其对小鼠巨噬细胞半数抑制浓度(IC₅₀),筛选最佳作用浓度用于后续实验;rfla A分别干预C57BL/6J及HDAC6^-/-C57BL/6J小鼠巨噬细胞6、12和24 h,RT-q PCR、Western blot及免疫荧光检测各组自噬相关因子自噬效应蛋白1(Beclin1)、自噬相关蛋白5(ATG5)、自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)、SQSTM1蛋白(P62)的表达水平。结果根据CCK-8结果计算,IC₅₀为0.41μg·μL^-1,最佳作用浓度为0.041μg·μL^-1用于后续实验;RT-q PCR、Western blot、免疫荧光结果显示...     

金黄色葡萄球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门氏菌Flic融合蛋白的构建与免疫原性研究

目的 探讨金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)GapC蛋白与鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium, S.typhimurium)鞭毛蛋白融合蛋白的免疫保护作用。方法 将纯化的Flic-GapC融合蛋白背部皮下接种免疫小白鼠,间隔3周免疫两次。应用间接ELISA方法测定小鼠血清中IgG抗体滴度;在二次免疫后2周,分离小鼠脾脏淋巴细胞,进行淋巴细胞增殖实验,利用Elispot方法检测IFN-γ和IL-4特异性分泌细胞;在二免后3周,用S. aureus Wood46 株对免疫小鼠进行腹腔注射攻毒,观察1周并记录小鼠死亡数目。结果 融合蛋白能够诱导小鼠产生特异性的免疫应答,二免后14 d血清中IgG抗体滴度达到最高(1∶64 000),淋巴细胞刺激指数、分泌IFN-γ和IL-4的细胞数与对照组相比升高(P<0.05),对S. aureus的保护率达到70%。结论 Flic-GapC融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可作为S. aureus的疫苗靶向进行深入研究。     

中国莱姆病螺旋体鞭毛蛋白中央区的基因克隆和表达

目的　对中国莱姆病螺旋体Borreliagarinii基因种参照菌株PD91的鞭毛蛋白中央区的编码基因进行克隆表达 ,对重组鞭毛蛋白作为莱姆病血清学诊断抗原进行初步的研究 ,并进行基因序列和氨基酸序列分析。方法　设计引物 ,用PCR技术获得PD91的鞭毛蛋白中央区的编码基因片段 ,经酶切、连接 ,插入质粒pET 30a中 ,构成重组质粒pET30a mfla,转化到大肠杆菌BL2 1,提取质粒进行酶切、DNA测序和氨基酸序列分析鉴定 ,诱导表达 ,筛选高效表达株 ,应用SDS PAGE和Westernblot鉴定重组蛋白及其抗原性。结果　成功地获得了鞭毛蛋白中央区的编码基因片段和基因重组 ,重组蛋白在宿主菌BL2 1中高效表达。Westernblot结果显示重组鞭毛蛋白的中央区与PD91的鞭毛蛋白具有相同的抗原性。经测序显示该中央区基因片段为鞭毛蛋白基因的 4 0 9～ 786bp ,与北美莱姆病螺旋体标准株B31的DNA碱基序列比较分析 ,同源性 92 %。结论　成功地对中国莱姆病螺旋体Borreliagarinii基因种的鞭毛蛋白中央区进行了克隆表达 ,并证实具有抗原性 ,为我国莱姆病血清学诊断研究提供资料。     

鞭毛蛋白与急性肺损伤研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是急性肺损伤(ALI)的严重阶段，脓毒症(sepsis)是其最多见的病因，虽然近年提出其发病机制的全身炎症反应失控学说，并认为内毒素(LPS)是脓毒症诱导ALI的始动性致病因素，但针对LPS及其激发产生的一些炎症介质等采取的对抗性措施，如应用特异性抗类脂A抗体、细胞因子单抗及可溶性受体等，虽有部分作用，     

肝螺杆菌鞭毛蛋白B基因的克隆和序列测定

目的 对肝螺杆菌BJ 0801鞭毛蛋白B(flagellin B,fla B)基因进行扩增、克隆和序列测定,以探讨其功能.方法 根据已公布的肝螺杆菌ATCC 51449序列,设计合成一对引物,以肝螺杆菌BJ 0801株DNA为模板,扩增fla B基因片段,与pGEM-T载体连接并转化感受态E.coliDH5α,提取的重组质粒经双酶切、PCR、电泳鉴定并进行序列测定.结果 目的 基因片段长度为1 545 bp,与已公布的肝螺杆菌ATCC 51449核苷酸同源性达99%.结论 成功克隆出肝螺杆菌BJ 0801鞭毛蛋白B基因序列,为进一步研究该基因的功能奠定了基础.